西洋参茎叶总皂苷通过抑制内质网应激相关细胞凋亡减轻大鼠急性心肌梗死后心室重构

目的:研究西洋参茎叶总皂苷(Panax quinquefolium saponin,PQS)对大鼠急性心肌梗死(AMI)后心室重构的作用及其机制。方法:健康雄性SD大鼠90只,随机分为假手术(sham)组、AMI组、牛磺酸(300 mg.kg-1.d-1)组及PQS(50、100和200 mg.kg-1.d-1)组(n=15)。结扎大鼠左冠状动脉前降支复制AMI模型。术后第2天开始,各用药组用饮用水10 mL.kg-1.d-1溶解药物灌胃,sham组及AMI组予等量饮用水灌胃。术后4周,超声心动图检测左室结构及功能变化;TTC染色法测定心肌梗死范围;比色法测定非梗死区心肌组织羟脯氨酸含量;TUNEL法检测非梗死区心肌细胞凋亡率,Western blotting检测内质网应激分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、钙网蛋白(CRT)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:与AMI组比较,PQS低、中、高剂量组左室收缩末期内径分别降低17.2%、20.3%和38.8%,左室舒张末期内径分别降低8.9%、9.0%和17.2%,左室收缩末期容积分别降低31.4%、38.5%和66.9%左室舒张末期容积分别降低18.2%、18.8%和34.2%,射血分数分别升高44.9%、60.1%和118.0%,左室短轴缩短率分别升高55.4%、71.0%和148.0%,梗死范围分别降低4.6%、39.5%和55.8%(均P<0.05);非梗死区心肌组织羟脯氨酸含量分别降低34.5%、35.9%和48.7%(P<0.01)。与AMI组比较,PQS 200 mg.kg-1.d-1组心肌细胞凋亡率降低27.3%(P<0.05),GRP78和CRT蛋白表达分别降低79.9%和80.8%(P<0.01),CHOP和Bax分别降低42.5%和53.1%(P<0.01),Bcl-2表达升高1.1倍(P<0.01);上述保护作用的程度与内质网应激抑制剂牛磺酸相近(P>0.05)。Spearman相关分析发现CHOP蛋白表达与心肌细胞凋亡率显著正相关(r=0.797,P<0.01)。结论:PQS剂量依赖性减轻大鼠心肌梗死后心室重构,其机制与抑制CHOP介导的内质网应激凋亡通路有关。

17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的观察17-甲氧基-7-羟基-苯并呋喃查尔酮(YLSC)对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠的影响。方法 SD大鼠50只随机分为5组,每组10只:假手术组,模型组,溶媒组,YLSC低、高剂量(2.50,5.00 mg/kg)组。缺血30 min再灌注60 min复制大鼠I/R模型,观察大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量的变化,伊文思蓝和氯化三苯四氮唑(TTC)双重染色确定心肌梗死面积,TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,Western blot法检测心肌蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和caspase12的表达。结果与模型组相比,YLSC能显著减少心肌梗死面积和CK、LDH、AST的漏出,降低心肌细胞凋亡率,并抑制内质网应激标志蛋白GRP78和caspase12的表达。结论 YLSC能减少大鼠I/R损伤,其心肌保护作用可能与减轻内质网应激有关。

运动训练和白藜芦醇保护NAFLD大鼠肝细胞凋亡的内质网应激机制研究

目的:研究运动训练和白藜芦醇(RVS)干预对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血脂代谢、肝细胞凋亡及内质网应激(ERS)相关蛋白表达的影响。方法:将SPF级雄性SD大鼠70只分为普通安静对照组(NC)、NAFLD模型组(HF)、HF小强度耐力运动组(LE)、HF中等强度耐力运动组(ME)、HF递增强度耐力运动组(IE)、HF白藜芦醇组(RVS)、中等强度耐力运动联合RVS组(RE),共7组,每组各10只。运动组每次运动时间60 min,每周运动5天。RVS灌胃按照40mg/kg/天,每周7天。干预6周后测试血脂指标和分析肝组织HE切片;免疫组化测试Bax、Bcl-2蛋白表达;TUNEL测试肝细胞凋亡情况;采用Western-blot检测肝组织ERS相关因子GRP78、Caspase3、IRE1、p-IRE1、JNK1、CHOP、PERK和eIF2α蛋白表达。结果:与HF组相比,所有干预组均降低NAFLD大鼠血清TG、TC、FFA、LDL-c含量和肝细胞的凋亡率和Bax蛋白表达,同时增加了HDL-c含量和Bcl-2表达;与HF组相比,内质网跨膜蛋白IRE1、PERK蛋白表达和GRP78/Caspase3比值显著增加,Caspase3、p-IRE1、eIF2α、JNK1和CHOP蛋白表达显著降低,综合运动组中各指标发现,ME组较LE和IE效果好,而RE组则优于其他各组。结论:1)16周高脂饮食可复制NAFLD大鼠模型,NAFLD大鼠肝细胞凋亡的发生与ERS同时激活IRE1/JNK1和eIF2α/CHOP两条信号通路有关;2)不同强度耐力运动对NAFLD大鼠血脂各项指标和肝细胞凋亡均有不同程度的改善作用,但中等强度耐力运动优于其他运动组,这可能依赖于对ERS信号途径IRE1/JNK1和eIF2α/CHOP双重调控;3)RVS对NAFLD大鼠肝细胞凋亡也具有改善作用,但并非依赖于对ERS凋亡途径的调控;4)联合干预组对ERS信号通路IRE1/JNK1和eIF2α/CHOP也具有双重抑制作用,且优于中等强度耐力运动组。

