新型超声快速处理活检标本保存不同年限对DNA质量的影响

背景:新型超声组织处理技术越来越多地被用来进行分子生物学分析,研究新型超声处理不同存储年限组织DNA的质量,对进一步分子检测的标本质控具有重要意义。目的:探讨新型超声处理活检标本存储不同年限对DNA质量的影响,以期为分子检测探索最佳的标本存储时间。方法:收集40例乳腺穿刺小活检组织,采用超声技术制作石蜡标本,按照存储年限分为4组:<1年组、1-3年组、>3-5年组及>5年组,每组10例,对石蜡标本进行切片,每张切片厚3μm,切片10-15张,提取DNA后通过Nanophotometer N60超微量分光光度计和Qubit 4.0荧光计检测DNA的质量浓度,记录A_(260)/A_(280)比值判定DNA的纯度,利用全自动毛细管电泳核酸分析仪(Qsep 100)检测DNA片段完整性,以评估DNA片段的质量。结果与结论:4组样本A_(260)/A_(280)均值在1.8-2.0之间,达到纯度要求,无明显差异。4组样本的DNA质量浓度(Qubit浓度)均值分别为30.39,14.33,2.52,1.95 ng/μL;DNA的平均N/Q比值分别为6.48,14.18,24.56,29.86;DNA质量数均值分别为5.64,1.76,1.24,0.80;大片段占比均值分别为56.08%,17.72%,12.68%,7.90%。PCR检测内控基因Ct均值分别为15.32,17.09,18.39,21.24。与<1年组相比,其余3组DNA浓度显著降低,N/Q比值显著增加,DNA质量数和大片段占比均值显著降低,Ct值升高,差异有显著性意义(P<0.05)。实验结果表明,对于新型超声处理活检标本,应优先选择存储<1年的样本进行日常分子检测,储存3年内的样本可满足二代测序等检测要求,5年内样本仅可尝试进行PCR等检测,存储超过5年的样本不建议进行后续分子检测。

DNA甲基化转移酶1表达水平与急性髓系白血病临床特征的相关性

目的 探讨DNA甲基化转移酶1(DNMT1)在急性髓系白血病(AML)患者中的表达水平,并分析其与临床特征和分子突变的相关性。方法 本研究纳入34例初诊AML患者和17例复发/难治(R/R)AML患者,另选取同时期50例健康体检的正常受试者作为对照组。通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(WB)和免疫组织化学染色法,检测了样本中DNMT1的表达水平,并评估了其与临床特征及分子突变的关联。结果 初诊AML组、R/R AML组患者组中DNMT1的表达水平显著高于对照组(F=226.385, P<0.05)。DNMT1表达水平与复发状态、年龄、血红蛋白计数、外周血原始细胞比例、DNMT3A突变、RAS突变和NPM1突变呈正相关(β>0),而与白细胞计数、血小板计数、骨髓原始细胞比例、FLT3突变、IDH1突变和TP53突变呈负相关(β<0)。多因素分析显示,复发状态是DNMT1表达水平的独立危险因素(OR=132.497,95%CI=2.053~8 550.566,P=0.022)。结论 DNMT1的表达水平与AML患者的复发状态、临床参数和分子突变密切相关,可作为AML的潜在生物标志物和治疗靶点。

