EFFECTS OF MODULATED LDLs ON THE RELEASE OF ENDOTHELIN-1 AND PROSTACYCLIN BY ENDOTHELIAL CELLS IN CULTURE

Objective To study the releases of endothelin-1 and prostacyclin by endothelial cells in culture and to elucidate how these releases were influenced by smoke-treated low density lipoprotein. Methods We exposed en- dothelial cell cultures to native or oxidized low density lipoproteins,low density lipoproteins treated by dimethylsul- foxide-soluble particles from cigarette smoke or dimethylsulfoxide alones. The release of endothelin-1 was assayed by bioassay and the release of prostacyclin was assayed by radioimmunoassay. Results Low density lipoproteins treated by smoke significantly increased the release or endothelin-1 (P<0.025) and decreased the release of prostacyclin (P< 0.02) by endothelial cells in culture, contrast to native or dimethylsulfoxide-treated lipoproteins. Conclusion The main part or vasoconstrictor activity in conditioned medium from bovine aortic EC is endothelin-1.

ACSL4介导铁死亡及在动脉粥样硬化性心血管病中的潜在作用

背景:铁死亡是一种铁依赖性调节细胞死亡形式,其特征是铁依赖性脂质过氧化,长链酰基辅酶A合酶4参与脂质过氧化底物的形成进而导致铁死亡。近几年研究表明,长链酰基辅酶A合酶4介导铁死亡在动脉粥样硬化性心血管疾病中发挥关键作用。目的:总结长链酰基辅酶A合酶4的结构功能和调控机制及其介导铁死亡的潜在分子机制,阐述长链酰基辅酶A合酶4驱动铁死亡在动脉粥样硬化、缺血性脑卒中和心肌梗死中的应用,以期为治疗动脉粥样硬化心血管疾病提供新的治疗策略。方法:在PubMed数据库检索自建库起至2023年8月收录的相关文献,以“atherosclerosis,ferroptosis,long-chain acyl-coenzyme A synthase 4,ACSL4,glutathione peroxidase 4,ischemic stroke,myocardial infarction,endothelial cell,smooth muscle cells,foam cell”为检索词,最终纳入76篇文献进行综述分析。结果与结论:①长链酰基辅酶A合酶4参与形成多不饱和脂肪酸的辅酶衍生物并将其插入磷脂,为铁死亡发生的核心机制脂质过氧化提供底物;②在长链酰基辅酶A合酶4表达的调节因子中,整合素α6β4、细胞内囊泡转运因子p115、锌脂蛋白A20负调控其表达,同时多种miR通过结合3′-UTR下调其表达,相反长链酰基辅酶A合酶4的表达上调大部分通过转录因子转录调控;③长链酰基辅酶A合酶4依赖性生成含有多不饱和脂肪酸的磷脂是脂质过氧化并执行铁死亡必不可少的必要条件,且长链酰基辅酶A合酶4与谷胱甘肽过氧化酶4作为铁死亡的正负调控因子相互制约,其具体机制仍待进一步研究;④长链酰基辅酶A合酶4介导铁死亡参与动脉粥样硬化、心肌梗死、缺血性脑卒中的病理机制,动脉粥样硬化中内皮细胞损伤与长链酰基辅酶A合酶4介导的铁死亡密切相关,但长链酰基辅酶A合酶4参与泡沫细胞形成、平滑肌细胞表型转化、钙化的研究尚未见报道;⑤长链酰基辅酶A合酶4作为铁死亡的生物标志物和潜在靶点成为研究热点,靶向长链酰基辅酶A合酶4抑制铁死亡可能成为治疗动脉粥样硬化性心血管疾病的新方向,而抑制长链酰基辅酶A合酶4的药物研究较少,未来还需进一步研究。

C-PC抑制ox-LDL诱导内皮细胞脂质过氧化损伤的机制研究

氧化型低密度脂蛋白（ oxidized low density lipoprotein, ox-LDL）是诱导动脉血管内皮细胞凋亡的重要因素[3],内皮细胞保护是动脉粥样硬化防治的关键环节[1-3]。研究提示天然海洋药物--螺旋藻藻蓝蛋白（ C-Phycocyanin,C-PC）具有独特的抗动脉粥样硬化疗效[4-5],因此本研究旨在构建血管内皮细胞损伤模型,探讨C-PC在血管内皮细胞脂质过氧化损伤中所起的保护作用。

