KiSS-1基因转染子宫内膜癌HEC-1B细胞系及其意义的研究

目的:构建KiSS-1基因质粒并将KiSS-1基因质粒导入子宫内膜癌细胞HEC-1B中,建立稳定、高效和低毒的转染方法,观察其转染率及表达情况。方法:采用基因转染技术用阳离子脂质体介导将高纯度的KiSS-1质粒转染到子宫内膜癌细胞株中。用RT-PCR和Western blot技术检测转染前后肿瘤细胞的KiSS-1 mRNA、MMP-9 mRNA和蛋白Metastine的表达。结果:1)使用重组的真核表达载体,将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌细胞中,并获得稳定表达。2)子宫内膜癌细胞KiSS-1基因转染前后表达水平有明显差异,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中KiSS-1 mRNA蛋白的相对表达量分别为0.1231±0.0366、0.1486±0.0287和0.5060±0.0198,Metastin蛋白的相对表达量分别为0.1549±0.0189、0.1497±0.0029和0.4469±0.0078,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=161.547,P=0.000;F=607.993,P=0.000。3)转染后的子宫内膜癌细胞的MMP-9 mR-NA表达下调,空白对照组、空质粒组和质粒转染组HEC-1B细胞中MMP-9 mRNA的相对含量分别为0.3576±0.0501、0.3500±0.0254和0.1677±0.0014,质粒转染组与其他两组相比,差异有统计学意义,F=32.963,P=0.001。结论:利用脂质体作为载体将KiSS-1基因转染到子宫内膜癌HEC-1B细胞是可行、有效和稳定的;转染后细胞的KiSS-1 mRNA表达明显增强,MMP-9 mRNA的表达明显降低;KiSS-1基因可能参与抑制子宫内膜癌细胞的侵袭和转移,可考虑为子宫内膜癌基因治疗的一个有意义的基因。

单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响及其分子生物学机制

目的探讨单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响及其分子生物学机制。方法收集2015年3月至2016年5月的各类型子宫内膜病变病例180例,增殖期、分泌期、单纯增生期、复杂增生期、不典型增生和Ⅰ型子宫内膜癌病例各30例。采用免疫组织化学方法分析各类型子宫内膜病变中的巨噬细胞增殖、浸润程度。采用CCK方法检测分析单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力的影响程度。采用Transwell法来检测分析宫内膜癌细胞系RL952对单核巨噬细胞系THP-1的招募能力。采用Western blot技术检测分析单核巨噬细胞系THP-1对子宫内膜癌细胞系RL952中的Cyclin D1和MMP-2的表达水平的影响情况。结果单核巨噬细胞系THP-1的增殖、浸润数目与子宫内膜癌细胞系RL952增殖和侵袭能力呈正相关性,差异具有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌细胞系RL952对单核巨噬细胞系THP-1具有招募作用。随着单核巨噬细胞系THP-1的增殖、浸润数目的增加,子宫内膜癌细胞系RL952中的Cyclin D1和MMP-2表达水平随着时间增加而相应上调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论单核巨噬细胞系THP-1浸润为子宫内膜癌发生的机制之一。

四种人子宫内膜癌细胞系中IGFBP-rP1的定位及表达

目的:检测不同子宫内膜癌细胞系中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-r P1)的定位及表达情况。方法:体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa、RL95-2、HEC-1B和HEC-1A,细胞免疫荧光法检测IGFBP-r P1在4种子宫内膜癌细胞中的定位;实时荧光定量PCR法与Western blot法检测4种子宫内膜癌细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白的表达水平。结果:细胞免疫荧光染色示IGFBP-r P1主要定位于4种子宫内膜癌细胞的胞浆。子宫内膜癌Ishikawa、RL95-2细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达水平明显高于HEC-1A、HEC-1B细胞(P<0.001)。HEC-1A细胞中IGFBP-r P1 mRNA及蛋白表达量最低,Ishikawa细胞中表达量最高(P均<0.05)。结论:4种子宫内膜癌细胞系中均表达IGFBP-r P1。

丁酸钠对子宫内膜癌细胞增殖及NDRG1蛋白表达的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠(NaB)对子宫内膜癌细胞株HEC-2B增殖及N-myc下游调节基因1(NDRG1)蛋白表达的影响。方法采用MTT比色法检测不同浓度的NaB处理HEC-2B细胞48、72h后细胞的生长情况;荧光倒置显微镜下观察NaB处理48h后细胞的形态改变;Western blotting法检测NaB处理48h后细胞中NDRG1蛋白的表达情况。结果 NaB能够抑制HEC-2B细胞的增殖,并呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。不同浓度NaB作用48h后,荧光倒置显微镜下HEC-2B细胞出现细胞凋亡的特征性改变。随着NaB浓度的增加,HEC-2B细胞中NDRG1蛋白的表达水平逐渐下调。结论 NaB能够抑制子宫内膜癌HEC-2B细胞的增殖,可能与下调NDRG1蛋白的表达有关。

