Endoglin在前列腺癌研究中的临床意义

前列腺癌是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤之一,是欧美国家男性人口死亡的主要原因之一,我国前列腺癌发病率呈上升趋势,前列腺癌治疗的关键为早期诊断与早期治疗。Endoglin又称内皮糖蛋白,是最可靠的内皮细胞增殖标志物,其在肿瘤新生血管中过度表达。肿瘤患者血清中发现可溶性Endoglin,可用于辅助诊断。通过抑制Endoglin受体可以抑制肿瘤血管的形成,为靶向治疗提供依据。Endoglin标记的微血管密度对实体瘤临床病理分级有重要意义,可用于预后评估。该文针对Endoglin在前列腺癌的发病,诊断治疗及预后方面予以综述。

胎儿生长受限孕妇血清与胎盘Gas6、Endoglin、PLAC-1表达水平及其临床意义

目的分析胎儿生长受限(FGR)孕妇血清及胎盘中生长阻滞特异性蛋白6(Gas6)、Endoglin、胎盘特异性蛋白1(PLAC-1)表达水平,并探讨其临床意义。方法选取2022年5月至2024年9月确山县人民医院收治的81例FGR孕妇为FGR组,按照1∶1配对原则,另选取同期81例无FGR孕妇为对照组。比较两组孕妇的基线资料和胎盘相关指标(Gas6 mRNA、Endoglin mRNA、PLAC-1 mRNA、胎盘厚度、胎盘质量),采用Pearson法分析胎盘各指标表达与胎盘厚度、胎盘质量、新生儿体质量的相关性,比较两组孕妇不同孕期的血清各指标水平,采用Pearson法分析孕妇血清与胎盘各指标表达的相关性,采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清各指标对FGR的预测价值。结果FGR组孕妇的新生儿体质量、PLAC-1 mRNA、胎盘厚度、胎盘质量[(2.13±0.32)kg、0.50±0.11、(1.90±0.66)cm、(0.38±0.10)kg]明显低于对照组[(3.23±0.29)kg、1.00±0.06、(2.51±0.57)cm、(0.59±0.08)kg],胎盘Gas6 mRNA、Endoglin mRNA(1.42±0.24、1.38±0.16)明显高于对照组(1.04±0.05、1.06±0.07),差异均有统计学意义(P<0.05);胎盘Gas6 mRNA、Endoglin mRNA与胎盘厚度、胎盘质量、新生儿体质量呈负相关(P<0.05),PLAC-1 mRNA与胎盘厚度、胎盘质量、新生儿体质量呈正相关(P<0.05);FGR组孕妇孕早、中、晚期的血清Gas6、Endoglin明显高于对照组,PLAC-1明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);孕早、中、晚期血清Gas6、Endoglin、PLAC-1表达与对应指标胎盘中表达量均呈正相关(P<0.05);经ROC分析结果显示,孕早、中、晚期血清Gas6、Endoglin、PLAC-1联合预测FGR的曲线下面积(AUC)分别为0.890、0.913、0.936,均优于单一指标,且血清各指标联合预测FGR的AUC随着孕期的推进依次增大,至孕晚期联合预测AUC为0.936,为最大。结论FGR孕妇血清及胎盘组织中Gas6、Endoglin、PLAC-1表达异常,且血清各指标联合检测对FGR具有一定预测价值,可作为临床早期评估FGR的辅助指标。