DMAS联合PERK抑制剂对人NSCLC PC9/GR细胞凋亡的作用研究

目的观察β,β'-二甲基丙烯酰紫草素(β,β'-dimethylacryl shikonin,DMAS)联合PKR样ER激酶(PKR-like ER kinase,PERK)抑制剂协同促吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌PC9/GR细胞凋亡的作用效应,并探讨其分子机制。方法 DMAS单独作用PC9/GR细胞,CCK-8法检测细胞增殖活力,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)、C/EBP环磷酸腺苷反应元件结合转录因子同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)相关信号通路中蛋白的变化。PERK抑制剂GSK2606414干预后,Annexin-V-PI流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot法检测caspase-3、caspase-8、caspase-9及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)剪切活化水平的变化。结果 DMAS呈浓度依赖性(0、5、10、15μmol/L)抑制PC9/GR细胞的增殖活力(P<0.05)。DMAS呈浓度依赖性诱导PC9/GR细胞凋亡及caspase-3、caspase-8、caspase-9及PARP的剪切活化水平(均P<0.05);内质网应激标志蛋白GRP78、CHOP蛋白水平呈时间依赖性(0、2、4、8小时)上调(均P<0.05),PERK和真核起始因子2(eukaryotic initiation factor-2α,e IF2α)磷酸化水平及其下游的信号分子活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达水平增加(均P<0.05),但其他UPR相关的蛋白:肌醇需酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1α)、剪接型X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1 spliced,XBP1s)、ATF6未见明显变化(均P>0.05)。与DMAS或GSK2606414单一作用组比较,二者联合作用组细胞凋亡增加(P<0.05),PERK磷酸化水平降低(P<0.05),凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9及PARP的剪切活化水平增加(均P<0.05)。结论 PERK-e IF2α信号通路在DMAS诱导人非小细胞肺癌PC9/GR凋亡中起保护作用。

HBV对健康人PBMC中内质网应激蛋白的影响研究

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)对外周血单个核细胞(PBMC)中内质网应激(ERS)蛋白GRP78、GRP94及CHOP的影响,探讨HBV感染与PBMC ERS的关系。方法分离健康体检者PBMC,与不同量的慢性乙型肝炎(CHB)患者血清共培养,通过荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测CHB患者和共培养后健康体检者PBMC中的HBV-DNA水平。采用荧光定量PCR法检测共培养后健康体检者PBMC中GRP78、GRP94、CHOP核酸水平的表达量。结果 22例CHB患者PBMC中,有16例检测到HBV-DNA,阳性检出率为72.7%。外周血HBV-DNA拷贝数越高,PBMC中HBV-DNA阳性率越高。健康体检者PBMC中加入CHB患者血清共培养,PBMC中HBV-DNA水平会随着加入的CHB患者血清量增加而升高。CHB患者血清与健康体检者PBMC共培养不同时间,PBMC中ERS蛋白GRP78、GRP94和CHOP在基因水平的表达均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 CHB患者PBMC中可检测到HBV-DNA,HBV感染可以引起PBMC中ERS相关蛋白水平升高。

内质网靶向递药系统用于抗肿瘤免疫治疗的研究进展

内质网作为真核细胞内功能多样的细胞器,不仅是蛋白质合成与修饰的关键场所,也是胞内信号转导的重要位点,影响着细胞的功能发挥、存活及凋亡。内质网稳态的失衡会引起内质网应激,这与肿瘤的发生与发展密不可分。在一些药物(蒽醌类及奥沙利铂等)的作用下,过度的内质网应激则会介导肿瘤细胞的免疫原性细胞死亡并激发抗肿瘤免疫反应,在治疗后期形成长期免疫记忆。但是,这些药物往往存在靶向性差等问题,在肿瘤细胞内质网的蓄积量极低,限制了其临床疗效。因此,内质网靶向药物的研究将为更高效更精准的抗肿瘤免疫治疗提供参考。本文就内质网与肿瘤免疫的关系,以及近年来基于内质网靶向的抗肿瘤免疫治疗的策略进行综述,并对内质网靶向策略存在的问题及未来发展方向进行总结与展望。