下调XBP1s通过抑制ITPR介导的线粒体功能障碍改善肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤

目的 探讨剪接型X盒结合蛋白1(XBP1s)对小鼠肾小管上皮细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及其作用机制。方法 将小鼠肾小管上皮细胞分为腺病毒阴性对照组(Ad-shNC组)、靶向沉默XBP1s腺病毒组(Ad-shXBP1s组)、Ad-shNC+H/R组、Ad-shXBP1s+H/R组。检测各组细胞凋亡水平、线粒体活性氧活性、线粒体膜电位及线粒体钙离子水平。使用染色质免疫共沉淀测序(ChIP-seq)分析XBP1s调控肌醇1,4,5-三磷酸受体(ITPR)家族的结合位点。检测各组XBP1s和ITPR家族信使RNA(mRNA)和蛋白表达水平。结果 与AdshNC组比较,Ad-shNC+H/R组细胞凋亡水平更高,线粒体活性氧水平升高,线粒体膜电位降低,线粒体钙离子水平升高;与Ad-shNC+H/R组比较,Ad-shXBP1s+H/R组细胞凋亡水平较低,线粒体活性氧水平下降,线粒体膜电位升高,线粒体钙离子水平降低(均为P<0.05)。与Ad-shNC组比较,Ad-shXBP1s组XBP1s、ITPR1、ITPR2和ITPR3 mRNA和蛋白相对表达量降低(均为P<0.05)。与Ad-shNC组相比,Ad-shNC+H/R组XBP1s、ITPR1、ITPR2和ITPR3蛋白相对表达量升高;与Ad-shNC+H/R组相比,Ad-shXBP1s+H/R组XBP1s、ITPR1、ITPR2和ITPR3蛋白相对表达量下降(均为P<0.05)。ChIP-seq结果显示,XBP1s能够结合ITPR1的启动子和外显子、ITPR2外显子和ITPR3外显子。结论 XBP1s可能通过直接调控ITPR转录和翻译而影响线粒体相关的内质网膜结构功能,下调XBP1s能够抑制ITPR表达,改善线粒体损伤。

微RNA-152靶向调控内质网脂质Raft关联蛋白1对甲状腺乳头状癌细胞增殖和迁移的影响

目的探讨微RNA-152(miR-152)对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法将对数生长期PTC TPC-1细胞随机分为空白对照组、miR-con组(转染miRNA-mimics阴性对照)和miR-152组(转染miR-152-mimics),另取对数生长期正常甲状腺细胞株Nthy-ori 3-1作为Nthy-ori 3-1组。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测各组细胞中miR-152、内质网脂质Raft关联蛋白1(ERLIN1)mRNA表达,四唑盐比色法及平板克隆形成实验检测各组TPC-1细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组TPC-1细胞凋亡情况,Transwell实验检测各组TPC-1细胞迁移、侵袭能力,Western blot法检测各组TPC-1细胞中ERLIN1蛋白表达。结果空白对照组与miR-con组TPC-1细胞中miR-152、ERLIN1 mRNA和蛋白相对表达量、TPC-1细胞增殖抑制率、细胞克隆数、细胞凋亡率、细胞迁移数及侵袭数比较差异均无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、miR-con组、miR-152组TPC-1细胞中miR-152相对表达量显著低于Nthy-ori 3-1组(P<0.05);miR-152组TPC-1细胞中miR-152相对表达量显著高于空白对照组和miR-con组(P<0.05)。与空白对照组、miR-con组比较,miR-152组TPC-1细胞增殖抑制率、细胞凋亡率显著升高,细胞克隆数、细胞迁移数及侵袭数显著降低(P<0.05)。miR-152组TPC-1细胞中ERLIN1 mRNA及蛋白相对表达量均显著低于空白对照组和miR-con组(P<0.05)。结论过表达miR-152可下调TPC-1细胞中ERLIN1的表达,抑制TPC-1细胞增殖、侵袭和迁移,miR-152可能通过靶向调控ERLIN1参与PTC进展和转移。

