恩格列净通过上调Epac1表达抑制炎症反应减轻2型糖尿病大鼠肾损伤

目的 观察恩格列净(EM)对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾损伤的治疗效果,并探讨其可能存在的机制。方法 将SD雄性大鼠随机分为正常对照(NC)组、 T2DM组和EM组,每组6只。T2DM组和EM组,给予腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立T2DM模型,记录各组大鼠空腹血糖(FBG)和体质量。EM组给予EM溶液灌胃,其余两组予以等量的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,给药12周。记录大鼠体质量和FBG后处死大鼠,留存腹主动脉血液和肾脏组织。全自动生化分析仪检测血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC);行Masson染色、过碘酸希夫(PAS)染色、 HE染色观察肾脏组织学变化,透射电镜观察肾脏超微结构变化;免疫组织化学染色法检测大鼠肾脏组织中环磷酸腺苷直接激活的交换蛋白1(Epac1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)的表达和分布。结果 与NC组相比,T2DM组大鼠体质量下降,FBG、 Scr、 BUN、 UA、 TC、 TG水平明显升高;肾小球基底膜增厚,足细胞足突融合,排列紊乱,内皮细胞窗孔消失;Epac1蛋白表达水平下降,TNF-α、 IL-1β、 IL-18的蛋白表达水平明显增高。与T2DM组相比,EM组大鼠体质量上升,FBG、 Scr、 BUN、 UA、 TC、 TG水平降低;肾损伤减轻,Epac1蛋白表达水平升高,TNF-α、 IL-1β、 IL-18的表达显著降低。结论 EM能够改善T2DM肾损伤。这种治疗效果是通过上调Epac1蛋白表达,抑制炎症反应介导的。

腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响

目的 探讨沉默腺苷A3受体对浅筋膜成纤维细胞cAMP/Epac信号通路及炎症因子表达的影响。方法 选取SD大鼠浅筋膜组织,通过组织块培养法提取成纤维细胞,细胞免疫荧光实验检测Vimentin、CD45、FⅧ、AKA表达,腺苷预处理细胞并分为Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10μmol/L组和100μmol/L组,均培养48 h。腺苷siRNA干扰实验将细胞分为对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组。对照组不予任何处理,腺苷组用10μmol/L腺苷培养48 h,其余两组用2μL Lipofectamine 2000转染A3R siRNA,在培养箱孵育6 h后换上维持液继续培养48 h。Western blotting检测细胞腺苷A3受体蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链反应检测cAMP、Epac mRNA表达,Western blotting检测cAMP、Epac蛋白表达,酶联免疫吸附试验检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫荧光检测细胞间黏附分子-1表达。结果 Control组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、10μmol/L组和100μmol/L组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P <0.05),腺苷预处理可剂量依赖性地上调A3R蛋白表达。对照组、腺苷组、A3R干扰组、空载组A3R蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义(P <0.05),腺苷siRNA干扰可下调A3R蛋白表达,而空载组并无明显影响。A3R干扰组cAMP、Epac m RNA相对表达量高于对照组(P <0.05)。A3R干扰组cAMP、Epac蛋白相对表达量高于对照组(P <0.05)。A3R干扰组IL-6、TNF-α相对表达量高于对照组(P <0.05)。结论 在浅筋膜成纤维细胞中,腺苷A3受体通过下调cAMP/Epac信号通路减少炎症因子的表达。

Epac1对垂体腺瘤细胞增殖和细胞周期的影响及分子机制研究

目的探索垂体生长激素腺瘤细胞增殖的分子机制。方法收集12例肢端肥大症患者的功能性生长激素垂体腺瘤(fGH-PA)组织样本。qPCR法测定fGH-PA组织和大鼠RGC-5、MMQ、GH3细胞中cAMP直接激活的交换蛋白1(Epac1)mRNA表达水平。免疫组织化学测定fGH-PA组织中Epac1蛋白表达情况。Western blot测定MMQ、GH3细胞中Epac1蛋白表达情况。在GH3细胞中过表达或敲低Epac1,或敲低cAMP反应元件结合蛋白(CREB),流式细胞术测定细胞周期变化;CCK-8法测定细胞增殖能力;Western blot测定细胞内p-CREB、CREB、Cyclin D1、CDK2、p21的表达情况。结果qPCR和免疫组织化学结果显示,与旁侧正常组织相比,fGH-PA组织中Epac1 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。qPCR和Western blot结果显示,与RGC-5细胞相比,MMQ和GH3细胞中Epac1 mRNA和蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。在GH3细胞中过表达Epac1后,与Control组相比,Epac1-OE组G0/G1期和S期细胞占比明显减少(P<0.05),G2/M期细胞占比明显增多(P<0.05);细胞增殖能力明显增强(P<0.05);细胞内p-CREB和Cyclin D1的表达水平明显升高(P<0.05),CDK2和p21的表达水平明显降低(P<0.05),而CREB的表达水平无明显变化(P>0.05)。在GH3细胞中敲低Epac1或敲低CREB后,上述所有结果均发生逆转(P>0.05)。结论垂体生长激素腺瘤细胞中Epac1过表达能够上调细胞内p-CREB的水平,并促进腺瘤细胞通过G1/S期检查点,发生细胞周期检查点失调和大量增殖,但不影响CREB的表达水平。

