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嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立
被引量:
6
1
作者
吕沁风
郑伟
+3 位作者
罗鹏
吴忠华
李禾
沈建根
《浙江大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期305-310,共6页
目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法。方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因——mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌和5...
目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法。方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因——mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌和5株其它细菌进行检测,并与普通PCR方法进行比对,验证该方法的特异性和灵敏度。结果:所有嗜肺军团菌扩增产物均产生肉眼可见的白色沉淀,而其它不同菌株均不产生沉淀;加入荧光染料smart green后,嗜肺军团菌扩增产物均产生强绿色荧光,其它菌株呈弱荧光。与普通PCR(检出限约为57.6 pg,)比,LAMP扩增反应的灵敏度大100倍左右,基因组DNA检出限为576 fg,阳性水样检出限为8 cfu/ml。结论:LAMP技术可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏地检测嗜肺军团菌。
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关键词
军团病杆菌
嗜肺
军团杆菌病/诊断
基因扩增
聚合酶链反应/方法
增强子元件(遗传学)
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职称材料
衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达
2
作者
任文君
王群义
+2 位作者
吕小凤
毛泽斌
蒋晓刚
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期215-218,共4页
目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶切得...
目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段;将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件。结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高;在IG-FBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点;5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件。结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30bp序列存在一个新的增强子元件IEE(IGFBP-3enhancerelement),对IGFBP-3的表达起到调控作用。
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关键词
胰岛素样生长因子结合蛋白-3
IEE(IGFBP-3
enhancerelement
)
2BS细胞
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职称材料
题名
嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立
被引量:
6
1
作者
吕沁风
郑伟
罗鹏
吴忠华
李禾
沈建根
机构
浙江大学医学院
浙江国际旅行卫生保健中心
出处
《浙江大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第3期305-310,共6页
文摘
目的:建立一种快速简便的嗜肺军团菌分子检测方法。方法:运用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),设计一套引物特异性识别嗜肺军团菌毒力基因——mip基因的6个特殊区域,在恒温条件下,对8株嗜肺军团菌和5株其它细菌进行检测,并与普通PCR方法进行比对,验证该方法的特异性和灵敏度。结果:所有嗜肺军团菌扩增产物均产生肉眼可见的白色沉淀,而其它不同菌株均不产生沉淀;加入荧光染料smart green后,嗜肺军团菌扩增产物均产生强绿色荧光,其它菌株呈弱荧光。与普通PCR(检出限约为57.6 pg,)比,LAMP扩增反应的灵敏度大100倍左右,基因组DNA检出限为576 fg,阳性水样检出限为8 cfu/ml。结论:LAMP技术可在简易的实验环境中快速、特异、灵敏地检测嗜肺军团菌。
关键词
军团病杆菌
嗜肺
军团杆菌病/诊断
基因扩增
聚合酶链反应/方法
增强子元件(遗传学)
Keywords
Legionella pneumophila
Legionellosis/diag
Gene amplification
Polymerase chain reaction/methods
enhancerelement
s(genetics)
分类号
R378.99 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达
2
作者
任文君
王群义
吕小凤
毛泽斌
蒋晓刚
机构
西安交通大学体育部生物医学信息工程教育部重点实验室
西安市第二医院普外科
北京大学医学部基础医学院生化系
西安交通大学医学院遗传与分子生物学系
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第3期215-218,共4页
基金
国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2007AA042100)
陕西省自然科学基金资助项目(2007C216)
文摘
目的:研究在衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)表达增加的影响因素。方法:用Northernblot的方法显示IGFBP-3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异;PCR扩增出人类IGFBP-3上游包括5′-UTR区的2kb的序列并用酶切得到4组不同长短的IGFBP-3启动子片段;将各片段用Effectene Transfection Reagent试剂盒转染到年轻和衰老细胞中,测出几组构建基因片段的启动活性,确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件。结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因的表达升高;在IG-FBP-3启动子+59到-58序列之间存在着蛋白结合位点;5′-ccagcctgccaagcagcgtgccccggttgc-3′是IGFBP-3的增强子元件。结论:在衰老的2BS细胞中IGFBP-3基因上游-37到-8的30bp序列存在一个新的增强子元件IEE(IGFBP-3enhancerelement),对IGFBP-3的表达起到调控作用。
关键词
胰岛素样生长因子结合蛋白-3
IEE(IGFBP-3
enhancerelement
)
2BS细胞
Keywords
Insulin growth factor bindin protein-3
IEE(IGFBP-3 enhancer element)
2BS cells
分类号
R725.871 [医药卫生—儿科]
R339.38 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
嗜肺军团菌环介导等温扩增检测法的建立
吕沁风
郑伟
罗鹏
吴忠华
李禾
沈建根
《浙江大学学报(医学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2010
6
下载PDF
职称材料
2
衰老细胞中调控胰岛素样生长因子结合蛋白-3的表达
任文君
王群义
吕小凤
毛泽斌
蒋晓刚
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
0
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职称材料
已选择
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