川芎嗪对缺氧人脐静脉内皮细胞抗凝和纤溶功能的影响

目的应用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)缺氧模型,观察川芎嗪对其抗凝和纤溶功能的影响。方法制备正常人脐静脉原代EC,待EC培养达融合状态后,将其放入含95%N2、5%CO2混合气体的缺氧环境,制备人脐静脉原代EC缺氧损伤模型。并设正常组,模型组,川芎嗪组,观察各组细胞培养上清液中漂浮细胞数、抗凝、纤溶指标等变化。结果与对照组相比,模型组培养液中的漂浮细胞数显著增高,前列环素(6-keto-PGF1α)水平显著下降,组织型纤溶酶原激活物抑制物(PAI)活性显著增高,组织型纤溶酶原激活物(t-PA)活性显著降低,内皮素(ET)水平显著增高,NO水平显著降低;川芎嗪具有显著提高6-keto-PGF1α水平,调节PAI、t-PA活性和ET、NO水平的作用。结论本实验制备的人脐静脉原代EC缺氧损伤模型存在着EC受损,分泌功能下降,血管舒缩功能失调;川芎嗪具有保护在缺氧环境下EC受损,调节EC分泌功能和血管舒缩功能。

当归芍药散对血脂异常大鼠抗氧化能力及动脉壁血管细胞黏附分子-1基因表达的影响

目的:观察当归芍药散(DSS)对血脂异常大鼠抗氧化能力及动脉壁血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)mRNA表达的影响。方法:采用高脂饲料喂养法复制血脂异常大鼠模型,同时给予治疗药物DSS(汤剂)高、低剂量及阳性对照药血脂康,连续8周,检测各组大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及氧化型低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)、丙二醛(MDA)、超氢化物歧化酶(SOD)水平,并用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定大鼠主动脉VCAM-1mRNA的表达。结果:与模型组相比,DSS高、低剂量组和血脂康组均能明显降低大鼠血清TC、TG、LDL-C及ox-LDL、MDA水平(P<0.01),均能明显升高HDL-C、SOD水平(P<0.01)。RT-PCR法显示DSS高、低剂量组和血脂康组均能显著降低大鼠主动脉组织中VCAM-1mRNA的表达(P<0.01),其中DSS高剂量组降低趋势优于低剂量组和血脂康组。结论:DSS高、低剂量组均可较好地调节血脂异常大鼠脂质代谢,清除自由基、抗脂质过氧化损伤并下调动脉壁VCAM-1基因的表达,提示其具有保护血管内皮细胞功能的作用,可进一步阻抑动脉粥样硬化的发生发展。

高糖对培养肾小球内皮细胞细胞膜流动性影响的研究

目的 观察高糖状态下肾小球内皮细胞过氧化损伤与内皮细胞膜流动性改变的关系。方法 采用体外人肾小球内皮细胞培养 ,八木组织测量之TBA法测定脂质过氧化产物丙二醛 ,Prendergast法测定细胞膜流动性 ,Fura 2双波长荧光法检测细胞内钙离子含量的变化。结果 高糖对肾小球内皮细胞可致过氧化损伤 ,使细胞膜流动性明显增高 ,细胞内钙含量增加 ,随着培养时间的延长 ,糖浓度愈高 ,作用愈明显。结论 高糖致内皮细胞过氧化损伤影响细胞膜流动性改变 ,可能是糖尿病肾病发生的始动因素。

茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注损伤内皮细胞的保护作用。方法 在大鼠左冠状动脉前降支结扎致心肌缺血再灌注损伤模型的基础上 ,观察茶多酚药物干预对损伤大鼠血浆中血管性血友病因子 (vWF)活性及脂质过氧化终产物丙二醛 (MDA)、一氧化氮 (NO)含量的影响。结果 茶多酚能明显降低血浆MDA含量、vWF活性及提高NO含量。结论 茶多酚对心肌缺血再灌注损伤内皮细胞有明显保护作用 。

甲基莲心碱对LPC诱导内皮细胞损伤的保护作用及与ADMA的关系

目的:观察甲基莲心碱对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其与非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的关系。方法:10 mg.L-1的LPC孵育人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)24 h或0.1,1.0,10.0μmol.L-1甲基莲心碱预处理HUVEC-12细胞1 h,再予LPC孵育细胞24 h,收集细胞上清液测定一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA),ADMA含量和收集细胞测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果:LPC孵育HUVEC-12细胞24 h后细胞上清液中MDA,ADMA含量及细胞内ROS水平显著性增加(P<0.05),细胞上清液中NO含量显著性降低(P<0.05);0.1,1.0,10.0μmol.L-1的甲基莲心碱预处理组ROS水平,MDA,ADMA含量显著降低,NO含量显著性升高(P<0.05)。结论:甲基莲心碱对LPC诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,该作用可能与其降低ADMA水平有关。