基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片预测模型与验证

背景:中医证候与精液质量相关参数相结合,共同预测精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)异常增高的发生并绘制列线图,能显著提高临床的实操性与应用效能,为临床全面评估精液质量,采取积极干预措施以改善临床结局及制定个体化医疗方案提供依据。目的:探讨基于中医证候与精液质量相关参数构建精子DNA碎片的预测模型与验证。方法:回顾性分析2019年7月至2021年7月在广西壮族自治区南溪山医院中医男科接受中医证候诊断及精子DNA碎片率检查的不育患者共420例,据《人类精液检查与处理实验室手册》(第6版),将其中137例精子DFI>30%患者纳入精子DFI异常增高组,将283例精子DFI≤30%作为对照组;首先采用单因素分析筛选精子DFI异常增高的影响因素,然后采用套索算法(LASSO)校正因子共线性问题并筛选出最佳匹配因子后,将其纳入多因素向前逐步Logistic回归找出其独立影响因素并绘制列线图,最后采用受试者工作曲线、校准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线对该预测模型进行区分度与准确度及临床应用效能验证。结果与结论:①单因素分析结果显示,年龄、体质量指数、前向运动率、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证为引发精子DFI异常增高的影响因子(P<0.05);②通过LASSO回归进一步筛选出的最佳匹配因素为年龄、体质量指数、精子总活率、精子浓度、精子形态学、肾阳虚衰证、湿热下注证、肾精不足证(P<0.05);③多因素向前逐步Logistic回归结果显示年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证共6项为引发精子DFI异常增高的独立影响因素;④受试者工作曲线显示,模型组曲线下面积为0.760(0.713,0.806),验证组曲线下面积为0.745(0.714,0.776),说明该预测模型具有较好的区分度;⑤校准曲线平均绝对误差0.040,Hosmer-Lemeshow检验P>0.05,表明该模型预测发生精子DFI异常增高的概率与实际发生精子DFI异常增高的概率无显著统计学差异,证实该模型具有较好的准确度;⑥临床决策曲线与临床影响曲线显示,模型组与验证组分别在阈概率值为0.08-0.84与0.09-0.78时具有临床最大净获益,且在该阈概率范围内具有较好的临床应用效能;⑦结果表明,年龄、体质量指数、精子浓度、精子总活率、湿热下注证、肾阳虚衰证为引发精子DFI异常增高的独立影响因素,通过其构建的临床预测模型列线图具有较好的临床预测价值与临床应用效能,可为临床全面评估精液质量、预后与干预及个体化医疗服务提供依据。

FTA-环介导等温扩增技术直接提取变异链球菌DNA的效果评价

背景:变异链球菌是龋病的重要病原菌,及时检测变异链球菌水平对龋病的早发现、早治疗有重要意义。目的:建立并评价FTA-环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术直接提取变异链球菌DNA的应用效果。方法:①制备含有ATCC标准菌株变异链球菌的菌悬液,接种于脑心浸出液培养基,充分混匀后按10倍梯度稀释成7种浓度(4.2×10^(7),4.2×10^(6),4.2×10^(5),4.2×10^(4),4.2×10^(3),4.2×10^(2),4.2×10 CFU/mL),每个稀释级做2个平行对照,并增加无菌水作为空白对照;②分别采用FTA卡、常规煮沸法、试剂盒提取及裂解液提取4种方法直接提取菌株DNA,通过LAMP技术进行扩增,并进行特异性试验,比较4种提取方法的差异。结果与结论:①4种方法提取的DNA均满足LAMP扩增的要求;②特异性试验结果显示,只有变异链球菌才可特异扩增出靶基因;③裂解液提取法最低检测限为4.2×10^(3) CFU/mL,FTA卡提取法最低检测限为4.2×10^(4) CFU/mL,试剂盒提取法和常规煮沸法最低检测限分别为4.2×10^(6) CFU/mL和4.2×10^(7) CFU/mL;④4种提取方法其他方面的比较显示,试剂盒提取法的实验成本、步骤数和时间都是最高;其他3种方法步骤数一致,其中FTA卡所需仪器设备最少,常规煮沸法单次成本最低,裂解液提取法所需时间最少;FTA卡和裂解液提取法仅需少量菌即可提取成功,后者在时间方面优于FTA卡,但相较于FTA卡其单次成本高,所需设备多;⑤结果说明,该研究建立的FTA-LAMP技术具有操作简便、特异性强、灵敏度高、结果可视化等优势,有望为高效提取检测变异链球菌提供新途径。