内质网相关降解蛋白Derlin-1和配对盒2在子宫内膜癌组织中的表达及与患者临床特征的关系

目的 探讨内质网相关降解蛋白Derlin-1和配对盒2(PAX2)在子宫内膜癌组织中的表达及与患者临床特征的关系.方法 选取80例子宫内膜癌患者和80例子宫肌瘤患者,取其子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织,免疫组化法检测Derlin-1、PAX2蛋白的表达情况,并比较不同临床特征子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Derlin-1、PAX2蛋白的表达情况.Derlin-1蛋白阳性表达的影响因素采用多因素Logistic回归分析.结果 子宫内膜癌组织中Derlin-1、PAX2蛋白阳性表达率均明显高于正常子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01).国际妇产科联盟(FIGO)分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为中低分化、淋巴结转移子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Derlin-1阳性表达率分别高于FIGO分期为Ⅰ~Ⅱ期、分化程度为高分化、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05).多因素Logistic回归分析结果显示,FIGO分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为中低分化、淋巴结转移均为Derlin-1蛋白阳性表达的独立危险因素(P﹤0.05).结论 Derlin-1、PAX2在子宫内膜癌组织中高表达,且Derlin-1的表达与子宫内膜癌患者FIGO分期、分化程度、淋巴结转移情况有关.

糖络宁对高糖环境中雪旺细胞内质网应激IRE1通路的影响

目的观察中药复方糖络宁对高糖环境下雪旺细胞的抗凋亡保护作用,探讨糖络宁对于内质网应激IRE1信号通路的调控作用。方法在高糖环境中培养雪旺细胞,设置空白对照组、模型组、糖络宁组、不同阻断剂组。培养12、24小时后,应用流式细胞术检测糖络宁含药血清处理下的细胞凋亡水平,应用免疫印迹法(Western blot,WB)检测内质网应激的IRE1-TRAF2-JNK凋亡通路的标志蛋白肌醇依赖酶1(inositol-requiting enzyme 1,IRE1)、X盒结合蛋白(X-box binding protein 1,XBP1)、肿瘤坏死因子受体相关因子2(TNF receptor-associated factor 2,TRAF2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的表达,应用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XBP1、TRAF2、JNK的基因表达。结果高糖孵育雪旺细胞12、24小时可显著诱导其损伤,细胞活力下降;与正常组比较,高糖环境下雪旺细胞凋亡水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,糖络宁含药血清能够改善高糖环境下雪旺细胞的凋亡(P<0.05)。在造模后检测时间点12小时、24小时,与空白组比较,模型组IRE1α、TRAF2和JNK表达显著升高(P<0.05);与模型组比较,糖络宁组含药血清组TRAF2和JNK蛋白的表达显著降低(P<0.05)。在造模后检测时间点12小时,与空白组、模型组比较,糖络宁组含药血清组XBP1蛋白表达显著升高(P<0.05)。PCR结果显示,糖络宁含药血清能够发挥类似于TRAF2 siRNA阻断剂的作用,抑制IRE1途径下游凋亡通路。结论糖络宁可对抗高糖环境引起的雪旺细胞损伤,作用机制与调控内质网应激IRE1信号通路有关。在IRE1通路被激发的初期,可能激活IRE1-XBP1通路,提高高糖环境下雪旺细胞的存活能力;当内质网应激过载时糖络宁抑制IRE1-TRAF2-JNK通路,减轻高糖环境下的雪旺细胞的凋亡。