Metrnl、S⁃endoglin与初发Graves病患者甲状腺激素水平和ATD治疗后复发的关系

目的探讨血清镍纹样蛋白(Metrnl)、可溶性内皮糖蛋白(S⁃endoglin)与初发Graves病(GD)患者甲状腺激素和抗甲状腺药物(ATD)治疗后复发的关系。方法选取2018年1-12月期间张家港市中医医院收治的初发GD患者135例作为GD组。另选择同期于本院体检健康的100名志愿者作为对照组。检测两组血清Metrnl、S⁃endoglin水平及甲状腺激素指标[促甲状腺激素(TSH)、游离甲状腺素(FT_(4))、游离三碘甲状腺原氨酸(FT_(3))、促甲状腺素受体抗体(TRAb)]水平。初发GD患者均予以ATD治疗。停药后随访2年,观察患者的复发情况,根据是否复发分为复发组(n=70)与未复发组(n=65),比较复发组与未复发组血清Metrnl、S⁃endoglin水平及甲状腺激素指标水平。使用Pearson法检验血清Metrnl、S⁃endoglin与TSH、FT_(4)、FT_(3)、TRAb水平的相关性。收集GD患者的一般资料,单因素及多因素logistic回归分析影响GD患者ATD治疗后复发的影响因素。结果GD组血清Metrnl、TSH水平低于对照组,血清S⁃endoglin、FT_(4)、FT_(3)、TRAb水平高于对照组,差异均有统计学意义(t=24.511、23.642、16.901、21.902、23.855、17.903,P均<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清Metrnl水平与TSH水平成正相关(r=0.679,P<0.05),与FT_(4)、FT_(3)及TRAb均成负相关(r=-0.669、-0.710、-0.626,P均<0.05);血清S⁃endoglin水平与TSH水平成负相关(r=-0.515,P<0.05),与FT_(4)、FT_(3)及TRAb均成正相关(r=0.488、0.523、0.524,P均<0.05)。复发组血清Metrnl、TSH水平低于未复发组,血清S⁃endoglin、FT_(4)、FT_(3)及TRAb水平高于未复发组,差异均有统计学意义(t=8.852、9.044、6.474、3.166、4.347、3.893,P均<0.05);两组性别、年龄、发病季节、甲亢家族史、甲状腺肿疾病史、吸烟史、小剂量药物维持时间、GD严重程度比较,差异均无统计学意义(P均>0.05)。多因素logistic回归分析显示,血清Metrnl、TSH低水平及血清S⁃endoglin、FT_(4)、FT_(3)及TRAb高水平均为影响GD患者停药后复发的危险因素(P均<0.05)。结论初发GD患者血清Metrnl水平下降、S⁃endoglin水平升高,可导致甲状腺激素水平异常表达,同时二者均为影响ATD治疗后复发的危险因素。

Survivin、Endoglin蛋白表达与乳腺癌血管生成

目的:探讨乳腺癌中Survivin,Endoglin蛋白表达与乳腺癌血管生成的相关性。方法:通过免疫组化En-Vision法,检测Survivin,Endoglin在100例乳腺癌组织、30例乳腺增生组织、56例正常乳腺组织中的表达。结果:Survivin在正常乳腺组织、乳腺增生组织及乳腺癌组织中的阳性率分别为3.6%、6.7%、76.0%,后者的阳性率明显高于前两者(P<0.005);Survivin表达在有淋巴结转移的乳腺癌中明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Survivin蛋白的表达在乳腺癌高、中、低分化组织中依次上调,低分化、中分化乳腺癌组织中阳性率较高分化显著升高,差异有显著性(P<0.01);Endoglin在正常乳腺组织、乳腺增生组织及乳腺癌组织中的阳性率分别为0、3.33%、53.0%,后者的阳性率明显高于前两者(P<0.05);Endoglin在有淋巴结转移的乳腺癌中表达明显升高(P<0.05);Survivin、Endoglin表达阳性组中MVD均显著高于表达阴性组(P<0.05);Survivin表达与Endoglin表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:Sur-vivin与Endoglin在乳腺癌组织中表达上调,二者在乳腺癌的发生发展及肿瘤血管生成过程中发挥协同作用。