基于活产建立体外受精-胚胎移植精子DNA碎片指数的参考阈值及子代短期安全性

背景:精子DNA碎片指数与受精、胚胎发育潜能、胚胎植入、流产及子代安全性等存在显著的相关性。然而,其临床参考值受多种因素的影响,导致临床意义极其有限,该研究以活产为结局,通过倾向评分匹配校正其他混杂因素后,构建精子DNA碎片指数与活产的最佳临床截断值,并对其进行内外部验证,具有较好的预测价值及临床应用效能。目的:探讨基于活产建立体外受精-胚胎移植精子DNA碎片指数的参考阈值及子代短期安全性。方法:选取2019年5月至2021年5月于常州市妇幼保健院接受体外受精-胚胎移植患者1921例,以倾向匹配容差0.02为标准,1∶1进行倾向评分匹配,结果活产组与非活产组各成功匹配540例,以此建立模型组;通过选取同时期广西壮族自治区南溪山医院接受体外受精-胚胎移植患者135例作为外部验证组;采用受试者工作曲线探求精子DNA碎片指数对活产的临床最佳截断值,分别采用限制性立方样条曲线、标准曲线、临床决策曲线、临床影响曲线及内外部验证等方法,对该截断值的准确性及临床应用效能进行评估。结果与结论:(1)非活产组精子DNA碎片指数显著高于活产组且与活产存在显著的负相关性(r=-0.444,P<0.001);(2)受试者工作曲线结果显示,DNA碎片指数对活产的最佳截断值为24.33%,曲线下面积为0.775(0.746,0.804),特异度为72.60%,敏感度为78.90%,准确度为75.70%;(3)限制性立方样条曲线拟合Logistic回归结果显示,当精子DNA碎片指数大于24.57%时,临床非活产的风险呈趋势性增涨;(4)Logistic回归概率分析结果显示,精子DNA碎片指数为活产的危险因素[OR(95%CI)=0.916(0.904,0.928),P<0.001],且当精子DNA碎片指数大于27.78%时,临床活产发生的概率将小于50%,随着精子DNA碎片指数每增高1个单位,活产的概率下降8.4%;(5)内外部对该临床截断值的验证均显示,该截点具有一定的临床预测价值及准确性;(6)临床决策曲线与临床影响曲线显示,以该临床截断值建立的预测模型在阈概率为0.22-0.73时具有临床最大净获益值,且在该阈概率范围内损失与获益的比值始终小于1,证实该预测模型具有较好的临床应用效能;(7)精子DNA碎片指数与子代短期安全性分析结果显示,精子DNA碎片指数与出生儿早产、体质量、畸形、性别差异无显著性;(8)结果表明,精子DNA碎片指数对体外受精-胚胎移植活产的最佳临床截断值为24.33%,以此建立的临床预测模型具有较好的区分度、准确度与临床应用效能,精子DNA碎片指数对子代短期安全性影响并不显著,但仍需大样本及长期的追踪评估。

基于SM2和DNA的图像加密算法

近年来,随着互联网的全面普及,公民对信息安全和隐私保护提出了新的更高的要求,为了保护公民的数据安全,并且满足“打赢新时代网络战争”的要求,对图像加密算法的研究与实现进行深入的研究,提出了一种基于国密SM2数字信封和脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)编码的图像加密技术,将图像编码技术、公钥技术、口令保护技术相结合.在该算法中,通过使用Python重点实现了密钥空间的复杂性、图像的鲁棒性、随机性、低相关性,同时对图像的直方图进行了分析,研究结果表明,在实现公钥加密算法国产化替代的同时,增强了加密的安全性.