Bax抑制因子1过表达对急性心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨过表达B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)抑制因子1(BI-1)对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法:60只大鼠随机分为假手术组、模型组、空载腺病毒(Ad-NC)组和BI-1腺病毒(Ad-BI-1)组,每组15只。除假手术组外,其他各组大鼠均采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,Ad-NC组和Ad-BI-1组大鼠分别于心肌梗死区域注射腺病毒包装的空载质粒和BI-1过表达质粒。术后72 h,检测各组大鼠心功能参数左室射血分数(LVEF)、左室缩短分数(LVFS)、左室舒张末期内径(LVEDD)和左室收缩末期内径(LVESD),TTC染色法检测各组大鼠心肌梗死面积百分率,TUNEL法检测各组大鼠心肌细胞凋亡率,比色法检测各组大鼠心肌组织中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠心肌组织中BI-1 mRNA表达水平,Westernblotting法检测大鼠心肌组织中BI-1、Bcl-2、Bax和内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、肌醇依赖酶1(IRE1)、磷酸化IRE1(p-IRE1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)及磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达水平,并计算p-IRE1/IRE1和p-JNK/JNK比值。结果:与假手术组比较,模型组大鼠LVEF和LVFS明显降低(P<0.05),LVEDD、LVESD、心肌梗死面积百分率、心肌组织中Caspase-3活性和心肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05),心肌组织中BI-1 mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),心肌组织中Bax、GRP78蛋白表达水平和p-IRE1/IRE1及p-JNK/JNK比值明显升高(P<0.05);与模型组比较,Ad-BI-1组大鼠LVEF和LVFS明显升高(P<0.05),LVEDD和LVESD明显降低(P<0.05),心肌梗死面积百分率、心肌细胞凋亡率和心肌组织中Caspase-3活性明显降低(P<0.05),心肌组织中BI-1 mRNA和蛋白表达水平及Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05),心肌组织中Bax、GRP78蛋白表达水平和p-IRE1/IRE1及p-JNK/JNK比值明显降低(P<0.05),Ad-NC组大鼠上述各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达BI-1通过抑制内质网应激途径降低心肌细胞凋亡水平,从而改善AMI大鼠心功能。

内质网相关的降解蛋白-1与葡萄糖调节蛋白78在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的研究内质网相关的降解蛋白-1(Derlin-1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生、正常子宫内膜组织中的表达,分析其与子宫内膜癌的临床病理关系。方法收集2010年1月至2019年1月南京医科大学附属无锡人民医院留取的50例正常子宫内膜组织标本、50例子宫内膜不典型增生组织标本及60例子宫内膜癌组织标本作为研究对象。标本均采用免疫组织化法检测Der-lin-1及GRP78蛋白的表达,对结果进行量化分析,分析Derlin-1及GRP78的表达与子宫内膜癌的临床病理关系。结果正常子宫内膜组织、非典型增生内膜组织、子宫内膜癌组织中Derlin-1、GRP78均有表达,阳性表达率依次增高,分别为(36.0%、56.0%、80.0%)、(32.0%、50.0%、71.6%);Derlin-1蛋白阳性与FIGO分期、组织分级、肌层浸润深度相关(P<0.05);GRP78蛋白阳性与FIGO分期、组织分级、淋巴结转移相关(P<0.05);Derlin-1及GRP78蛋白在子宫内膜癌组织中的表达呈正相关(r=0.333,P<0.05)。结论Derlin-1及GRP78蛋白在子宫内膜癌组织中呈现高表达,参与子宫内膜癌变的转化,联合检测Derlin-1及GRP78蛋白对早期判断子宫内膜癌具有一定价值。

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤增强鼻咽癌细胞对放射和化学治疗的敏感性

目的:探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)增强鼻咽癌细胞对放射治疗(放疗)和化学治疗(化疗)敏感性的作用及其相关的分子机制。方法:采用MTT法检测3-MA对细胞的增殖抑制作用;集落克隆形成法检测3-MA对细胞集落克隆形成的影响;Annexin V/PI双染法、线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)、DAPI染色检测细胞凋亡;Western印迹检测内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、自噬相关蛋白beclin1和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)表达。结果:不同体积浓度或剂量的顺铂(cisplatin,DDP)、电离辐射(ionizing radiation,IR)、衣霉素(tunicamycin,TM)、3-MA对鼻咽癌细胞HONE-1均具有增殖抑制作用,且随着体积浓度或剂量的增加和作用时间的延长,对HONE-1细胞增殖抑制作用随之增加。经1.00 mmol/L 3-MA预处理细胞后,再次给予6.00 mol/L DDP,4.00 Gy IR,1.00 mol/L TM处理,细胞存活率明显降低,均低于单用组,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。3-MA增强DDP,IR,TM抑制细胞集落克隆形成作用。用6.00 mol/L DDP或4.00 Gy IR处理HONE-1细胞24 h后,细胞凋亡率分别为5.8%和6.7%,与阴性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。JC-1和DAPI染色显示3-MA增强DDP,IR或TM诱导的细胞凋亡作用;Western印迹结果显示DDP,IR或TM处理组GRP78,beclin1表达呈时间依赖性上调,LC3 I向LC3 II转化,3-MA预处理组beclin1表达明显降低,LC3 I向LC3 II的转化。结论:自噬抑制剂3-MA可增强鼻咽癌细胞对放化疗的敏感性,其机制可能与3-MA抑制内质网应激诱导的自噬所产生的保护作用相关。