抗Endoglin单克隆抗体对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的影响

目的:观察抗Endoglin mAb对胰腺癌生长的影响.方法:建立裸小鼠人类胰腺癌细胞动物模型,将44只裸小鼠随机分为抗体组和生理盐水组,抗体组在接种胰腺癌细胞的同时,经腹腔注射抗Endoglin mAb;生理盐水组在接种胰腺癌细胞的同时,经腹腔注射生理盐水,计算肿瘤体积和抑瘤率,并做组织病理学检查.结果:抗体组小鼠一般情况明显比注射生理盐水组好;抗Endoglin mAb可抑制人类胰腺癌细胞株PC-3的生长,抑瘤率为67.13%,抗体组与生理盐水组比较肿瘤明显受抑制(P<0.05).结论:抗Endoglin mAb对人类胰腺癌细胞株PC-3的生长有明显的抑制作用,有希望作为胰腺癌的生物基因治疗方法.

食管鳞癌中TGF-β及其受体调节成分Endoglin/CD105的表达

目的:研究食管鳞癌中TGFβ和Endoglin/CD105的表达及在血管生成中的作用.方法:采用RNA酶保护性分析和免疫组织化学方法对30例食管癌高发区食管癌患者的癌组织和癌旁组织TGFβ和Endoglin/CD105mRNA和蛋白表达水平进行检测.结果:食管癌组织中TGFβ1和TGFβ3mRNA较癌旁组织显著增高(P<0.05),TGFβ2无变化.食管癌组织中Endoglin/CD105mRNA较癌旁组织也显著升高(P<0.05).TGFβ3mRNA与Endoglin/CD105mRNA的相关分析显示有相关关系.结论:TGFβ和Endoglin/CD105参与了食管鳞癌血管生成过程的调节,Endoglin/CD105不仅是细胞膜上TGFβ受体中调节TGFβ生物学功能的一个重要分子,而且是新生血管的重要标志.因此调节Endoglin/CD105的功能可能成为抗血管治疗中的一个潜在的、具有较宽生物防治谱的靶点.

人血白蛋白联合小剂量肝素治疗重度子痫前期的临床疗效及其对胎盘组织中Endoglin、VEGF、Flt-1表达的影响

目的：研究人血白蛋白联合小剂量肝素治疗重度子痫前期的临床疗效及其对胎盘组织Endoglin，血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及其受体蛋白（Flt-1）表达的影响。方法选取2012年10月～2014年1月在潍坊市益都中心医院产科收治的重度子痫前期患者60例，随机分为实验组与对照组，每组各30例。对照组予降压、扩容、利尿等常规治疗；实验组在治疗组的基础上，每日予肝素25 mg静脉滴注，5％人血白蛋白10 g静脉滴注，每天1次，连续治疗7 d。另选取本院同期住院行剖宫产分娩的正常足月妊娠孕妇30例作为空白组。疗程结束后，对比治疗前后实验组与对照组患者的平均动脉压（Kpa）及24 h尿蛋白定量，观察临床疗效；镜下观察治疗后空白组、对照组及实验组胎盘组织中 Endoglin、VEGF、Flt-1的表达情况，比较 Endoglin、VEGF、Flt-1在子痫前期患者体内的阳性表达率。结果治疗后2组平均动脉压、尿蛋白均有所改善，与对照组相比，实验组患者平均动脉压、尿蛋白改善更明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。治疗后镜下观察空白组、对照组及实验组中，Endoglin、VEGF与Flt-1的表达部位大致相同；与空白组比较，对照组及实验组胎盘组织中Endoglin、VEGF蛋白、Flt-1的阳性表达率较高，差异有统计学差异（P＜0.05）；与对照组比较，实验组中Endoglin、VEGF蛋白、Flt-1的阳性表达率更高，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论人血白蛋白联合小剂量肝素治疗重度子痫前能有效改善患者Kpa、24 h尿蛋白定量，降低胎盘组织中Endoglin VEGF和Flt-1蛋白表达。