花生四烯酸诱导人脐静脉内皮细胞氧化损伤和凋亡

探讨花生四烯酸 (AA)能否诱导人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)凋亡及其机制。以不同浓度的AA与细胞分别作用 8、16、2 0和 2 4h ,噻唑蓝 (MTT)法检测细胞存活率 ,Hoechst 3 3 2 5 8染色法观察细胞形态学变化 ,琼脂糖凝胶电泳检测DNA降解 ,流式细胞术测定细胞凋亡率。测定细胞脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)含量和胞内还原型GSH含量来判断细胞氧化程度。结果表明 ,AA呈浓度和时间依赖性引起HUVECs存活率下降 (P <0 0 1)。AA处理 2 4h的HUVECs可见凋亡典型的形态学变化 ,琼脂糖电泳示“DNAladder”。AA( 5 0～ 15 0 μmol L)作用 2 0h后 ,流式细胞术检测显示细胞凋亡峰 ,细胞凋亡率分别为 2 0 7% ,3 8 6%和 5 2 5 % (P <0 0 5 )。随着AA浓度的增加 ,细胞MDA含量相应增加 ,而胞内还原型GSH含量则减少 (P <0 0 5 )。表明花生四烯酸 ( 5 0～ 15 0 μmol L)能诱导HUVECs凋亡 。

川芎嗪对花生四烯酸诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的 研究川芎嗪 (TMP)对花生四烯酸 (AA,16 0μm ol/ L )诱导的血管内皮细胞株 ECV 30 4损伤和凋亡的保护作用及其机制。方法 MTT法检测细胞存活率 ,比色法测乳酸脱氢酶 (L DH)释放率和细胞丙二醛(MDA)含量 ,Hoechst 332 5 8荧光染色法观察细胞核形态变化并测定细胞凋亡率 ,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA降解。结果 TMP(0 .2 5～ 1.0 m mol/ L)能浓度依赖性地抑制 AA引起的细胞存活率下降 (P<0 .0 5 ) ,并降低细胞L DH释放率和 MDA含量 (P<0 .0 5 )。 AA处理 2 4 h后的细胞呈典型的凋亡核固缩表现 ,凝胶电泳显示 DNA凋亡梯带 ,TMP(0 .2 5～ 1.0 m mol/ L)能降低其凋亡率 (P<0 .0 5 )。结论 TMP对 AA引起的 ECV30 4细胞损伤和凋亡具有保护作用 。

氧自由基致体外培养血管内皮细胞的损伤及人参皂甙的保护作用

比较了酶学（黄嘌吟－黄嘌吟氧化酶）法、化学（Ｃｕ２＋—抗坏血酸）法和电解法产生外源性氧自由基致体外培养血管内皮细胞的损伤，观察人参皂甙的保护作用。结果表明以酶学法最稳定，适用于氧自由基损伤内皮细胞模型的建立。人参皂甙（４０μｇ·ｍｌ－１）可降低ＭＤＡ含量，减轻细胞损伤。提示人参皂甙可能具有保护血管内皮细胞受损的作用。

冠心病患者血管内皮损害与脂质过氧化反应的关系

用循环内皮细胞（ＣＥＣ）检测作为在体判断血管内皮细胞（ＶＥＣ）损伤的指示物，ＣＥＣ经免疫灸光Ⅷ因子相关抗原鉴定，结合血脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量、超氧化物歧化酶含量的测定，观察了４０例冠心病患者外周血ＣＥＣ和ＬＰＯ变化，并与正常人及自身治疗前后对照。结果显示冠心病患者ＣＥＣ数、ＬＰＯ含量显著高于正常，两指标呈显著正相关（ｒ＝０．６２３），ＣＥＣ数与冠心病情严重程度一致。而红细胞内外的超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性及ＳＯＤ／ＬＰＯ则显著低于对照组。提示血脂质过氧化物致ＶＥＣ损伤的冠心病中有重要的发病学意义。