Epac在生长激素分泌性垂体腺瘤细胞中过表达并促进其对奥曲肽耐药的分子机制研究

目的探索生长激素分泌性垂体腺瘤(GHPAs)对奥曲肽耐药的分子机制。方法收集临床GHPAs患者肿瘤及旁侧正常组织标本各10例。采用qPCR法、Western blot法和免疫组织化学(IHC)法检测上述各10例标本中cAMP直接激活的交换蛋白(Epac)的表达情况。在大鼠垂体腺瘤GH3细胞中过表达Epac。CCK-8法测定过表达Epac前后及给予奥曲肽处理前后细胞增殖能力的变化;ELISA测定细胞分泌生长激素(GH)情况的变化;qPCR法和Western blot法测定细胞中SSTR2和ZAC1表达水平的变化。慢病毒转染GH3细胞过表达Epac并进行BALB/c裸鼠荷瘤实验,测定过表达Epac前后及给予奥曲肽治疗前后,裸鼠荷瘤增殖能力的变化;Western blot测定促肿瘤增殖关键通路蛋白Ras-1和ERK1/2的表达情况变化。结果针对临床标本的研究,相较于旁侧正常组织,GHPAs组织中Epac mRNA和蛋白质表达水平均明显升高(P<0.05)。体外(in vitro)细胞水平实验,与pcDNA3.1组GH3细胞相比,pcDNA3.1+octreotide组GH3细胞增殖能力明显降低,GH分泌量明显下调,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平明显升高(P<0.05);而pcDNA3.1-Epac组GH3细胞增殖能力明显升高,GH分泌量明显增加,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平被明显抑制(P<0.05)。与pcDNA3.1-Epac组相比,pcDNA3.1-Epac+octreotide组GH3细胞增殖能力,GH分泌量,胞内SSTR2和ZAC1 mRNA和蛋白质表达水平均无明显差异(P>0.05)。在体(in vivo)裸鼠荷瘤实验,与pSLenti组相比,pSLenti+octreotide组裸鼠荷瘤体积和质量明显较小,Ras-1和ERK1/2的表达被明显抑制;pSLenti-Epac组的荷瘤体积和质量明显较大,上述两种蛋白质的表达明显升高(P<0.05)。与pSLenti-Epac组相比,pSLenti-Epac+octreotide组裸鼠荷瘤体积和质量,以及Ras-1和ERK1/2的表达没有明显变化(P>0.05)。结论临床部分GHPAs患者出现对奥曲肽的耐药性,其可能的分子机制为肿瘤细胞通过上调Epac,以抑制SSTR2和ZAC1的表达,并增强Ras-1和ERK1/2的表达,实现其高速增殖和对奥曲肽的耐药性。