EDEM1通过稳定ATF6促进颅内动脉瘤发展的作用研究

目的:探究内质网降解增强α-甘露糖苷酶样蛋白1(EDEM1)和激活转录因子6(ATF6)在颅内动脉瘤(IA)发展中的作用。方法:纳入40例颅内动脉瘤患者和40例健康受试者,收集两组人群血清,通过ELISA检测ATF6水平。根据Hunt-Hess分级和Fisher分级将IA患者分为:轻度疾病组、中度疾病组和重度疾病组,比较3组患者血清中ATF6水平。将si-EDEM1和si-NC转染至HCAECs细胞,分组为si-EDEM1组和si-NC组,采用western blot检测两组细胞EDEM1和ATF6蛋白表达水平,CCK-8法检测两组细胞增殖水平。通过免疫共沉淀检测EDEM1和ATF6的相互作用情况。将si-ATF6和si-NC转染至HCAECs细胞,分组为si-ATF6组和si-NC组,采用Western blot检测两组细胞EDEM1和ATF6蛋白表达水平,CCK-8法检测两组细胞增殖水平。结果:与健康受试者相比,颅内动脉瘤患者血清中ATF6水平升高(P<0.05)。ATF6水平在轻度疾病组、中度疾病组和重度疾病组中依次递增(P<0.05)。与si-NC组相比,si-EDEM1组细胞EDEM1和ATF6蛋白表达水平降低,细胞增殖水平降低(P<0.05)。EDEM1和ATF6存在相互作用。与si-NC组相比,si-ATF6组细胞ATF6蛋白表达水平降低,细胞增殖水平降低(P<0.05)。结论:EDEM1通过稳定ATF6促进动脉内皮细胞增殖,与IA的恶化相关。

α-Actinin影响丙型肝炎病毒非结构蛋白与脂筏的关联及复制

本文旨在探讨α-actinin参与丙型肝炎病毒(HCV)复制的机制。将α-actinin转染Huh7.5细胞,用JFH1感染,发现过表达α-actinin可显著增加HCVRNA水平及非结构蛋白表达,感染性HCV颗粒也同时增多。膜漂浮实验显示,α-actinin可与HCV非结构蛋白NS5A共定位于脂筏。抑制内源性α-actinin表达,可使复制子细胞内NS5A表达减少,且对非离子去污剂敏感而从脂筏脱落。免疫荧光实验显示,NS5A与内质网标志分子calnexin核周共定位消失。以上结果提示,α-actinin可通过影响非结构蛋白与脂筏的关联而参与HCV RNA的合成,为临床治疗及研制新型抗HCV药物提供理论依据和实验基础。

脂筏结构在细胞内蛋白质运输中的作用

在细胞膜中存在由胆固醇、鞘糖脂以及蛋白质等成分组成的液态有序的结构,叫做脂筏。从内质网到高尔基体再到细胞质膜,脂筏结构在细胞膜中所占的比例越来越高。脂筏在高尔基体到细胞质膜的物质转运以及细胞内吞、再循环过程中发挥着重要的作用。本文将就脂筏结构在物质从高尔基体到质膜的转运和细胞内吞过程中的作用及其分子机制做一综述。