盐酸埃他卡林对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的 :研究新型抗高血压药物盐酸埃他卡林(Ipt)对血管内皮细胞分泌功能的影响。方法 :采用灌流消化法分离小牛主动脉内皮细胞 (BAEC) ,观察Ipt对BAEC分泌内皮素 1(ET 1)、前列环素 (PGI2 )和一氧化氮 (NO)的影响 ,同时观察Ipt对培养的BAEC胞浆游离Ca2 + 浓度的影响。结果 :在Ipt浓度为 10 -6mol·L-1及以上时 ,能够剂量依赖性地抑制培养的BAEC合成分泌ET 1,并在Ipt 10 -5mol·L-1及以上时促进NO的合成分泌 ,同时在Ipt浓度为10 -4mol·L-1及以上时 ,显著地增高BAEC胞浆游离Ca2 + 浓度。结论 :Ipt通过抑制内皮细胞合成分泌ET 1和促进NO的合成分泌 ,从而使ET和NO的平衡状态得到改善 ;尚能增加内皮细胞 [Ca2 + ]i,有利于内皮细胞合成NO增加 ,从而增强内皮介导的舒血管效应。

充血性心力衰竭患者血管内皮细胞损伤及其临床意义

血中循环内皮细胞（ＣＥＣ）检测，是血管内皮细胞损伤的指标。ＣＥＣ用免疫荧光ＶＩＩＩ因子相关抗原鉴定，并测定血中脂质过氧化物（ＭＤＡ）变化。本文对４２例有充血性心力衰竭（ＣＨＦ）患者与正常人、无ＣＨＦ的心脏病患者及治疗前后对照。结果显示，ＣＨＦ患者ＣＥＣ数和ＭＤＡ含量显著高于正常人及无ＣＨＦ的心脏病患者，两指标呈显著正相关（ｒ＝０．７５），ＣＥＣ数与ＣＨＦ患者病情严重程度相关。这提示，ＣＨＦ时伴有明显的血管内皮细胞损伤，还可能与脂质过氧化损伤有关。本文讨论了血管内皮损伤在ＣＨＦ病理生理过程中的意义，并提出ＣＥＣ检测可能作为临床判断病情的一项参考指标。

高胰岛素对人内皮细胞分泌前列环素和内皮素-1的影响

目的:了解高胰岛素对人内皮细胞分泌前列环素(PGI2)和内皮素1(ET1)的影响。方法:采用酶消化法收集人脐静脉内皮细胞,经原代培养后随机分为4组:正常对照组,高胰岛素组,正常+谷胱甘肽组,高胰岛素+谷胱甘肽组;放免法测定4种培养基培养24h,48h,72h时培养基中的PGI2和ET1含量。结果:①高胰岛素组较正常对照组PGI2显著下降(P<0.01),ET1显著升高(P<0.01);②高胰岛素+谷胱甘肽组较高胰岛素组PGI2显著升高(P<0.05)和ET1显著下降(P<0.05)。结论:高胰岛素对血管内皮细胞有损伤作用,还原型谷胱甘肽可减轻这种损伤。

小颗粒致密低密度脂蛋白氧化特性及对血管内皮细胞脂质过氧化的影响

了解小颗粒致密低密度脂蛋白中抗氧化维生素含量、氧化特性 ,探讨其对血管内皮细胞脂质过氧化的影响。采用二次密度梯度超速离心的方法分离制备小颗粒致密低密度脂蛋白 ,高压液相色谱测定其抗氧化物质维生素A、E和 β 胡萝卜素 ;连续监测小颗粒致密低密度脂蛋白在 2 34nm的吸光度以测定其氧化敏感曲线 ;在血管内皮培养液中分别加入不同浓度的小颗粒致密低密度脂蛋白 ,培养后测定培养液丙二醛的浓度。实验成功分离小颗粒致密低密度脂蛋白 ,与大而轻低密度脂蛋白相比 ,维生素A、E和 β 胡萝卜素等抗氧化物质及总抗氧化能力明显减少 ,只有大而轻低密度脂蛋白的 6 5 %、39%和 2 4 % ,故小颗粒致密低密度脂蛋白氧化的延迟时间只有大而轻低密度脂蛋白的 37.5 % ,但硫代巴比妥酸反应物质值及氧化速率分别是大而轻低密度脂蛋白的 1 .7倍和 1 .2 8倍 ;培养液中丙二醛含量随加入脂蛋白的浓度和作用时间而增高 ,2 4h时小颗粒致密低密度脂蛋白 5 0mg组、1 0 0mg组、1 5 0mg组与相同剂量大而轻低密度脂蛋白组比较丙二醛显著增高 (P <0 .0 5 )。上述结果提示 :小颗粒致密低密度脂蛋白中抗氧化物质及抗氧化能力下降 ,氧化敏感性增高 。