第四纪晚期中国大型哺乳动物古DNA研究进展

从古DNA视角探讨古代生物的遗传组成已有40多年历史。自2005年开始,随着高通量测序技术平台的开发应用及对小片段DNA分子提取能力的加强,古DNA研究跨入全新的深时古基因组时代,不仅解决了诸多生物谱系系统学问题,丰富了包括人类在内的多种生物的迁移、演化细节,而且启动了“全基因组-大数据-多物种”尺度研究生物对气候变化的分子响应,将古DNA研究涉及的样品年代从10万年以内拓展到近200万年前的早更新世。中国科学家近几年在东亚人群遗传演化和迁徙融合方面实现了诸多有影响力的突破,填补了现代人类演化进程中的重要“缺环”。相比而言,学界对除人类之外的脊椎动物古DNA研究关注度较低。本文回顾了第四纪晚期中国大型哺乳动物古DNA研究系列进展,分别总结了相关研究在揭示古代群体与现生群体的系统演化关系、古哺乳动物基因交流、动物种群对气候变化的分子响应等方面的研究突破,并对中国哺乳动物古基因组领域面临的机遇和挑战进行了展望。

病原宏基因组测序DNA检测流程性能验证及结果分析

目的 建立病原宏基因组测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)DNA检测流程的性能验证方案。方法 设计参考品并收集临床样本,从检测限、重复性、稳健性、抗干扰能力、特异性和准确性等维度评价mNGS分析性能,以及对不同建库方式及测序仪性能参数进行评估。结果 参考品内各物种均能稳定检出,mNGS检测限为(5.0E+02)CFU/mL(copies/mL)。重复性符合率100%,批内变异系数(coefficient of variation, CV)介于8.53%~38.73%。病原投入浓度与检出序列数的线性相关系数|r|>0.9,mNGS检测系统具有良好的稳定性。抗干扰实验结果显示,人源核酸浓度越高,mNGS检出病原序列数越少。近缘物种检出序列数比值与实际病原浓度比值接近,具有良好的检测特异性。零病原投入组D0检测结果为阴性。临床样本病原检出准确率为90.9%(10/11)。自动化移液工作站与手工建库的文库质控结果均合格。三台测序仪运行性能参数均满足或优于出厂标准。结论 初步建立了包含参考品设计、不同建库方式比较和测序仪性能参数评价等多方面在内的mNGS DNA检测流程的性能验证方案,可用于mNGS临床实验室分析性能评价及实验过程中的质量保障。

循环肿瘤DNA与EGFR、KRAS、NRAS突变型可切除非小细胞肺癌的病理关系

目的 探讨循环肿瘤DNA(ctDNA)与表皮生长因子受体基因(EGFR)、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)、神经母细胞瘤RAS病毒致癌基因(NRAS)突变型可切除非小细胞肺癌(NSCLC)患者临床病理特征的关系。方法 纳入在我院接受手术切除并且在生物库中有匹配血浆样本的36例NSCLC患者进行突变分析。使用肽核酸钳制PCR法分析血浆ctDNA和活检组织EGFR、KRAS、NRAS突变,探讨血浆ctDNA脱落与患者临床病理特征的关系。结果 36例患者活检组织和血浆样本中EGFR、KRAS、NRAS的一致性分别为63.89%(23/36)、88.89%(32/36)、86.11%(31/36)。在突变型肿瘤中,血浆ctDNA中EGFR、KRAS、NRAS突变检测的敏感度分别为23.53%(4/17)、33.33%(2/6)、40.00%(2/5)。在腺癌患者中,血浆ctDNA脱落与较高的肿瘤分期、N分期、TNM分期、肿瘤坏死率、10HPFs核分裂象及较大的肿瘤最大直径、肿瘤体积有关(P<0.05)。在肺腺癌患者亚组分析中,ctDNA脱落与较高的N分期、血管浸润率、肿瘤坏死率、10HPFs核分裂象及更大的肿瘤最大直径、肿瘤体积显著相关(P<0.05)。结论 肺腺癌ctDNA脱落与原发性肿瘤的直径、体积以及侵袭性组织学特征(如坏死和高核分裂象)有关。