甲基化转移酶WTAP调节转录激活因子4表达加剧缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤

目的观察甲基化转移酶Wilms肿瘤蛋白1相关蛋白(WTAP)在缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤中的调节作用及其分子机制。方法①实验一:将H9C2心肌细胞分为空白对照组和H/R模型组。采用H/R诱导H9C2细胞建立心肌缺血/再灌注(I/R)损伤模型;空白对照组不进行处理。采用N6-甲基腺苷(m6A)RNA甲基化测定试剂盒检测m6A水平;分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)检测甲基化转移酶〔WTAP、甲基转移酶样蛋白(METTL3、METTL14)〕的基因和蛋白表达水平。②实验二:将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP组。H/R+sh-WTAP组转染sh-WTAP以敲降WTAP表达,其余各组制模方法同实验一。转染48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测WTAP、活化天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)、活化多聚二磷酸腺苷酸核糖聚合酶(PARP)、转录激活因子4(ATF4)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达水平;采用免疫荧光染色观察ATF4阳性表达情况。③实验三:将H9C2心肌细胞分为空白对照组、H/R+sh-NC组、H/R+sh-WTAP和H/R+sh-WTAP+ATF4组。H/R+sh-WTAP+ATF4组用过表达质粒ATF4转染H9C2心肌细胞,其余各组制模方法同实验二。采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用Western blotting检测ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平。结果①实验一:H/R模型组m6A甲基化水平较空白对照组显著上调。RT-qPCR检测结果显示,H/R模型组METTL3、METTL14和WTAP基因表达水平均较空白对照组显著上调,以WTAP上调最显著;Western blotting检测结果呈相同趋势。提示甲基化转移酶WTAP的表达水平在H/R诱导的心肌细胞中显著上调。②实验二:H/R+sh-WTAP组细胞凋亡水平较H/R+sh-NC组明显减少〔(14.16±1.58)%比(24.51±2.38)%,P<0.05〕。Western blotting检测结果显示,H/R+sh-WTAP组WTAP、活化caspase-3、活化PARP、p-PERK、ATF4和CHOP的蛋白表达水平均较H/R+sh-NC组显著下调。荧光显微镜下显示,H/R+sh-WTAP组ATF4阳性信号较H/R+sh-NC组显著减弱〔(19.36±1.81)%比(32.83±2.69)%,P<0.01〕。提示敲降WTAP可抑制H/R诱导的心肌细胞凋亡和内质网应激。③实验三:H/R+sh-WTAP+ATF4组细胞凋亡水平较H/R+sh-WTAP组显著增加〔(26.61±2.76)%比(17.14±0.87)%,P<0.05〕。Western blotting检测结果显示,H/R+sh-WTAP+ATF4组ATF4、CHOP、活化caspase-3和活化PARP的蛋白表达水平较H/R+sh-WTAP组显著上调。提示过表达ATF4可逆转sh-WTAP对H/R诱导的心肌细胞中内质网应激和细胞凋亡的抑制作用。结论甲基化转移酶WTAP可调节ATF4表达,介导细胞凋亡和内质网应激,促进H/R诱导的心肌细胞损伤。