猪endoglin重组蛋白疫苗和低剂量顺铂联合治疗肿瘤研究

目的:观察重组猪endoglin胞外段蛋白疫苗和化疗药物顺铂联合治疗是否具有更好的抗肿瘤作用。方法:在LL/2肺癌和CT26结肠腺癌二个肿瘤模型中观察重组猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗(Cis-pEDG)、顺铂(Cis)和疫苗(pEDG)单独治疗及非治疗(生理盐水,NS)组荷瘤小鼠不同时间段的肿瘤体积和生存时间,抽血检测肝、肾功能,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长并计算肿瘤微血管密度,Westernblot方法检测各组荷瘤小鼠血清中是否含有抗自身endoglin的抗体,ELISPOT方法检测荷瘤小鼠脾脏中分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞,TUNEL检测肿瘤细胞凋亡。结果:和Cis、pEDG和NS相比,Cis-pEDG联合治疗组荷瘤小鼠的肿瘤体积明显减少,生存时间明显延长,肿瘤微血管密度明显减少,肿瘤细胞凋亡明显增加,3个指标计算的协同指数均大于1。Cis-pEDG和pEDG治疗组小鼠血清中均含有抗小鼠endoglin的抗体,两组荷瘤小鼠的脾脏中含有的分泌抗小鼠endoglin的B淋巴细胞数量明显高于Cis和NS组,而Cis和NS组之间的B淋巴细胞数量无显著性差异;各组荷瘤小鼠外周血白细胞及肝、肾功能没有明显异常。结论:猪endoglin蛋白疫苗和小剂量顺铂联合治疗没有明显的不良反应,但具有协同抗肿瘤作用,小剂量顺铂治疗不导致免疫抑制,二者联合是一种行之有效的肿瘤治疗新策略。

卵巢上皮性肿瘤中Endoglin mRNA的表达及意义

目的探讨Endoglin mRNA在卵巢上皮性肿瘤中表达的差异及其意义。方法采用半定量RT-PCR方法测定卵巢囊腺瘤和卵巢癌组织中的Endoglin mRNA表达。结果Endoglin mRNA在卵巢癌和卵巢囊腺瘤组织中均有表达,但卵巢癌组织中Endoglin mRNA表达水平明显高于卵巢囊腺瘤,其差异有统计学意义,病理Ⅲ级明显高于Ⅰ、Ⅱ级。结论卵巢上皮性肿瘤无论良性或恶性,均有Endoglin mRNA表达,但Endoglin mRNA在卵巢癌组织中表达水平与卵巢囊腺瘤相比明显增高。Endog-lin在卵巢癌组织中表达随着肿瘤的分化程度下降而上调,Endoglin基因在卵巢上皮性癌中的表达与肿瘤的恶性程度成正比,因而Endoglin可能与卵巢上皮肿瘤细胞恶化密切相关。

应用噬菌体肽库筛选Endoglin的结合肽

目的利用噬菌体12肽库筛选可与Endoglin结合的活性小分子肽。方法以rhEndoglin为靶分子,对噬菌体12肽库进行亲和筛选。经过3轮筛选,随机挑取16个克隆,双夹心ELISA法鉴定其亲和性,测定亲和力高的阳性噬菌体克隆的DNA序列,推断出与噬菌体外壳蛋白融合的氨基酸序列,竞争抑制实验检测优势克隆的特异性。结果竞争性ELISA显示6个噬菌体克隆与rhEndoglin有较强的结合活性,经测序获得5种不同的多肽序列,其中2个克隆的氨基酸序列为:AHKHVHHVPVRL。结论噬菌体随机肽库技术可以获得Endoglin结合肽的蛋白质序列。

Endoglin基因插入缺失多态性与脑出血的相关研究

目的 国外学者研究发现 Endoglin基因多态性与散发性脑出血有关 ,国内尚未见报道 ,我们的研究探讨了 Endoglin基因插入 /缺失 (I/ D)多态性与中国人群脑出血发病的相关关系。方法 利用等位基因特异性聚合酶链反应技术分析了 15 0例原发性脑出血患者和 15 0例非脑血管病对照组 Endoglin基因的多态性位点频率。结果 在所研究的人群中 Endoglin基因第 7内含子的基因型全为缺失型纯合子 ,没有插入型的等位基因。结论 Endoglin基因插入 /缺失多态性与中国人群的脑出血没有相关关系。