人参皂苷Rg1调控Epac1/Rap1信号通路对缺血性脑卒中大鼠神经保护作用机制研究

目的:研究人参皂苷Rg1对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用并探究其作用机制。方法:将84只13周龄左右的SPF级SD雄性大鼠随机分为7组(n=12):假手术组、模型组、Rg1低剂量组、Rg1中剂量组、Rg1高剂量组、Epac1激动剂组、Epac1抑制剂组。模型组、Rg1低、中、高剂量组、Epac1激动剂组、Epac1抑制剂组均采用线栓法建立永久性局灶脑缺血大鼠模型。Rg1低中高剂量组大鼠每天上午固定时间进行灌胃给药,Rg1低剂量组、Rg1中剂量组和Rg1高剂量组分别使用60、120、240μmol/L Rg1处理;Epac1激动剂组和Epac1抑制剂组大鼠每天上午固定时间进行腹腔注射给药,Epac1激动剂8-CPT使用浓度为1.0×10^(4)μmol/L,抑制剂ESI-09使用浓度为1.0×10^(5)μmol/L。连续给药两周后,将各组大鼠施以断头处死。分别采用TTC染色、尼氏染色、TUNEL染色、微量酶标法、Western blot法检测各组大鼠脑梗死体积、完整神经元数目、氧化损伤指标、细胞凋亡情况,以及NOX2、Epac1、Rap1、caspase3的蛋白表达水平。结果:与假手术组相比,模型组大鼠脑梗死体积明显增大,脑组织中完整的神经元数量明显减少,脑组织中神经元氧化损伤明显加重,神经细胞凋亡率明显升高,NOX2、Epac1、Rap1、Caspase3蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,Rg1低、中、高剂量组和Epac1抑制剂组大鼠脑梗死体积明显减少,脑组织中完整的神经元数量明显增多,神经细胞凋亡率明显降低,NOX2、Epac1、Rap1、Caspase3蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1可以调控缺血性脑卒中后的Epac1/Rap1信号通路,减轻脑神经元的氧化应激,从而减轻神经功能损害,发挥对神经细胞的保护作用。

右美托咪定预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及其机制

目的观察右美托咪定(Dex)预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响,并探讨其机制是否与氧化应激及Epac1/Rap1信号通路有关。方法SD大鼠随机分为假手术组、模型组、Dex组、抑制剂组各8只。Dex组在建模前30 min腹腔注射Dex,抑制剂组在建模前30 min及25 min时分别腹腔注射Epac1拮抗剂ESI09及Dex,假手术组、模型组在建模前30 min腹腔注射相同剂量的生理盐水。除假手术组外,各组均通过结扎左冠状动脉建立MIRI模型,假手术组心脏仅穿线而不结扎左冠状动脉。采用苏木精—伊红(HE)染色观察各组心肌组织病理学变化,ELISA法检测大鼠血清心肌损伤标志物肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD),Western blotting法检测大鼠心肌组织Epac1/Rap1信号通路相关蛋白Epac1、Rap1。结果假手术组心肌纤维排列整齐、边缘清晰,未见心肌纤维断裂和细胞间质肿胀;模型组心肌纤维出现断裂,排列紊乱、边界模糊,有明显中性粒细胞浸润,细胞间质肿胀明显;Dex组与抑制剂组心肌纤维断裂、中性粒细胞浸润减少、间质肿胀均减轻。血清CK-MB、LDH模型组>Dex组>抑制剂组>假手术组;血清MDA模型组>Dex组>抑制剂组>假手术组,血清SOD假手术组>抑制剂组>Dex组>模型组;心肌组织Epac1、Rap1蛋白表达模型组>Dex组>抑制剂组>假手术组(P均<0.05)。结论Dex预处理对大鼠MIRI具有抑制作用,其机制可能与激活Epac1/Rap1信号通路减轻心肌组织氧化应激有关。

cAMP/Epac/Rap1信号通路调控NG2细胞分泌IL-1β、TNF-α、BDNF及酸枣仁皂苷A的作用研究

目的研究环磷酸腺苷(cAMP)/环磷酸腺苷结合蛋白(Epac)/Ras相关蛋白1(Rap1)信号通路是否参与调控NG2细胞分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脑源性神经营养因子(BDNF)及酸枣仁皂苷A(JuA)的作用。方法体外培养NG2细胞,分为对照组、百日咳毒素(PTX)组、非环状核苷酸Epac拮抗剂(ESI-09)组、酸枣仁皂苷A(JuA)组、艾司唑仑(阳性药)组。采用CCK-8法检测不同浓度JuA对NG2细胞存活率的影响,RT-PCR法和Western blot法检测各组细胞IL-1β、TNF-α、BDNF、cAMP、Epac、Rap1 mRNA及蛋白的表达情况。结果与对照组比较,PTX组降低IL-1β和TNF-αmRNA和蛋白的表达(P<0.01),增加BDNF和cAMP mRNA和蛋白的表达(P<0.01);ESI-09组增加IL-1β和TNF-αmRNA和蛋白的表达(P<0.05),降低BDNF、Epac和Rap1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);JuA组、阳性药组均增加IL-1β、TNF-α、BDNF、cAMP、Epac、Rap1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05)。结论cAMP/Epac/Rap1信号通路可介导NG2细胞分泌IL-1β、TNF-α、BDNF,JuA可能作用于cAMP/Epac/Rap1信号通路影响NG2细胞分泌BDNF。