BAG-1蛋白在衣霉素诱导人肺癌A549细胞内质网应激及提高顺铂敏感性中的作用

目的:体外观察低剂量衣霉素对人肺腺癌A549细胞内质网应激(endoplasmi creticulum stress,ERS)的诱导作用,以及此过程中Bcl-2结合抗凋亡基因1(Bcl-2associated athanogene 1,BAG-1)表达的变化;同时,观察衣霉素作用后A549细胞对顺铂敏感性的变化以及此过程中BAG-1蛋白表达的变化。方法:采用蛋白质印迹法检测低剂量衣霉素作用A549细胞后ERS标志性蛋白GRP78及抗凋亡蛋白BAG-1的表达变化;MTT法测定衣霉素作用后顺铂对A549细胞的半数抑制浓度(halfinhibitory concentration,IC50)变化;FCM法检测低剂量衣霉素作用后A549细胞对顺铂的敏感性变化;蛋白质印迹法检测衣霉素作用前后顺铂对A549细胞中BAG-1和procaspase-12蛋白表达的影响。结果:1.25μg/mL衣霉素作用A549细胞8h后,能诱导细胞发生ERS,即ERS标志性蛋白GRP78表达上调,同时BAG-1蛋白表达也明显上调(P均<0.05)。衣霉素诱导A549细胞ERS能增加细胞对顺铂的敏感性(P<0.05)。细胞发生ERS前,1.25、2.5和5μg/mL3个质量浓度的顺铂均上调BAG-1蛋白的表达(P均<0.05),但2.5和5μg/mL顺铂诱导BAG-1蛋白上调量均小于1.25μg/mL组(P<0.05);细胞发生ERS后,与单纯ERS未给予顺铂干预的细胞组比,1.25、2.5和5μg/mL3个质量浓度的顺铂均下调BAG-1蛋白的表达(P均<0.05),且下调量与顺铂浓度呈正比。2.5和5μg/mL顺铂能通过ERS途径诱导细胞发生凋亡,在此过程中BAG-1和procaspase-12蛋白表达均下调(P均<0.05)。结论:BAG-1蛋白可能是ERS和顺铂诱导肺癌细胞凋亡的一个重要调控因子之一,且ERS凋亡途径可能是顺铂诱导肺癌细胞凋亡的重要途径之一。

ALPPS术后肝再生与内质网应激IRE1α-XBP1通路的关系研究

目的探讨内质网应激在联合肝脏分割和门静脉结扎二步肝切除术(ALPPS)一期手术后肝再生过程中的作用。方法将72只C57bl/6小鼠随机均分为ALPPS组、门静脉结扎组(PVL组)和假手术组(Sham组),每组24只,分别行ALPPS一期手术、单纯PVL和假手术。3组小鼠分别在术后第1、2、4及7天各取材6只,检测各组小鼠的肝重体质量比,并取肝脏组织行免疫组织化学染色以计算Ki-67阳性细胞比,行Western blot法以检测肌醇酶1α(IRE1α)和X盒连接蛋白1(XBP1)蛋白的表达水平。结果①肝重体质量比:术后第4天和第7天时,同时点下Sham组、PLV组和ALPPS组的肝重体质量比依次增加,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。②Ki-67阳性细胞比:术后第2天时,Sham组、PLV组和ALPPS组的Ki-67阳性细胞比依次增加,3组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);术后第4天时,ALPPS组与PVL组的Ki-67阳性细胞比仍高于Sham组(P<0.05)。③XBP1和IRE1α的表达水平:术后第2天和第4天时,与Sham组和PVL组比较,ALPPS组的XBP1和IRE1α的表达水平均较高(P<0.05);术后第7天时,与Sham组比较,ALPPS组的XBP1和IRE1α的表达水平较高(P<0.05);与PVL组比较,ALPPS组的XBP1的表达水平较高(P<0.05)。结论在小鼠体内ALPPS术式诱导的肝再生较传统的PVL术式引起的肝再生更具有优势,这可能是因为ALPPS术后更为明显的内质网应激激活状态,导致IRE1α-XBP1的表达上调,从而参与了肝细胞细胞周期的调控,进而促进了肝细胞的增殖,促进了快速肝再生。

Yes相关蛋白1和内质网蛋白29在结直肠癌组织的表达及临床意义

目的 探讨检测Yes相关蛋白1(YAP1)和内质网蛋白29(ERp29)在结直肠癌组织中的表达水平,以及两者与结直肠癌临床病理因素的关系。方法 应用免疫组织化学法检测85例结直肠癌组织和癌旁组织中YAP1和ERp29表达,分析两者与结直肠癌各临床病理因素的关系。结果 YAP1在结直肠癌组织中的阳性表达率为61.18%(52/85),明显高于癌旁组织中YAP1阳性表达率17.65%(15/85),两者差异有统计学意义(t=43.731,P<0.01),YAP1表达水平与与结直肠癌TNM分期、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=6.632、5.273,P<0.05);ERp29在结直肠癌组织中的阳性表达率为42.35%(36/85),明显低高于癌旁组织中ERp29阳性表达率95.29%(81/85),两者差异有统计学意义(t=55.515,P<0.01),ERp29表达水平与结直肠癌TNM分期、浸润深度、淋巴结转移呈明显相关(分别为t=5.058、5.472、5.908,P<0.05)。结论 YAP1和ERp29的异常表达与结直肠癌的发生发展有关,检测YAP1和ERp29表达水平有助于判断结直肠癌浸润转移潜能及评估结直肠癌患者的预后。