阿魏酸对乙醇诱导的LO2肝细胞DNA损伤的修复机制研究

阿魏酸是一种天然化合物,其对肝细胞的影响尚不完全清楚。该研究旨在探讨不同浓度阿魏酸对乙醇诱导的LO2肝细胞DNA损伤的潜在修复机制。通过将不同浓度的阿魏酸作用于LO2肝细胞,并分析其对细胞增殖活性的影响。进一步研究了乙醇对LO2细胞周期的影响及阿魏酸的干预作用,使用Western blot技术检测DNA损伤标记物p-H2AX的表达,以及通过流式细胞仪检测活性氧水平和细胞自噬的变化。结果表明,阿魏酸在低浓度时能促进LO2细胞增殖,中等浓度(0.25~2 mmol/L)能显著减少乙醇诱导的p-H2AX表达,降低活性氧水平,并可能促进细胞自噬。然而,高浓度阿魏酸则显示出对细胞的毒性作用,在DNA修复和自噬方面有潜在抑制效应。该研究表明,在特定浓度范围内,阿魏酸能够对抗乙醇诱导的LO2肝细胞DNA损伤,并可能通过促进细胞自噬机制来增强细胞的修复能力。但在高浓度下,阿魏酸则可能逆转其保护效应,表现出细胞毒性。

融合全置乱超混沌序列和DNA编码的图像加密

图像加密是保护图像安全的重要方法,现有的图像加密方案安全性不高且加解密效率较低,无法抵御多种类型的攻击。针对上述问题,提出一种基于全置乱超混沌序列和多进制脱氧核糖核酸(DNA)编码的图像加密算法,以提高加密效率同时保证密文图像的安全性。首先,结合灰度图像的内容,使用图像哈希算法和外部密钥生成五维超混沌系统和逻辑映射的初始值;其次,将原始图像转换为四值图像,使用五维超混沌系统和逻辑映射生成的混沌序列对图像进行DNA加密,包括DNA编码、DNA置乱、DNA扩散和DNA解码4个阶段;最后,对图像进行位平面分解,利用五维超混沌系统和逻辑映射生成的随机矩阵分别与高四位平面和低四位平面做异或运算,得到最终的密文图像。实验结果表明,该图像加密算法具有密钥空间大、密钥敏感性强、加密效果良好、加密效率高等优点,能够抵抗统计分析、差分攻击、裁剪攻击、噪声攻击等多种常规攻击方式。

线粒体DNA释放机制及其诱导炎症反应研究进展

线粒体是负责协调三羧酸循环、钙平衡、细胞凋亡、细胞死亡、细胞周期和炎症等多种生命活动过程的重要细胞器。不同于细胞内的其他细胞器,线粒体中含有少量的线粒体DNA(mtDNA)。正常情况下,mtDNA以拟核的形式均匀分布在线粒体基质中,维持线粒体稳态。但是当细胞处在衰老、凋亡、代谢紊乱、缺氧等应激情况下,线粒体功能异常,mtDNA通过线粒体膜通透性转换孔、Bax/Bcl-2同源拮抗剂/杀伤剂(Bak)大孔释放到细胞质,或者是通过纳米管通道、细胞外囊泡、迁移体、缝隙连接蛋白通道等多种途径排出到细胞外。mtDNA从线粒体释放后激活Toll样受体9、核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族热蛋白结构域蛋白3炎症小体、细胞质环状GMP/AMP合酶干扰素基因刺激物信号通路,促进炎性细胞因子释放,诱发炎症反应,参与衰老、阿尔茨海默病等多种疾病的发生发展。

肺癌诊断涉及DNA甲基化的研究进展

目前,世界上肺癌的发病率和死亡率较高,越来越多的研究表明,在肿瘤的发生发展中表观遗传学修饰占据着非常重要的地位,最具有特征性的表观遗传修饰方法为DNA甲基化。DNA异常甲基化涉及肺癌发生、发展的各个时间段,与肺癌的诊疗有着密切的关系,可影响肺癌的高发病率及死亡率。本文旨在讨论对肺癌诊断涉及DNA甲基化的相关研究进展。

