Comparison of chemiluminescence enzyme immunoassay based on magnetic microparticles with traditional colorimetric ELISA for the detection of serum α-fetoprotein

A chemiluminescence enzyme immunoassay based on magnetic microparticles (MmPs-CLEIA) was developed to evaluate serum a-fetoprotein (AFP) in parallel with traditional colorimetric enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).A systematic comparison between the MmPs-CLEIA and colorimetric ELISA concluded that the MPs-CLEIA exhibited fewer dosages of immunoreagents,less total assay time,and better linearity,recovery,precision,sensitivity and validity.AFP was detected in forty human serum samples by the proposed MPs-CLEIA and ELISA,and the results were compared with commercial electrochemiluminescence immunoassay (ECLIA) kit.The correlation coefficient between MPs-CLEIA and ELISA was obtained with R 2 0.6703;however,the correlation between MPs-CLEIA and ECLIA (R 2 0.9582) was obviously better than that between colorimetric ELISA and ECLIA (R 2 0.6866).

乙肝病毒核心相关抗原检测试剂盒的研发及临床检测

目的:研发一种检测乙肝病毒核心相关抗原(hepatitis B core-related antigen,HBcrAg)的定量检测试剂盒并评价其性能。方法:通过研究原材料抗体、优化制备工艺和调整反应体系建立HBcrAg化学发光免疫检测方法,组装成试剂盒后利用重组HBcrAg和临床血清进行检测性能评估,数据处理使用IBM SPSS Statistics 20软件。结果:该试剂盒标准曲线为y=143.37x+344.91,R^(2)=0.9998;检测灵敏度为1.43 pg/mL;健康人参考区间≤25.595 pg/mL;检测208例慢性乙型肝炎患者血清,所有(18/18)乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)DNA10^(8)~10^(4)IU/mL血清HBcrAg检出值都在这个临界值以上;92.31%(24/26)HBV DNA10^(3)~10^(2)IU/mL血清HBcrAg检出阳性;44.51%(73/164)HBV DNA低于检出限血清HBcrAg检出阳性。结论:本试剂盒能较好地检测慢性乙型肝炎患者血清中的HBcrAg水平,在辅助慢性乙型肝炎患者治疗效果监测和正确判断治疗终点方面具有重要应用价值。

盐酸克仑特罗ELISA试剂盒的研制

在间接竞争酶联免疫吸附法的基础上,研制了一种可以检测尿样或食品中盐酸克仑特罗的试剂盒。ELISA检测方法的各个影响因素均通过实验进行了优化。该试剂盒具有良好的灵敏度,半抑制率(IC50)为0.6ng/ml,该抗体与肾上腺素等结构类似物的交叉反应率均小于0.3%,回收率为90%～104%,批内变异系数小于6%,批间变异系数小于10%,试剂盒在12个月保存期内稳定。可用于盐酸克仑特罗的快速定量检测。

酶联免疫吸附试验在食品检测中的应用

本文简要介绍了ELISA的基本原理和类型,详述了国内外使用ELISA方法在食品过敏源、农药残留、致病微生物、转基因等方面检测的最新研究进展,列出了部分目前市售用于食品检测的试剂盒,并对该检测技术的发展趋势及其在食品安全检测中的应用前景进行了展望。

盐酸克伦特罗的酶联免疫分析试剂盒的研制——Ⅱ克伦特罗酶联免疫检测方法的研究

〔目的〕在成功制备关键试剂的基础上 ,建立克伦特罗酶联免疫检测方法 ,并研制其测试盒。〔方法〕应用ELISA法重复测定样品 ,变异系数为 6.9% ,方法的添加回收率尿样为 92 .5 % ,检测限可达 0 .1ng/ml ,克伦特罗抗体与沙丁胺醇、异丙肾上腺素交叉反应率分别为 1.2 5 %、0 .0 3 %。〔结果〕自制的试剂盒与英国Randox公司的 β -Agonist试剂盒对比试验结果 ,两组数据经极差t检验分析 ,|t| <t0 .975无显著差异。〔结论〕该试剂盒具有专一性、快速、灵敏、准确的特点。

抗-HCV酶免试剂用于血站血液筛查的效果评价

目的 对目前国内血站采用的抗 -HCV酶免试剂进行效果评价 ,为血站合理选用抗 -HCV筛查试剂提供参考依据。方法 对不同厂家抗 -HCV酶免试剂检测阳性标本分别用抗 -HCV确认实验及逆转录 -巢式 PCR( RT-n PCR)技术进行检测 ,并对结果进行比较分析。结果 不同厂家抗 -HCV酶免试剂对 HCV的 C区和 NS5区抗体检测结果的差异无显著性 ;但对 NS3和 NS4区抗体检测结果的差异有显著性。结论 血站应根据不同抗 -HCV试剂对