绞股蓝总皂甙对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用

目的 :探讨绞股蓝总皂甙 (GYP)对氧化修饰低密度脂蛋白 (oxidativelymodifiedlowdensitylipopro tein ,oxLDL)损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用及可能机制。方法 :在体外培养的小牛主动脉内皮细胞 (bovineaorticendothelialcell ,BAEC )中加入oxLDL(终浓度为 0 .1gpr·L- 1)及GYP低、中、高剂量组 (5 .0 ,10 .0 ,2 0 .0mg·L- 1) ,培养 2 4h后 ,采用细胞毒试验、丙二醛 (MDA)测定及细胞计数等方法 ,分别对其贴壁细胞及培养液进行检测。结果 :①细胞毒试验发现 ,oxLDL对BAEC的生长增殖有明显的抑制作用 (2 0 .6 3% ) ,GYP组 (10 .0 ,2 0 .0mg·L- 1)为9.14 %和 6 .5 6 % (P <0 .0 1) ;②加oxLDL组和GYP组BAEC粘附的HL6 0细胞数明显多于对照组 (P <0 .0 1) ;③MDA检测发现oxLDL促进BAEC脂质过氧化物生成 ,并高于GYP组和对照组 (P <0 .0 1)。结论 :绞股蓝总皂甙具有对氧化修饰低密度脂蛋白损伤小牛主动脉内皮细胞的防治作用。

茶多酚干预内皮细胞损伤作用研究

目的观察茶多酚对大鼠心肌缺血再灌注诱导内皮细胞损伤的干预作用。方法在大鼠左冠状动脉前降支结扎致心肌缺血再灌注损伤模型的基础上,观察茶多酚对损伤大鼠血浆中血管性血友病因子(VWF)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及脂质过氧化终产物丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量及结构型一氧化氮合酶(cNOS)活力的影响,并观察大鼠组织形态学变化。结果茶多酚能明显降低血浆MDA含量及VWF活性,提高cNOS、SOD活力和NO含量,显著减轻内皮细胞的形态学损伤性变化。结论茶多酚对心肌缺血再灌注损伤内皮细胞有明显保护作用,可能与其通过清除氧自由基的膜脂质过氧化作用、降低血小板粘附、聚集及诱导内皮细胞合成内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、提高NO含量有关。

维生素C对脂质过氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

为探讨维生素C对脂质过氧化损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其可能的分子作用机制 ,在铜离子诱发的低密度脂蛋白氧化修饰的基础上 ,造成内皮细胞的脂质过氧化损伤模型 ,测定细胞上清液中和细胞内乳酸脱氢酶的活性及其乙酰胆碱诱发的内皮型一氧化氮合酶活性及一氧化氮的生成量。结果发现 ,脂质过氧化物明显增加上清液中乳酸脱氢酶活性 (P <0 .0 1 ) ,增加细胞死亡率 (P <0 .0 1 ) ;同时它也抑制内皮型一氧化氮合酶的活性(P <0 .0 1 ) ,具有剂量 -依赖效应。应用不同剂量的维生素C(浓度为 1 0 0 μmol L和 30 0 μmol L)后 ,该效应明显减弱 ;内皮型一氧化氮合酶活性与一氧化氮生成量之间呈正相关 ,r值分别为 0 .9844(P <0 .0 1 )和 0 .880 2 (P <0 .0 5)。由此提示 ,脂质过氧化物能直接损伤内皮细胞 ,抑制内皮型一氧化氮合酶活性 ;

大蒜素对血管内皮细胞脂质过氧化损伤的保护作用

目的 :观察大蒜素对培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)脂质过氧化损伤的保护作用。方法 :将HUVEC分成空白组、对照组和实验组 ,实验组分别用终浓度为 5 μg/ml、10 μg/ml、2 0 μg/ml、5 0 μg/ml的大蒜素培养液预处理后 ,再加入浓度为 0 .0 6mmol/L的联胺 37℃孵育 2h ,用扫描电镜观察细胞的形态 ,同时测定细胞培养液中一氧化氮 (NO)、丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶 (SOD)的含量。结果 :对照组HUVEC明显受损 ,MDA含量增加 (P <0 .0 1) ,NO、SOD减少 (均为P <0 .0 1) ;实验组与对照组比较 ,HUVEC损伤明显减轻 ,MDA含量降低 (P <0 .0 1) ,NO增加 (P <0 .0 1)、SOD增加 (P <0 .0 1) ,且呈剂量依赖性。结论 :大蒜素对HUVEC脂质过氧化损害具有保护作用。