基于中美教材对比的“DNA粗提取”实验改进

人教版教材与美国教材在“DNA粗提取”的实验步骤表述上存在差异。本研究参考美国教材的实验方法,对人教版教材的实验进行改进。实验结果表明,在材料的选取上可选用洋葱也可选用玉米粒,在破碎细胞的方式上如果不进行DNA的鉴定则建议增加研磨前处理,在纯化DNA的方式上建议加入蛋白酶且需预留出酶促反应时间及调整反应温度。

苯氧乙酸铅配合物的合成、结构及与CT-DNA/HSA结合

以苯氧乙酸为配体,合成了一个苯氧乙酸铅配合物。通过UV-Vis和荧光光谱手段对配合物与CT-DNA及HSA的相互作用的方式进行研究,结果显示,随着配合物浓度的增加,CT-DNA的黏度也增加,表明配合物以插入方式与CT-DNA结合。配合物与CT-DNA的结合常数K_b为1.43×10^(3)L/mol,结合位点数n为1。此外,对CT-DNA的猝灭常数K_(sv)为2.04×10^(3)L/mol,猝灭速率常数K_q为2.04×10^(11)L/mol·s^(-1)。配合物对HSA的猝灭常数K_(sv)为9.49×10^(8)L/mol,猝灭速率常数K_(q)为9.49×10^(16)L/mol·s^(-1),配合物与HSA的结合常数K_(a)为5.53×10^(9)L/mol,结合位点数n为1。配合物能够静态猝灭CT-DNA和HSA的荧光强度。

DNA甲基化在肺癌中的研究进展及其临床应用前景

肺癌作为全球范围内致死率极高的恶性肿瘤,其发生和发展受表观遗传修饰机制影响,其中DNA甲基化备受关注。DNA甲基化通过影响细胞的正常功能参与肺癌的发生和发展。肺癌组织中的DNA甲基化模式不仅在肺癌的发生和进展中发挥重要作用,还可作为肺癌诊断、预后评估和靶向治疗的潜在生物标志物。本文综述DNA甲基化在肺癌领域的最新研究进展及其在临床应用中的广阔前景。

Peripheral mitochondrial DNA as a neuroinflammatory biomarker for major depressive disorder

In the pathogenesis of major depressive disorder, chronic stress-related neuroinflammation hinders favorable prognosis and antidepressant response. Mitochondrial DNA may be an inflammatory trigger, after its release from stress-induced dysfunctional central nervous system mitochondria into peripheral circulation. This evidence supports the potential use of peripheral mitochondrial DNA as a neuroinflammatory biomarker for the diagnosis and treatment of major depressive disorder. Herein, we critically review the neuroinflammation theory in major depressive disorder, providing compelling evidence that mitochondrial DNA release acts as a critical biological substrate, and that it constitutes the neuroinflammatory disease pathway. After its release, mitochondrial DNA can be carried in the exosomes and transported to extracellular spaces in the central nervous system and peripheral circulation. Detectable exosomes render encaged mitochondrial DNA relatively stable. This mitochondrial DNA in peripheral circulation can thus be directly detected in clinical practice. These characteristics illustrate the potential for mitochondrial DNA to serve as an innovative clinical biomarker and molecular treatment target for major depressive disorder. This review also highlights the future potential value of clinical applications combining mitochondrial DNA with a panel of other biomarkers, to improve diagnostic precision in major depressive disorder.