牡荆素调控Epac1/CaMKⅡ通路减轻小鼠急性心肌缺血再灌注损伤的作用机制

目的研究小鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中Epac1/CaMKⅡ信号通路的作用,并探明牡荆素(VT)对急性MIRI的保护作用。方法取C57/BL小鼠随机分为5组,每组8只,分别为假手术组(Sham组),缺血再灌注组(I/R组),缺血再灌注+VT组(VT设置3、6、12 mg/kg 3个剂量组)。小鼠左冠状动脉前降支(LAD)结扎,使部分心脏组织缺血30 min,血液再灌注120 min,构建小鼠MIRI模型。Sham组小鼠只手术不结扎LAD。检测小鼠血清中乳酸脱氢酶(LDH)水平;取小鼠左室心肌组织进行HE染色观察心肌病理组织学变化;免疫组织化学观察心肌组织中Epac1的表达水平;Western blot法测定Epac1、Rap1、CaMKⅡ、ERK/p-ERK蛋白表达的变化。结果与Sham组比较,I/R组小鼠血清中LDH百分比水平显著升高,心肌组织中Epac1、Rap1、CaMKⅡ蛋白表达显著上调,ERK1/2磷酸化水平降低。与I/R组比较,VT(3、6、12 mg/kg)预处理组可显著降低小鼠血清中LDH水平,抑制小鼠心肌组织中Epac1、Rap1与CaMKⅡ蛋白表达,促进ERK1/2磷酸化。病理组织学结果显示,I/R组小鼠心肌纤维排列紊乱、断裂,间隙增加,炎性细胞浸润明显;VT(3、6、12 mg/kg)预处理组小鼠心肌纤维排列较整齐,炎性细胞浸润较少。结论VT可能通过调节Epac1/CaMKⅡ信号通路,下调CaMKⅡ蛋白表达,促进ERK磷酸化,有效减轻MIRI。

cAMP衍生物特异性激活Epac2/Akt信号通路促进大鼠脊髓损伤的修复

目的研究应用cAMP衍生物特异性激活Epac2/Akt信号通路在哺乳动物脊髓损伤中的病理和生理机制。方法 96只成年健康雌性SD大鼠,完全随机分为4组(n=24),A、B、C组均采用改良Allen重物打击法制备大鼠脊髓损伤模型。A组给予8-CPT-2'-O-Me-cAMP 0.5 mg/(kg·d)、B组给予等量10%(体积分数)DMSO、C组给予8-CPT-2'-O-Me-cAMP 0.5 mg/(kg·d)加LY294002 0.2 mg/(kg·d)各7 d。D组为正常对照组。各组分别于1、2、3、4周采用BBB评分法评估大鼠后肢功能恢复情况,各时间点取材行HE染色、免疫荧光、实时荧光定量PCR检测脊髓细胞标志物(Nestin、NF200、GFAP)和通路因子(Epac2、Akt)的表达。结果 A组大鼠在术后1～4周BBB评分持续升高,均高于B、C组(P<0.01),低于D组(P<0.01)。在1、2、3周,A组Epac2 mRNA表达与C组Epac2 mRNA表达差异无意义,但高于B组(P<0.01)和D组(P<0.01)。A组Akt mRNA表达高于B、C、D组(P<0.01)。A组Nestin、NF200 mRNA表达在各期均高于B、C、D组(P<0.01)。A、B、C组GFAP mRNA表达差异无统计学意义。HE染色可见A、B、C组造模后脊髓组织结构疏松,有大量空洞形成。免疫荧光染色并进行积分光密度值分析,其结果与实时荧光定量PCR检测结果相符。结论在哺乳动物脊髓损伤后应用cAMP衍生物能够特异性激活Epac2/Akt通路,促使神经干细胞分化和神经细胞增殖,有助于脊髓修复。

EPAC电可编程模拟电路模块IMP50E10

本文介绍了美国ＩＭＰ公司ＥＰＡＣ（ＥｌｅｃｔｒｉｃａｌｙＰｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅＡｎａｌｏｇＣｉｒｃｕｉｔ）电可编程模拟电路系列产品之一的ＩＭＰ５０Ｅ１０电路模块的结构、特点、主要功能及主要应用。它可简化模拟电路的设计，使功能设计在框图阶段完成成为可能。