雌激素及其阻滞剂对Ishikawa细胞中ETS-1和VEGF调控的研究

目的:探讨雌激素及其阻滞剂对子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞中转录因子ETS-1和血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的调控机制。方法:用RT-PCR法检测分别使用不同浓度雌激素、雌激素受体阻滞剂氟维司群处理后Ishikawa细胞中ETS-1基因表达水平的变化;用细胞爬片免疫组化法检测分别使用这两种不同浓度药物后Ishikawa细胞中ETS-1与VEGF表达的差别;采用ELISA法检测分别使用两种不同浓度的药物后Ishikawa细胞培养液中VEGF蛋白表达量的变化。结果:(1)随着雌激素浓度增加,ETS-1基因表达上调(FP=3.84,P<0.05);随着氟维司群浓度增加,ETS-1基因表达下调(FP=7.01,P<0.01);(2)随着雌激素浓度增加,ETS-1(FP=3.72,P<0.05)和VEGF(FP=3.68,P<0.05)蛋白质水平表达都增加;随着氟维司群浓度增加,ETS-1(FP=4.37,P<0.05)和VEGF(FP=4.09,P<0.05)蛋白质水平的表达都减少;(3)随着雌激素浓度增加,分泌型VEGF蛋白表达量上升(FP=3.91,P<0.05);随着氟维司群浓度增加,分泌型VEGF蛋白表达量下调(FP=7.34,P<0.01)。结论:雌激素可促进Ishikawa细胞中ETS-1和VEGF的表达,VEGF表达与ETS-1表达呈正相关。

白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移的影响

目的探讨白细胞介素(interleukin,IL)-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶(matric metalloproteinases,MMP)-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移能力的影响。方法选择对数生长期人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,在无血清培养基中加入白细胞介素-17终浓度分别为1 ng/mL,10 ng/mL,100 ng/mL和无血清培养(空白对照)进行干扰处理后,分别纳入干扰组(干扰组1、干扰组2、干扰组3)及对照组。采用免疫荧光细胞化学方法检测子宫内膜癌细胞株HEC-1-B是否表达白细胞介素-17特异性受体C(IL-17RC)蛋白。采用逆转录荧光定量PCR法检测不同浓度白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9 mRNA基因表达水平的影响。采用transwell小室检测不同浓度白细胞介素-17干预后,子宫内膜癌细胞株HEC-1-B侵袭转移能力的变化。结果人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B高表达特异性白细胞介素-17受体C。白细胞介素-17各浓度干扰组(干扰组1,干扰组2,干扰组3)与对照组比较,干扰组基质金属蛋白酶-9 mRNA表达增加,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组基质金属蛋白酶-2 mRNA表达无明显变化;干扰组穿膜细胞数明显增多,与对照组比较,差异有显著意义(P<0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组2与干扰组3穿膜细胞数较干扰组1增多,差异有显著意义(P<0.05)。结论白细胞介素-17能增强基质金属蛋白酶-9基因表达,促进子宫内膜癌细胞侵袭转移。

华蟾素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞株凋亡和增殖的影响

目的:探讨华蟾素对体外培养子宫内膜癌HEC-1-B细胞凋亡、增殖以及侵袭能力的影响。方法:体外培养HEC-1-B细胞,经不同浓度华蟾素(0.2mg/ml、2mg/ml和20mg/ml)干预24h后,采用MTT法观察细胞生长情况,流式细胞术分析细胞凋亡,Transwell小室检测细胞体外侵袭能力。结果:华蟾素能有效抑制HEC-1-B细胞生长,诱导细胞凋亡。未经华蟾素处理的细胞凋亡率仅为2.5%,经0.2mg/ml、2mg/ml、20mg/ml的华蟾素作用24h后,细胞凋亡率分别为7.4%、44.3%和78.5%,趋势卡方检验x2=165.4983,P<0.0001。HEC-1-B细胞经华蟾素作用后,细胞侵袭能力降低。在高浓度时,华蟾素有可能存在细胞毒作用。结论:华蟾素能通过诱导HEC-1-B细胞凋亡,从而抑制HEC-1-B细胞生长,并且降低细胞的侵袭能力。

咪唑诱导的人子宫内膜癌细胞HEC-1B空泡化现象研究

咪唑作为一种弱碱性物质,处理动物子宫内膜细胞后,可诱导其产生空泡化现象,进而影响其生殖生理功能。本研究使用人子宫内膜癌细胞HEC-1B作为模型,使用咪唑处理导致细胞空泡化后探讨空泡化产生的生理机制。通过基因芯片分析、荧光定量PCR检测、激光共聚焦显微镜观察等方法进行研究。结果表明:咪唑处理人子宫内膜癌细胞HEC-1B后,空泡型质子泵(V-ATPase)亚基V0D2基因表达量上调。使用荧光定量PCR验证芯片结果,V-ATPase亚基V0D2 mRNA表达量有所上调。对V-ATPase另外一个亚基V1E1基因进行荧光定量PCR,其mRNA表达量也有所上调。使用V-ATPase抑制剂巴弗洛霉素A1和咪唑共同处理人子宫内膜癌细胞HEC-1B后,通过吖啶橙染色,激光共聚焦显微镜观察,咪唑诱导的空泡被显著抑制。上述结果证明了V-ATPase在咪唑诱导的细胞空泡化中的重要作用。