汉族人endoglin基因多态性与颅内动脉瘤发病的关系

目的研究汉族人中endoglin基因第7内含子的插入多态性与颅内动脉瘤发病率的关系。方法利用聚合酶链式反应(PCR),琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)及PCR产物直接测序等方法比较94例颅内动脉瘤患者与116例正常对照者endoglin基因第7内含子内插入型基因的构成。结果颅内动脉瘤组与对照组中endoglin基因第7内含子内插入型基因的构成差异有统计学意义,前者(36.2%)明显高于后者(12.1%)(χ2=8.553,P=0.005)。动脉瘤组中插入型基因的等位基因频率为24.5%(46/188),而正常对照组为6.03%(14/232),经χ2检验,二者的差异有统计学意义(χ2=14.409,P=0.000)。结论汉族人的endoglin基因异质性可能与颅内动脉瘤的发生相关。

抗rhEndoglin单链抗体的可溶性表达、纯化及活性鉴定

目的研制抗rhEndoglin-scFv(single chain variable fragment)抗体。方法将具有抗原结合活性的抗rhEndoglin-scFv噬菌体感染大肠杆菌E.coliHB2151,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot鉴定分析。用HiTrap Anti-ETag柱亲和层析纯化scFv抗体,HiTrap Desalting柱行缓冲液更换。用间接ELISA测scFv抗体的亲和常数,用竞争性ELISA和间接免疫荧光检测scFv抗体的抗原结合活性。结果成功诱导表达和纯化抗rhEndoglin-scFv抗体,表达产物主要位于周质腔中,相对分子质量约为2.9×104。测定scFv的亲和常数为(2.14±0.84)×107L/mol,它能与抗rhEndoglin单抗竞争性结合同一抗原表位,且竞争作用随scFv浓度增加而加强。间接免疫荧光实验证实该scFv抗体能识别HUVEC胞膜表达的Endoglin抗原。结论制备的抗rhEndoglin-scFv抗体具有与rhEndoglin和天然Endoglin结合的能力,可望将其用作肿瘤诊断和治疗的靶向载体。

猪endoglin胞外段DNA疫苗诱导抗小鼠结肠癌免疫反应

背景与目的:研究表明,endoglin是肿瘤血管生成的标志性分子,用抗endoglin单克隆抗体被动免疫治疗可以有效抑制肿瘤生长,而异种DNA疫苗可以打破自身同源分子的免疫耐受。因此,本研究用猪endoglin胞外段真核表达质粒(ppEDG)作为异种DNA疫苗,了解该DNA疫苗是否具有抑制小鼠结肠癌生长的作用,并探讨其作用的免疫学机理。方法:观察免疫治疗后的荷瘤小鼠肿瘤体积和生存情况,用免疫组化方法(抗CD31)观察肿瘤组织血管生长并计算肿瘤微血管密度,用Westernblot和ELISA方法检测荷瘤小鼠免疫治疗后的血清是否含有抗自身endoglin的抗体以及抗体亚型,用ELISPOT方法检测荷瘤小鼠脾脏中分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞。结果:肿瘤接种18天后,ppEDGDNA疫苗主动免疫治疗组肿瘤体积明显小于空质粒(e-p)对照组及生理盐水对照组(P<0.05),存活时间明显延长(P<0.001)。ppEDG组、e-p组和生理盐水组肿瘤组织微血管密度计数分别为19.2±4.5、76.9±14.4和81.4±16.9(P<0.001)。治疗组小鼠血清中含有抗自身endoglin的抗体,抗体亚型主要为IgG1和IgG2b。三组小鼠分泌抗自身endoglin抗体的B淋巴细胞数分别为82.5±14.1、3.6±1.3和4.7±2.0(P<0.001)。结论:ppEDGDNA疫苗诱导抗自身endoglin抗体产生,从而抑制肿瘤血管生成和肿瘤生长。