人甲状腺乳头状癌中前列腺素E2受体及其下游信号分子的表达及意义

目的探讨前列腺素E2受体(EP1,EP2,EP3和EP4)在人甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达情况,并进一步了解EP4下游主要信号分子在人PTC中的表达情况。方法 RT-q PCR法检测15例PTC患者甲状腺癌组织PTC及癌旁正常组织(ANT),和15例结节性甲状腺肿(NG)患者甲状腺组织中的EP1、EP2、EP3和EP4的mRNA表达水平,免疫组化的方法分析EP4及其下游信号分子PKA、Epac和AMPK的蛋白表达水平。结果与ANT及NG组相比,PTC组EP4的mRNA及蛋白水平明显升高(P<0.05),其下游因子PKA、Epac和AMPK的蛋白表达水平也明显升高(P<0.05)。结论 EP4及其下游因子PKA、Epac和AMPK在PTC组织中表达增加,可能参与了PTC的发生及发展。

EPAC器件技术概述及应用

文中介绍了EPAC(电子可编程模拟电路)器件的技术特点、开发过程,并结合应用EPAC器件的实例,阐述了EPAC器件在电子测量领域广阔的应用前景。

RAP1A和EPAC1在卵巢子宫内膜异位症组织中的表达及意义

目的检测RAS相关蛋白1(RAP1)的异构体RAP1A和环磷酸腺苷交换蛋白1(EPAC1)在卵巢子宫内膜异位症的表达和分布,探讨两者在疾病发生、发展中的作用及意义。方法收集2019年6月—2020年1月在中南大学湘雅医院妇科行腹腔镜下卵巢子宫内膜异位症手术患者的临床资料及组织,采用免疫组织化学法检测RAP1A和EPAC1在异位内膜、在位内膜、正常内膜的表达和分布情况,采用Western blotting法检测蛋白的表达,分析RAP1A和EPAC1表达的相关性。结果RAP1A表达于腺上皮细胞及间质细胞的细胞质,在在位内膜腺上皮细胞呈强阳性表达;EPAC1表达于腺上皮细胞的细胞质,在间质细胞的细胞质和细胞核都有表达,在腺上皮细胞的细胞质呈强阳性表达。2种蛋白在异位内膜、在位内膜及正常内膜的表达比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中异位内膜、在位内膜的表达均高于正常内膜(P<0.05),异位内膜与在位内膜的表达差异无统计学意义(P>0.05)。Pearson相关性分析显示,RAP1A和EPAC1的表达水平在异位内膜(r=0.635,P<0.05)、在位内膜(r=0.697,P<0.05)和正常子宫内膜(r=0.436,P<0.05)均呈正相关。结论RAP1A和EPAC1在卵巢子宫内膜异位症中呈高表达,两者可能相互协同,促进异位病灶的发生、发展。

电可编程模拟电路的原理与应用

以IMP50E10为例,介绍电可编程模拟电路(EPAC)器件的原理、特点、性能和开发方法,并给出其在动态应变测试仪中的应用实例。

Epac信号分子在纤维化疾病中作用的研究进展

由cAMP激活的交换蛋白分子(exchange protein activated by c AMP,Epac)是近年来新发现的鸟嘌呤核苷酸交换因子,参与一系列cAMP介导的信号通路。纤维化疾病是临床上常见的一类疾病,是在正常生理学(如衰老)或不同致病因素持续刺激下,使得细胞外基质过度沉积的结果。有研究表明,Epac在纤维化疾病中发挥重要作用,因此,该文对Epac在纤维化疾病中的作用进行综述,以促进对于Epac相关机制及药物的研究与开发。

Epac在肾小管生理中的作用

c AMP激活的交换蛋白(exchange protein directly activated by c AMP,Epac)是Ras类小GTP酶Rap1和Rap2的鸟苷酸转换因子,于1998年作为第二信使c AMP的一个新的感应器被发现。应用Epac激动剂的分子及细胞水平的研究分析了Epac蛋白质在肾脏生理中所起的作用及规律,Epac蛋白质的特异性功能取决于它们在肾脏的表达定位以及在细胞微环境中的数量。本篇综述根据最近的文献报道,着重描述了Epac在肾小管的表达、定位以及在离子转运中的生理功能。

cAMP促进成年哺乳动物中枢神经系统再生分子机制的研究进展

近年来神经科学工作者对cAMP促进成年哺乳动物中枢神经系统(CNS)神经再生的分子机制进行了大量的研究,结果表明cAMP通过激活其下游分子PKA、Epac、提高IL-6的水平、磷酸化RhoA以及与Ca2+通路相互作用等机制促进CNS再生。本文对cAMP促进CNS再生机制的研究进展进行综述,并探究有效提高神经元内cAMP水平的策略。