补肾活血方对高糖高脂诱导损伤的小鼠脑微血管内皮细胞内质网应激和RAGE/LRP-1蛋白表达的影响

目的:在细胞水平探索补肾活血方对高糖高脂诱导的小鼠脑微血管内皮细胞(BEND3细胞)损伤的改善作用,并探究补肾活血方对高糖高脂导致的内质网应激和转运Aβ相关受体蛋白的作用。方法:采用高糖高脂(25mmol/L葡萄糖,200μmol/L棕榈酸)刺激BEND3细胞,用CCK-8法筛选合适的补肾方(BS)、活血方(HX)、补肾活血方(BSHX)的最佳用药浓度;应用免疫蛋白印迹法检测BS、HX、BSHX最佳用药浓度对葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、活性转录因子4(ATF4)、核因子κB(NF-κB)抗体以及脑内与转运β淀粉样蛋白相关的晚期糖基化终产物受体(RAGE)和低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP-1)的表达情况。结果:CCK-8检测细胞活力,最终选定补肾方100mg/L、活血方20mg/L和补肾活血方120mg/L;与正常对照组比较,高糖高脂刺激BEND3细胞后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE表达显著增加(P<0.01),LRP-1表达下降(P<0.01);药物干预后,GRP78、p-eIF2α、ATF4、NF-κB、RAGE蛋白下调,BSHX组LRP-1表达显著上调(P<0.05,P<0.01);且以BSHX组最为明显。结论:补肾方、活血方、补肾活血方对高糖高脂诱导的BEND3细胞损伤均有改善作用,但以补肾活血方疗效最为突出,且对高糖高脂导致的内质网应激和转运β淀粉样蛋白受体的蛋白表达具有调节作用。

Derlin-1的表达与非小细胞肺癌临床特征及预后的相关性

目的探讨内质网相关降解蛋白Derlin-1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与NSCLC临床特征和预后的相关性。方法回顾性分析2010年1月至2011年12月在南通大学附属医院手术治疗确诊的40例NSCLC患者的临床资料。按TNM分期分为Ⅰ~Ⅱ期22例,Ⅲ~Ⅳ期18例,其中18例患者癌旁组织作对照组。应用实时PCR、Western blot、免疫组化技术检测癌组织和癌旁组织中Derlin-1的表达,分析其表达与NSCLC临床特征及预后的关联性,分析Derlin-1阳性与NSCLC患者3年总生存率的关系。结果Derlin-1的mRNA和蛋白相对表达量,呈Ⅲ~Ⅳ期癌组织>Ⅰ~Ⅱ期癌组织>癌旁组织,总体及两两比较差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。Ⅲ~Ⅳ期、Ⅰ~Ⅱ期和对照组Derlin-1阳性率分别为94.44%、63.64%和16.67%,三组间差异有统计学意义(P<0.01);Derlin-1阳性率与NSCLC的TNM分期、病理分级、淋巴结转移有关联性(P<0.05,P<0.01);Derlin-1阴性NSCLC患者3年生存率明显高于Derlin-1阳性患者(77.78%vs 22.58%,P<0.01)。结论Derlin-1在NSCLC中过表达,表达高者恶性程度高,阳性表达者预后差,Derlin-1或可作为NSCLC治疗的潜在靶点。

