化合物ent-kaur-16-en-19-oic acid对胃癌BGC—823细胞生长抑制作用的实验研究

目的：研究化合物K_1(ent-kaur-16-en-19-oic acid)对BGC-823胃癌细胞的生长抑制作用。方法：采用MTT法观察不同浓度化合物K_1对BGC-823胃癌细胞的生长抑制作用。结果：化合物K_1对BGC-823胃癌细胞增殖有明显的抑制作用。

化合物ent-kaur-16-en-19-oicacid对小鼠S180瘤株抑制作用研究

目的:研究化合物ent-kaur-16-en-19-oic acid对小鼠S180瘤株的抑制作用。方法:称取定量的ent-kaur-16-en-19-oic acid,用食用植物油溶解后,加入等量吐温-80,充分搅拌后加入8倍量蒸馏水配制成所需浓度的溶液。将已接种S180瘤株的小鼠模型24h后随机分组,各组均连续给药8天,停药后1天将小鼠脱颈椎处死,剥取瘤称重。结果:ent-kaur-16-en-19-oic acid有明显抑制S180实体瘤的作用,高、中剂量组抑瘤率均在40%以上。结论:ent-kaur-16-en-19-oicacid有一定的抗肿瘤活性。

化合物ent-kaur-16-en-19-oic acid的含量研究

目的:采用高效液相色谱法测定化合物ent-kaur-16-en-19-oic ac id在光叶番荔枝不同部位和番荔枝属不同种类植物叶子中的含量。方法:色谱条件为:Nuc leosil C18色谱柱,流动相选用乙睛:水(含1%冰醋酸)=67.5:32.5,检测波长211nm。结果:平均回收率为98.41%,光叶番荔枝树皮、光叶番荔枝树枝(去皮)、光叶番荔枝树叶、AP番荔枝树叶、牛心番荔枝树叶、山刺番荔枝树叶中化合物ent-kaur-16-en-19-oic ac id的含量分别为0.7147%、0.01252%、0.01773%、0.04212%、0.007305%、0.09083%。结论:在光叶番荔枝各部位中,树皮的含量最高,达0.7147%,在所测番荔枝属植物的树叶中,山刺番荔枝树叶中含量最高,达0.09083%。

不同产地半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定

目的:建立半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定方法。方法:采用HPLC法,ODSC18柱(25mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-4mM的醋酸铵水溶液(2∶3),流速为1.0ml.min-1,检测波长为242nm。结果:11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖在0.8～4.8μg范围内呈良好的线性关系(r=0.9998);半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量,广东湛江产最高,为4.609mg·g-1生药,广东廉江最低为1.515mg·g-1生药。结论:本方法简便、可靠,适用于半边旗中11β-羟基-15-氧-对映贝壳杉-16-烯-19-酸19-β-D-葡萄糖的含量测定。

ROS不参与Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid诱导的HepG2细胞凋亡

目的:确定活性氧(ROS)生成在Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)所诱导的HepG2细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT分析检测5F对HepG2细胞增殖的影响,再以Hoechst/PI法分析凋亡细胞的形态变化。为了评价细胞内ROS水平,采用了GENMED试剂盒。HepG2细胞经5F处理24 h,或1 mmol.L-1GSH预处理1 h再经5F处理24 h,然后以Cell Death Detection ELISA试剂盒检测胞浆核小体片段。结果:通过细胞活性分析证实,5F对HepG2的细胞毒作用随着5F浓度升高而增强。而凋亡变化,如染色质浓缩,则被Hoechst/PI染色所证实。经5F处理的HepG2细胞内ROS生成减少被观察到。5F诱导的胞浆核小体片段并不由于GSH降低ROS介导的信号转导水平而发生变化。并且,顺铂(CDDP)诱导的ROS生成可被5F清除,同时5F还显示了与CDDP协同杀伤细胞作用。结论:5F不仅能通过非ROS依赖途径诱导细胞凋亡,还可缓解氧化应激。

5F对人高转移巨细胞肺癌PGCL_3细胞PTEN、MMP-9表达的影响

目的研究Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(以下简称5F)对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞毒性、侵袭能力及PTEN、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法 MTT法检测5F对PGCL3细胞增殖抑制的影响;用Transwell小室法检测5F对PGCL3细胞侵袭能力和趋化性运动能力的影响;RT-PCR和Western blot方法检测5F对PGCL3细胞侵袭转移相关基因PTEN、MMP-9表达水平的影响。结果 5F对PGCL3细胞的增殖、侵袭及运动能力均有明显的抑制作用(均P<0.05)。5F作用于人PGCL3细胞24h,能明显上调PTEN mRNA和蛋白的表达,下调MMP-9mRNA和蛋白的表达。结论 5F能抑制PGCL3细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过上调PTEN和下调MMP-9表达水平而实现的。