3种β-兴奋剂化学发光酶免疫试剂盒分析检测方法的评价

选取3种市售β-兴奋剂化学发光酶免疫分析检测试剂盒,从线性关系、灵敏度、选择性、检出限、准确度、重复性及变异性等方面进行实验,并经农业部1025号公告—18—2008中高效液相色谱—串联质谱法验证比较,初步建立了一套化学发光酶免疫分析检测试剂盒质量评价方法。结果表明：沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺3种试剂盒在测定范围内线性关系良好,灵敏度分别为0.7、1.8、1.0 ng/mL,检出限分别为0.2、0.1、0.2 ng/mL,猪肝、猪肉和牛肉的回收率在81.9%-115.2%之间,重复性变异系数为3.3%-9.7%,批间变异系数为9.9%-16.5%,交叉反应率均符合产品说明书要求,可以用于猪肝、猪肉、牛肉样品中沙丁胺醇、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的残留检测。

HBeAb光激化学发光免疫分析试剂盒的研制

目的研制光激化学发光免疫分析技术(AlphaLISA)建立人血清乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)的快速检测试剂盒。方法采用中和抑制法建立HBeAb AlphaLISA试剂盒。结果自制HBeAb试剂盒灵敏度为0.003NCU/ml,可测范围为0.003-16NCU/ml。批内与批间的精密度分别为5.3%和6.8%,与HBcAb无交叉反应。使用自制试剂与罗氏化学发光试剂盒同时检测136份临床血清样本,结果具有相关性(r=0.961)。结论自制HBeAb AlphaLISA试剂盒的各项性能指标能够达到临床检测要求,可用于临床血清样本HBeAb浓度的测定。

沙眼衣原体取样方法改良对提高其检出率的效果探讨

目的探讨沙眼衣原体取样的改良对提高其检出率的效果。方法同时对疑似沙眼衣原体感染的187例男性患者作沙眼衣原体检测,一组按试剂说明书上的方法取样本(普通组),另一组在原有取材基础上加上精液沉淀物作为样本(改良组)。两组分别采用沙眼衣原体快速检测抗原试剂盒(胶体金法)、酶联免疫吸附试验、快速免疫诊断法进行检测。结果普通组上述3种方法检测沙眼衣原体的阳性率分别为5.35%、3.74%和3.21%,改良组的阳性率分别为6.95%、4.28%和6.42%。两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论沙眼衣原体男性尿道拭子联合尿液沉淀物加精液沉淀物检出率高于普通取样方法。

溴氰菊酯残留检测ELISA试剂盒的研制

在前期建立溴氰菊酯间接竞争ELISA检测方法的基础上，研制组装出溴氰菊酯残留检测ELISA试剂盒，并以苹果为试样，对该试剂盒的灵敏度、精密度、准确度、特异性进行参数测定。本试剂盒的IC50为3．999-7．709μg／mL，检出限为0．011-0．024mg／kg，检测范围为0．015～100μg／mL，重现性较好，特异性强，以0．1，0．5，1．0mg／kg3个水平添加苹果，回收率为86．2％～105．8％，变异系数为6．0％～9．8％，接近气相色谱法的检测水平，可满足溴氰菊酯残留初筛检测需要。该试剂盒的成功研制为实际样品检测提供理论基础。

一种基于常规生化仪的低成本治疗药物监测新技术

目的：国内尚无市售自主研发的治疗药物监测（ therapeutic drug monitoring， TDM）酶放大免疫检测原理（ enzyme multiplied immunoassay technique， EMIT）试剂盒。比较基于EMIT的自主研发试剂盒与Viva-E试剂盒和基于FPIA的AXSYM检测试剂盒用于TDM相关性能，评价其用于TDM的可行性。方法通过进行卡马西平、丙戊酸和苯巴比妥方法学比较，评价Viva-E、AXSYM分析仪配套检测试剂盒和自主研发试剂盒的灵敏度、准确度及精密度。并对83例卡马西平、80例丙戊酸和72例苯巴比妥临床样本进行检测，比较自主研发试剂盒和AXSYM分析仪配套检测试剂盒测定结果相关性。结果3种试剂盒分别测定卡马西平、丙戊酸和苯巴比妥的回收率均高于90％。其中自主研发试剂盒3种药物的回收率在98．7％～103．9％，定量下限依次为2、10、5μg／mL，精密度均＜10％，标曲单点校正后结果偏差＜3％。其血清样本检测结果与AXSYM试剂盒检测结果相关性较好（R2＞0．985），差异无统计学意义（P＞0．05）。 Bland-Altman分析的95％ LOA依次为（－1．32，1．26）、（－15．24，15．17）和（－3．69，3．00），仅有5％的点落于95％置信区间外。结论自主研发试剂盒性能与现进口试剂盒基本一致，方法学结果符合生物样本检测要求，可用于临床生物样本检测。