miR-29c-3p调控ERLIN2抑制肺腺癌发展的作用

目的:探讨miR-29c-3p在肺腺癌(lung adenocarcinoma,LUAD)发生发展中的作用。方法:利用公共数据库分析miR-29c-3p和ERLIN2在肺腺癌中的表达及其与临床病理参数的相关性。采用qRT-PCR检测miR-29c-3p在LUAD细胞系和正常支气管上皮细胞系中的表达,CCK8、细胞克隆形成、Transwell和伤口愈合实验评估miR-29c-3p在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用,利用生物信息学工具预测miR-29c-3p下游靶基因,并通过双荧光素酶报告基因分析验证靶向关系。结果:miR-29c-3p在肺腺癌组织和细胞中低表达。miR-29c-3p低表达患者的预后较差,miR-29c-3p是肺腺癌患者的独立预后因素,并与淋巴结转移状态和临床分期密切相关。细胞实验表明,抑制miR-29c-3p可促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。生物信息学分析表明,ERLIN2是miR-29c-3p的靶基因,二者表达呈负相关。通过双荧光素酶报告基因测定验证了上述靶向关系。在UALCAN数据库中,ERLIN2在肺腺癌组织中高表达,并与患者年龄、性别、吸烟、肿瘤分期、淋巴结转移和TP53突变状态密切相关,ERLIN2高表达患者总生存率低于低表达患者。结论:miR-29c-3p通过靶向ERLIN2抑制肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,是肺腺癌患者的独立预后因素。

内质网应激及自噬相关蛋白在矽肺患者肺泡巨噬细胞中表达研究

目的研究矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)内质网应激(ERS)和自噬相关蛋白的表达规律。方法采用单纯随机抽样方法,选择矽肺壹期、贰期、叁期男性患者20、28、22例分别设为矽肺壹期、贰期和叁期组,以6例诊断为观察对象的男性矽尘作业工人为对照组。收集研究对象的支气管肺泡灌洗液,分离、纯化和培养AM,经裂解后提取蛋白,采用免疫印迹法检测AM中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Beclin1和微管相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白的相对表达水平。结果矽肺壹期、贰期和叁期患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于对照组(P<0.05),矽肺贰期和叁期组患者上述3个指标均高于矽肺壹期组(P<0.05),矽肺叁期组患者AM中GRP78蛋白相对表达水平低于矽肺贰期组(P<0.05);矽肺叁期组患者AM中Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均高于矽肺贰期组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。多重逐步线性回归分析结果显示,矽肺患者AM中GRP78、Beclin1和LC3的蛋白相对表达水平均与矽肺期别呈正相关(P<0.01)。结论不同期别矽肺患者AM中ERS和自噬的相关蛋白表达程度不同,AM的ERS和自噬在矽肺纤维化发生发展中可能发挥重要作用。

内质膜蛋白复合体亚基6对海拉细胞自噬的调控作用

目的 探讨内质膜蛋白复合体亚基6（EMC6）基因在海拉（HeLa）细胞中的自噬调解活动。 方法 （1）构建3种质粒：EMC6真核表达质粒、特异性干扰EMC6质粒、空白质粒。分别将3种质粒转染HeLa细胞，筛选3组中的稳定表达细胞株。（2）用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）、Western blot检测3组质粒转染后Hela细胞中EMC6 mRNA表达结果。（3）电镜下观察HeLa细胞内自噬体；用自噬抑制剂Bafilomycin A1和3-甲基腺嘌呤（3-MA）分别作用于转染EMC6质粒的处理组、空白质粒组和HeLa组，在共焦显微镜下观察比较细胞株中绿色荧光蛋白（GFP）-微管相关蛋白1轻链3（LC3）的变化。 结果 （1）Real-time PCR法检测转染不同质粒进入HeLa细胞株后，处理组、干扰组及空白质粒组各5例，2－ΔΔCt的平均值分别为3.29±0.62、0.38±0.04、1.11±0.20，EMC6 mRNA拷贝数量在3组之间差异有统计学意义（P＝0.020）。（2）在转染了EMC6质粒的HeLa细胞组中可观察到自噬体形成，并观察到Bafilomycin A1作用于3组细胞后，可见GFP-LC3斑点聚集，而EMC6过表达组的LC3斑点明显较空白质粒组及HeLa组丰富。 结论 过表达EMC6蛋白可使HeLa细胞内自噬体数目增加，可能使宫颈癌细胞内自噬活动增强；EMC6过表达细胞株中，磷酸肌醇3激酶（PI3K）抑制剂抑制了EMC6所诱发的自噬过程。