Endoglin与血管内皮生长因子和血管内皮生长因子受体2及基质金属蛋白酶9联合表达与宫颈癌血管生成的关系

目的探讨Endoglin、血管内皮生长因子（VEGF）、血管内皮生长因子受体2（KDR）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）联合表达在宫颈癌局部血管生成中的作用。方法采用免疫组织化学SP法检测15例正常宫颈上皮（NCE）、18例宫颈上皮内瘤变（CIN）和75例宫颈癌（ICC）组织Endoglin、VEGF、KDR及MMP-9表达，并检测CD34标记的微血管密度（MVD）。结果Endoglin、VEGF、KDR和MMP-9在NCE、CIN及ICC组的阳性率分别为6．7％、38．9％及64．O％；26．7％、61．1％及77．3％；13．3％、61．1％及69．3％和20．0％、55．6％及81．3％，从NCE到CIN再到ICC组，Endoglin、VEGF、KDR及MMP-9的阳性率均显著升高（P〈0．05）。宫颈癌组织MVD均分别与Endoglin（r=0．499，P〈0．01）、VEGF（r=0．602，P〈0．01）、KDR（r=0．331，P〈0．01）及MMP-9（r=0．287，P〈0．05）表达显著正相关，并且Endoglin、VEGF、KDR及MMP-9同时均阳性表达者，其MVD升高更为显著（P〈0．01）。结论Endoglin、VEGF、KDR及MMP-9联合表达在上调宫颈癌局部肿瘤血管生成中起重要作用，4个指标均过度表达，血管生成能力显著增强。

抗人Endoglin胞外段单链抗体噬菌体表面呈现文库的构建/筛选及鉴定

目的构建抗人Endoglin胞外段的特异性单链抗体(single chain variable fragment,scFv)噬菌体表面呈现文库。方法用重组人Endoglin(recombinant human Endoglin,rhEndoglin)胞外段蛋白免疫Balb/c小鼠,提取脾脏组织mRNA,经RT-PCR分别扩增出VH(heavy chain variable region)、VL(light chain variable region)基因,经Linker连接成scFv基因,再把scFv基因重组到噬菌粒载体pCANTAB5E,转化到大肠杆菌TG1,经辅助噬菌体M13KO7拯救后建成噬菌体呈现文库。用rhEndoglin对文库进行5轮吸附-洗脱-富集panning淘筛,选择ELISA结果最强的克隆提取质粒并测序。结果经过筛选,随机挑取94个克隆进行ELISA检测,37个克隆呈阳性。序列分析表明,该scFv DNA全长738bp。其中VH基因366bp,编码122个氨基酸残基,VL基因327bp,编码109个氨基酸残基,它们之间通过(Gly4Ser)3组成的15肽连接。结论成功构建了抗人Endoglin胞外段scFv噬菌体表面呈现文库,并筛选获得一个能与Endoglin特异结合的重组噬菌体克隆。

VEGF与endoglin在CIA大鼠滑膜组织中表达增高

目的探讨胶原性关节炎大鼠滑膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)及endoglin在蛋白水平和分子水平(mRNA)的表达与意义。方法皮下给Wistar大鼠多点注射牛Ⅱ型胶原建立胶原诱导关节炎模型。观察关节肿胀和滑膜的病理学改变,用免疫组化法和RT-PCR技术检测VEGF与endoglin的蛋白及分子水平的表达。结果大部分鼠在胶原致敏后两周左右发病,主要表现为关节红肿,活动受限。VEGF与endoglin在CIA大鼠滑膜组织中表达增高(P<0.05),且两者在CIA滑膜中的蛋白表达和分子表达呈正相关(r=0.481,P<0.05)。结论 VEGF和en-doglin共同参与了类风湿性关节炎(RA)的病理过程,它们相互促进,相互影响,调控着RA的病理过程,它们是RA滑膜增生,浸润,关节破坏的关键因子。