下丘脑室旁核Epac蛋白在大鼠炎性痛调节过程中的作用及其机制研究

目的探讨下丘脑室旁核Epac在大鼠炎症性疼痛发展过程中的作用及其机制。方法健康成年♂SD大鼠,通过左侧后肢足底中心皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)建立炎症性疼痛模型,Western blot检测Epac蛋白的表达变化;室旁核给予Epac激动剂8p-CPT(8p-CPT-2'-O-Me-cAMP)后,测定大鼠热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),观察痛行为变化,并在药效发挥最大作用时,取出大鼠下丘脑室旁核,用Western blot检测Epac下游p-MEK1/2蛋白表达情况。结果与生理盐水对照组相比,CFA组大鼠炎症侧后足d 1、3、5、7、9、11的TWL明显降低(P<0.01),d 13的TWL基本恢复至正常水平;d6、8、10、12、14的机械缩足反射阈值(paw mechanical withdraw threshold,PMWT)明显降低(P<0.05)。与生理盐水对照组相比,CFA组大鼠室旁核Epac1蛋白表达在d 3开始明显降低,且在d 3和d 9均有统计学意义(P<0.05),而Epac2蛋白表达则没有明显变化,p-MEK1/2蛋白表达在d 3开始降低(P<0.05)。与室旁核微量注射生理盐水组相比,8pCPT组大鼠于给药后20 min和1 h热痛敏均明显减轻,TWL明显升高(P<0.05);室旁核p-MEK1/2蛋白在给药后30min表达明显升高(P<0.05),2 h后恢复至给药前水平。结论下丘脑室旁核Epac1-MEK1/2信号通路可能参与了CFA所致的慢性炎症性疼痛的发展过程。

鲸类二次水生生境适应Epac1和Epac2基因的分子进化

心率即心脏跳动的速度,不仅反映心脏的功能,还与寿命的长短及能量代谢有关。与大多数陆生哺乳动物相比,鲸类心率显著降低。降低的心率有助于鲸类寿命的延长及能量的高效利用,便于其适应极端的海洋环境,而这一适应的分子机制尚不清楚。鉴于此,本研究采用基于最大似然法的枝模型、枝位点模型结合蛋白质功能差异分析等方法,对控制心率的环腺苷酸结合蛋白(Epac1和Epac2)基因进行适应性探究。分析结果表明,Epac1在长寿鲸类即须鲸类和抹香鲸(Physeter macrocephalus)组合进化支中检测到加速进化过程,且枝位点模型在须鲸类祖先支中检测到的强烈的正选择位点均位于功能重要的催化区;另外,该蛋白质在鲸类中还发生了显著的功能修饰(θ=0. 529 6±0. 130 0; P <0. 001)。对Epac2进行相同的分析发现,该基因在寿命长达200年之久的弓头鲸(Balaena mysticetus)中检测到的正选择位点同样位于功能重要的催化区。上述结果提示Epac1和Epac2在鲸类中均产生了适应性进化,这一方面可能有助于鲸类心率降低,另一方面也可能与其较长的寿命及高效的能量利用有关。

cAMP/Epac信号通路在当归治疗阴虚证慢性咳嗽中的作用

目的:研究当归对阴虚证慢性咳嗽小鼠的治疗作用,以及对环磷酸腺苷(cAMP)/cAMP直接激活的交换蛋白分子(Epac)信号通路的影响。方法:将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组及当归组(n=8),采用烟熏(每日1次,30 d)、内毒素滴鼻(0.4 mg/ml,每次10μl,持续10次)、灌胃甲状腺(120 mg/kg,每日1次,持续15 d)并吸入氨水(每次3 min,持续10次)来复制阴虚证高反应性气道慢性感染咳嗽小鼠模型。在观察进食饮水、体重及自主活动的基础上,检测当归止咳对支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞因子、脑组织5-HT、肺组织相关活性因子(SP、PGP9.5、cAMP、Epac1)的影响。结果:与模型对照组比较,当归组小鼠咳嗽次数明显减少,小支气管病理学变化明显缓解,BALF中IL-4、IL-13、TNF-α的含量明显降低,肺组织SP、PGP9.5以及cAMP、Epac1及其基因表达水平明显下调,脑组织5-HT的含量明显提高,同时可缓解饮水及进食量增加、自主活动增加等阴虚证表征指标(P<0.05,P<0.01)。结论:当归具有一定的止咳作用,下调cAMP/Epac信号通路而缓解气道神经源性炎症、抑制咳嗽神经通路增敏是其作用机制之一。