血清RBP4酶联免疫试剂盒技术性能的评估

目的:对检测血清视黄醇结合蛋白4(RBP4)水平的酶联免疫试剂盒进行性能评估。方法:按照我国《酶联免疫分析试剂盒通则》对RBP4酶联免疫试剂盒的线性范围、灵敏度、精密度、正确度、稳定性进行评估,并对正常和肝纤维化患者各100例的血清RBP4浓度进行检测,Western blot进行验证。结果:构建的RBP4酶联免疫试剂盒拟合优度大于0.999;灵敏度的检测限为4.67 pg/mL,定量限为6.189 pg/mL;精密度检测的批内误差小于20%,批间误差小于25%;准确性介于84.05%~112.26%之间;试剂盒在8个月时间内,稳定性无差异(P>0.05);试剂盒检测肝纤维化患者血清RBP4水平显著低于正常组(P<0.05),且与Western bolt结果一致。结论:血清RBP4酶联免疫试剂盒各项指标均能达到我国《酶联免疫分析试剂盒通则》要求。

两种免疫酶试剂盒检测猪抗E型肝炎病毒IgG的比较

目的比较两种免疫酶试剂盒recomWell HEV IgG(swine)ELISA(recom Well )和recomLine HEV IgG(swine)(recom Line )检测猪抗E型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)IgG的准确性。方法分别采用基因3型和基因4型人HEV(human HEV,hHEV)人工感染无菌猪各2头,采用上述试剂盒检测猪感染后不同天数的血清样品中抗HEV IgG,同时对两头接种PBS液的无菌猪血清样品18份和4头未感染猪的18份血清进行了检测。结果 2头猪人工感染基因3型hHEV后,recomWell检测均于感染后21d出现阳性,并持续56d;recomLine检测,其中1头猪于感染后14d呈阳性,而另1头于感染后21d呈阳性,且均持续56d。2头猪人工感染基因4型hHEV后,两种试剂盒检测,其中1头猪于感染后21d呈阳性,另1头35d呈阳性,并均持续56d仍为阳性。18份对照血清两种试剂盒检测均为阴性。18份未人工感染猪血清中,只有1份两种试剂盒检测均为阳性。两种试剂盒同时检测的共72份样品中,recomWell检出阳性样品23份,阳性率约为32.0%(23/72),recomLine检出阳性样品24份,阳性率约为33.30%(24/72),检出阳性率两者差异不显著(P>0.05);在recomWell检出的23份阳性样品中,recomLine检测均为阳性,两者阳性检出符合率为100%(23/23);recomWell的漏检率约为4.1%(1/24)。结论 recomWellR和recomLine均可用于猪抗HEVIgG的检测,recomLine检测灵敏度略高于recomWell,且操作更简便,不需要特殊昂贵的检测设备,特别适合用于基层检测猪抗HEV IgG。

硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研制及性能评价

目的研制硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法),并对其试剂盒性能进行评价。方法利用竞争抑制法,对原料进行筛选,建立硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒。并分别对本试剂盒的准确性、最低检测限、线性、重复性、特异性、参考范围及样本对比方面进行评价。结果经过筛选,选用反应模式:磁微粒包被羊抗鼠Ig G-鼠抗硫酸去氢表雄酮单克隆抗体-吖啶酯标记DHEAS-BSA;对此方法建立的试剂盒进行方法学评价,最低检测限可达1.84μg/d L,线性在0~1 500μg/d L之间,相关系数r=0.999 8,准确度的回收率为105.38%,重复性均小于8%;建立了健康人参考范围(女性:47.9~407.5μg/d L,男性97.1~522.5μg/d L),与西门子ADVIA Centaur测定结果显著相关,线性方程为y=1.078 13+0.992 16x,相关系数r=0.994 7,2种试剂盒的测定结果具有较高的一致性。结论本研究建立的硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)各项性能均达到了临床检验的要求,为国产化66硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研发奠定了基础,有望用于临床血清硫酸去氢表雄酮的检测。

促黄体生成素定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的临床性能评价

目的对广州市达瑞生物技术股份有限公司的促黄体生成素定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)进行临床应用研究及临床性能评价。方法采用平行、盲法、对照试验设计,用达瑞生物公司试剂盒检测335例样本,以雅培公司的促黄体生成素测定试剂盒(化学发光微粒子免疫检测法)作为对照试剂盒,罗氏公司的促黄体生成素检测试剂盒(电化学发光法)作为复核试剂盒。操作按各试剂盒说明书进行,对达瑞生物公司试剂盒的符合率和相关性进行计算分析。结果同雅培公司试剂盒比较,达瑞生物公司试剂盒检测血清样品异常符合率为95.8%,正常符合率为95.2%,总符合率为95.4%,Kappa值为0.898(P<0.01)。线性回归方程为Y=0.358+0.961X,两者测定值接近,相关系数为0.988(P<0.01),相关性良好。同血清检测结果相比,血浆检测结果 Kappa值为1.000(P<0.01),线性回归方程为Y=0.120+0.966X,相关系数r值为0.999(P<0.01),相关性良好。特异性样本检测结果均为正常。结论本试剂盒检测性能可以满足临床应用的需要。