两似蟹甲草化学成分研究

目的：对两似蟹甲草化学成分进行研究。方法：对两似蟹甲草的化学成分利用各种色谱方法分离精制，利用各种波谱方法鉴定其结构。结果：从该药用植物中分离得到四种化合物，利用波谱方法确定它们的结构分别为对映坝壳杉-16-烯-19-羧酸（1）、13β-贝壳杉-16β-醇（2）、β-谷甾醇（3）及1-甘油醇廿六烷酸酯（4）。结论：化合物1～4均为首次从该植物分离得到，其中化合物1、2为从本属植物中首次得到。

半边旗抗肿瘤活性成分5F对照品的制备和鉴定

制备并鉴定了半边旗抗肿瘤活性成分11α-羟基-15-氧-16-烯-对映贝壳杉烷-19-酸(5F)的对照品。采用二氧化碳超临界萃取、有机溶剂萃取、柱层析、重结晶方法进行分离、纯化以制备半边旗5F化合物单体;采用TLC、HPLC-MS检测杂质;采用HPLC峰面积归一化法测定纯度;采用理化性质、波谱特征鉴定其化学结构。结果表明,从半边旗地上部分的二氧化碳超临界萃取物中分离得到纯度为99.2%的5F对照品。该对照品可以作为半边旗药材以及主要成分为5F的药物制剂含量测定的对照物。

高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定食用土当归总有机酸中贝壳杉烯酸及海松酸含量

目的建立测定食用土当归总有机酸中贝壳杉烯酸及海松酸含量的高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)法。方法采用反相高效液相色谱法,使用YMC-Pack ODS-AQ色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液(76∶24)为流动相,检测波长为202 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为15μL。结果贝壳杉烯酸及海松酸进样量分别在2.257~4.514μg(R^2=0.999 6)和2.839~5.678μg(R^2=0.999 6)范围内与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为100.30%和99.65%,RSD分别为1.68%和1.46%。10批食用土当归总有机酸中贝壳杉烯酸和海松酸的平均含量分别为19.23%和27.64%,同时食用土当归总有机酸中贝壳杉烯酸含量均不低于17.00%,海松酸含量均不低于24.00%。结论本研究中采用HPLC-DAD法首次测定了食用土当归总有机酸中贝壳杉烯酸及海松酸含量。该方法简便、灵敏、准确、重复性好,为食用土当归总有机酸质量标准的制订奠定了基础。

5F对人绒癌JAR细胞株侵袭转移能力的影响

目的:探讨Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人绒癌JAR细胞侵袭、转移、黏附的影响及MMP-9、VEGF表达的变化。方法:用不同浓度的5F作用JAR细胞,MTT比色法,Transwell小室,细胞黏附实验观察其增殖、侵袭、迁移、黏附能力的变化;Western blot方法检测5F对JAR细胞MMP-9、VEGF表达水平的影响。结果:作用6 h,5F能抑制JAR细胞的增殖、转移、侵袭、黏附,其抑制率呈剂量效应(P<0.05)。5F作用24 h JAR细胞,MMP-9、VEGF蛋白表达水平能明显下调。结论:5F能抑制JAR细胞的侵袭、转移、黏附并下调MMP-9、VEGF蛋白表达水平。

刺齿凤尾蕨抗肿瘤活性成分5F的含量测定

目的:建立测定刺齿凤尾蕨中抗肿瘤成分5F含量的方法,并测定其不同部位中5F的含量。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为HypersilC1(8250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-1%醋酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0mL·min-1,检测波长为242nm,柱温为30℃。结果:5F检测浓度在6～96μg·mL-1范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r=0.9981);低、中、高浓度对照品加入量对应的平均加样回收率分别为103.33%、100.84%、100.39%,RSD分别为5.86%、3.05%、1.02%(n均为6)。5F在刺齿凤尾蕨叶中含量最高,茎中含量其次,根中含量最低。结论:本方法稳定、快速且杂质干扰小,可用于刺齿凤尾蕨中5F的含量测定。