Endoglin(CD105)在肿瘤新生血管靶向诊断及治疗中的应用

Endoglin(CD105)是最可靠的内皮细胞增殖标志物,在肿瘤新生血管中过表达。基于Endoglin的靶向显像可以了解恶性肿瘤的血管生成情况,并为新生血管靶向治疗提供依据。在生物治疗方面,单克隆抗体在恶性肿瘤治疗中的地位越来越重要,因而基于抗Endoglin抗体的肿瘤靶向治疗在近年来受到广泛关注。本文将对基于Endoglin的靶向诊断及治疗作一简要综述。

Endoglin基因沉默对卵巢癌微血管内皮细胞干扰效应的研究

目的:构建Endoglin基因siRNA的表达载体,转染至原代培养的卵巢癌微血管内皮细胞(ovarian carcinoma-derived microvascularendothelialcells,ODMECs),并观察其对ODMECs的干扰效应,为探讨使用siRNA抗卵巢癌血管生成的可行性提供实验基础。方法:根据siRNA表达载体的设计原则,设计并合成两个靶基因序列,寡核苷酸退火后插入到pGenesil-1载体中,并对重组质粒进行测序鉴定,证实Endoglin真核表达载体构建成功,插入片段测序结果与合成的寡核苷酸序列一致。将重组真核表达质粒pGenesil-ENG1、pGenesil-ENG2采用脂质体法转染原代ODMECs细胞,应用半定量RT-PCR观察转染后48h重组质粒对EndoglinmRNA表达的影响;MTT法检测转染后ODMECs细胞增殖的变化;并且通过光镜观察转染pGenesil-ENG1后,对ODMECs体外二维管腔样结构形成的影响。结果:将构建成功的Endoglin基因siRNA表达载体pGenesil-ENG1和pGenesil-ENG2转染至ODMECs细胞,48h后同阴性质粒pGenesil-H和未转染组相比,二者均可引起靶基因表达水平的显著性下降。转染了pGenesil-ENG质粒的ODMECs,其生长较未转染组和阴性质粒pGenesil-H明显受到抑制(P<0.01);此外,转染了pGenesil-ENG1质粒的ODMECs体外二维血管腔样结构的形成较对照组亦有明显减少(P<0.01)。结论:成功构建了Endoglin基因siRNA表达载体,转染至ODMECs后可下调Endoglin在靶细胞中的表达,并且前者能够抑制ODMEcs的增殖和体外二维管腔样结构的形成。为进一步研究采用RAN干扰技术进行卵巢癌血管生成的治疗奠定了基础,同时也为抗卵巢癌血管生成的治疗摸索了有效的基因靶点。

TGF-β1和endoglin在乳腺癌发生发展过程中的表达及意义

目的探讨TGF-β1和endoglin在乳腺癌发生发展过程中的表达及意义。方法免疫组化(S-P)方法,对30例乳腺正常组织、50例非典型性增生组织、50例原位癌组织和80例浸润性癌组织进行TGF-β1及endoglin蛋白的检测。采用RT-PCR方法检测endoglin mRNA的表达。结果 Endoglin蛋白标记的微血管密度值(MVD值)、endoglin mRNA以及TGF-β1蛋白在正常乳腺组、不典型增生组、原位癌组及浸润性癌组两两比较差异有统计学意义(P<0.05);不典型增生、原位癌及浸润性癌组织中TGF-β1蛋白表达阳性组中endoglin蛋白标记的MVD值及endoglin mRNA均显著高于TGF-β1表达阴性组(P<0.05)。结论 TGF-β1蛋白及endoglin mRNA和蛋白表达与肿瘤的进程密切相关,提示血管生成可能在乳腺癌发生发展过程中起重要作用,同时也提示TGF-β1可能对乳腺癌发生发展有促进作用,其对乳腺癌的早期诊断和判断预后有重要意义。