总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准的验证

目的对总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准可行性进行验证。方法按照拟定行业标准的要求,选择不同免疫分析方法的试剂盒,进行验证。结果外观、空白限、线性、准确度、精密度、稳定性等指标符合要求,特异性项目中有个别试剂盒对IgM、IgG的测定结果高于行业标准要求。结论总IgE定量标记免疫分析试剂盒行业标准制定合理,有助于规范此类试剂盒的技术要求和实验方法,从而提高此类试剂盒的产品质量,并为其监管提供依据。

促甲状腺素定量标记免疫分析试剂盒行业标准的建立和验证

目的建立促甲状腺素(TSH)定量标记免疫分析试剂盒的行业标准,并进行试验验证。方法选择酶标记、化学发光标记、时间分辨荧光标记三种不同标记方法的TSH定量标记免疫分析试剂盒,按照拟定行业标准规定,对外观和物理检查、最低检出量、准确性、线性、精密度、质控品测定值、特异性和稳定性进行验证。结果除酶标记试剂盒的线性范围不满足要求外,大部分试剂盒均能满足拟定行标中的所有要求。结论 TSH定量标记免疫分析试剂盒行业标准制定合理,可操作性强。该标准的制定有助于统一TSH定量标记免疫分析试剂盒的质量标准,为此类产品的研制、生产、检验及临床应用等领域的监管提供依据。

恩诺沙星化学发光免疫分析试剂盒的研制

主要研制一种基于鲁米诺-辣根过氧化物酶体系的化学发光免疫分析试剂盒,用于检测食品中的痕量恩诺沙星残留。反应条件优化结果为:最佳包被抗原浓度为0.5ng/mL,最佳抗体稀释倍数为1:2000,药物稀释液为0.01mol/L的PBST溶液,一抗反应时间为30min。研究结果显示:本文研制的试剂盒的回归曲线方程是y=-22842x+172936,检测线性范围是0.024～2.76ng/mL,IC50为0.106ng/mL,对蜂蜜、牛奶、鱼肉和虾肉样本的添加回收率在96%～116%、90%～97%、92%～112%、86%～112%之间,批内和批间变异系数均小于15%,试剂盒在4℃下有效期为180d。

囊虫IgG胶体金诊断试剂盒(层析法)的研制和考核

目的 在国内外率先开发成功用于囊虫病诊断的IgG金标层析法 (一步法 )诊断试剂盒。方法 采用独特制备猪囊尾蚴囊液抗原的方法 ;先进制备胶金试剂盒工艺并以比利时提供的囊虫IgG试剂盒 (ELISA)做参照。 结果 产品经中国药品生物制品检定所检定合格。对试剂盒的特异性、敏感性进行了临床考核。其敏感性为 93 .2 3 % ,特异性为 97.3 7% ,该试剂盒检测包虫血清的交叉反应率为 4 5 .0 0 % ,与血吸虫、肝吸虫、肺吸虫等寄生虫病人血清无交叉反应。结论 该试剂盒敏感性、特异性良好 ,操作简单、快速 ,结果判读容易 ,特别适用于基层和现场应用。

25-羟基维生素D化学发光检测试剂盒的研发

研制了用于定量检测人血清中25-羟基维生素D(25-OHD)水平的化学发光法检测试剂盒,并对试剂盒各项性能指标进行验证。试剂盒建立的方法为:将25-OHD单克隆抗体包被于微孔板中,将血清样品与释放剂同时加入微孔板中进行孵育,使样品的25-OHD充分释放出来并与包被板上的25-OHD抗体相结合。再加入酶结合物(生物素化25-OHD和链霉亲和素化过氧化物酶(SA-HRP)的混合物),使之与25-OHD抗体相结合,形成竞争免疫复合物,随后洗涤除去未结合的物质,加入化学发光底物,使用化学发光免疫分析仪读取相对发光强度(RLU)。制备的25-OHD检测试剂盒最低检出限为4.9 ng/m L,准确度相对偏差在±10%以内,批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,2℃~8℃存放有效期为1年。对200份临床血清样本进行检测,与参比试剂盒检测结果的相关系数R=0.9717。试剂盒各项性能指标均符合行业标准要求,具有灵敏,稳定,快速,简便等特点。