TET甲基胞嘧啶双加氧化酶2和DNA甲基化转移酶3A基因表达水平与骨髓增生异常综合征分型及预后的关系

目的探索TET甲基胞嘧啶双加氧化酶2(TET2)、DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)基因表达水平与骨髓增生异常综合征(MDS)患者临床分型及预后的关系。方法回顾性选取2015年1月至2022年12月河北省石家庄市人民医院收治的97例MDS患者纳入观察组,另选取同期本院体检不合并血液系统疾病者90例纳入对照组、再生障碍贫血患者87例纳入相似对照组。比较3组TET2、DNMT3A基因表达水平,对比MDS各分型以及各预后分级患者基因表达水平差异。结果观察组TET2基因表达水平均低于对照组和相似对照组,DNMT3A基因表达水平均高于对照组和相似对照组(均P<0.001),但在MDS不同分型患者间比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。随着预后危险程度增加,TET2基因表达水平整体呈现降低趋势,DNMT3A基因表达水平整体呈现升高趋势(均P<0.001)。TET2基因表达水平与MDS预后不良呈负相关(r=-0.664,P<0.001),DNMT3A基因表达水平与MDS预后不良呈正相关(r=0.639,P<0.001)。结论TET2、DNMT3A基因表达水平在MDS各分型间无明显差异,但与MDS预后显著相关,临床上对于患者预后判断具有参考意义。

肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液中肺炎支原体DNA载量与D-二聚体、乳酸脱氢酶水平及其预测价值

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿肺泡灌洗液中肺炎支原体DNA(MP-DNA)载量、D-二聚体(D-D)水平及乳酸脱氢酶(LDH)水平对疾病严重程度的预测价值。方法选取2023年3月1日至2023年12月30日安徽省儿童医院感染科收治的180例MPP患儿,男性93例,女性87例,年龄(6.00±2.25)岁,年龄范围为1~13岁。根据MPP的严重程度分为轻症组(n=104)和重症组(n=76)。比较两组间肺泡灌洗液中MP-DNA载量、D-D和LDH水平,分析MP-DNA载量与D-D和LDH的相关性,并通过受试者操作特征(ROC)曲线评估三项指标对重症MPP的预测价值。结果重症MPP组MP-DNA载量和D-D水平显著高于轻症组,差异有统计学意义(P<0.05)。MP-DNA载量与D-D(r=0.496,P<0.001)和LDH(r=0.325,P=0.004)水平均呈正相关,且与D-D的相关性较强。ROC曲线分析结果显示,MP-DNA载量在预测重症MPP中的曲线下面积为0.740,明显高于D-D(曲线下面积为0.614)和LDH(曲线下面积为0.554)。结论MP-DNA载量和D-D水平在重症MPP患儿中显著升高,具有重要的预测价值,其中MP-DNA载量的诊断效能更高。

基于DNA条形码鉴别青葙子与鸡冠花子及其遗传多样性分析

目的应用分子生物学鉴定技术,筛选出应用于鉴定青葙子与鸡冠花子的最佳DNA条形码,建立快速、准确、便捷的青葙属植物鉴定方法。方法收集青葙子、鸡冠花子样品共计21份,提取样品总DNA,对内部转录间隔区(ITS)、psbA-trnH、matK、rbcL和trnL-trnF序列进行扩增和测序,采用MEGA-X软件对数据进行分析处理,计算Kimura-2-parameter遗传距离,建立邻接聚类进化树,进行对比分析,基于TaxonDNA计算BestMatch、BestCloseMatch以评估DNA条形码的鉴别能力,利用ITS2数据库和RNAfold数据库预测条形码序列二级结构。结果条形码ITS、matK、psbA-trnH、rbcL、trnL-trnF序列均扩增成功且具有较高的测序成功率,其中psbA-trnH具有最多的变异位点,ITS次之。psbA-trnH、ITS2、trnL-trnF具有较明显的条形码间隙,以psbA-trnH最为显著(100%)。系统进化树显示,IITS、ITS2、psbA-trnH、matK、trnL-trnF序列均可将青葙子与鸡冠花子各自聚为一支,各分支点的支持率均高于60%,以psbA-trnH、trnL-trnF的各分支点的支持率最高(99%)。分子方差分析结果显示psbA-trnH序列的群体遗传分化指数最高,适用于区分青葙子和鸡冠花子物种间差异。除matK外,青葙子与鸡冠花子psbA-trnH、ITS2、trnL-trnF序列的二级结构均有差异。结论以psbA-trnH为主、ITS和trnL-trnF为辅,可实现青葙子和鸡冠花子的准确鉴定。