补肾壮骨方通过EphB4/Ephrin-B2轴缓解绝经后骨质疏松

目的:探讨补肾壮骨方是否通过EphB4/Ephrin-B2轴缓解绝经后骨质疏松。方法:采用临床疗效确切的补肾壮骨方灌服绝经后骨质疏松小鼠模型,取BALB/c小鼠50只,随机分为正常对照组、假手术对照组、去势手术组、补肾壮骨方组、雌激素组。正常对照组、假手术对照组与去势手术组灌服生理盐水,补肾壮骨方组、雌激素组分别灌服等体积补肾壮骨方、雌激素,灌胃12周后处死小鼠,取血和骨进行检测。ELISA检测E2、FSH、LH性激素水平及骨生化指标;Western blot检测EphB4、Ephrin-B2蛋白表达水平;Micro-CT成像检测骨密度和骨小梁参数。结果:去势手术组小鼠体重高于其他4组(P<0.05);在性激素方面,去势手术组FSH、LH水平明显高于其他4组,E2水平低于其他4组(P<0.05)。在骨生化指标方面,去势手术组ALP明显高于其他4组,Ca、P含量明显低于其他4组(P<0.05)。在骨密度及骨结构参数方面,去势手术组BMD、BV/TV、Tb.Th显著低于其他4组(P<0.05),补肾壮骨方组与雌激素组中BMD、BV/TV低于正常对照组与假手术组(P<0.05)。Western blot检测提示去势手术组EphB4蛋白表达的显著低于其他4组(P<0.05),补肾壮骨方组与雌激素组低于正常对照组与假手术对照组(P<0.05);Ephrin-B2蛋白表达在去势手术组显著高于其他4组(P<0.05),补肾壮骨方组与雌激素组高于正常对照组与假手术对照组(P<0.05)。结论:补肾壮骨方通过调节EphB4/Ephrin-B2信号轴缓解绝经后骨质疏松,为临床应用补肾壮骨方提供可靠证据。

EphrinB2/EphB4-Fc蛋白片段腹腔注射对去卵巢小鼠骨质疏松的防治作用

目的探讨腹腔注射促红细胞生成素肝细胞激酶受体配体B2(EphrinB2)/促红细胞生成素肝细胞激酶受体B4(EphB4)蛋白片段对去卵巢小鼠骨质疏松的防治效果。方法取7周龄健康雌性C57BL/6小鼠39只,随机分为假手术组、模型组、干预组,每组各13只。模型组、干预组通过摘除小鼠卵巢组织建立绝经模型,假手术组仅切除卵巢组织周围脂肪组织。造模术后1周,干预组给予腹腔注射EphrinB2-Fc蛋白片段以及EphB4-Fc蛋白片段0.1 mg/(kg·d),假手术组和模型组注射等量生理盐水,继续喂养16周。小鼠脱颈处死,取出股骨,采用力学测试机测试三点弯曲力学性能,获得弹性模量、最大载荷;取腰椎、股骨和颅骨,采用双能X线骨密度检测仪检测骨密度和骨小梁厚度;取第5腰椎和远端股骨,采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色法检测破骨细胞数量;采集小鼠腹主静脉血,酶联免疫吸附法检测血清碱性磷酸酶(ALP)、脱氧吡啶啉(DPD)。取小鼠股骨和胫骨,收集骨髓腔冲洗液中的细胞,采用RT-PCR法检测EphrinB2、EphB4 mRNA,Western blotting法检测EphrinB2、EphB4蛋白。结果与假手术组相比,模型组骨弹性模量、最大载荷降低;与模型组相比,干预组骨弹性模量、最大载荷升高(P均<0.05)。与假手术组相比,模型组骨密度、骨小梁厚度降低;与模型组相比,干预组骨密度、骨小梁厚度升高(P均<0.05)。模型组破骨细胞数量多于假手术组和干预组(P均<0.05)。与假手术组相比,模型组血清ALP、DPD水平降低;与模型组相比,干预组血清ALP、DPD水平升高(P均<0.05)。与假手术组相比,模型组骨组织EphrinB2、EphB4 mRNA和蛋白表达水平下降;与模型组相比,干预组骨组织EphrinB2、EphB4 mRNA和蛋白表达水平升高(P均<0.05)。结论过表达EphrinB2/EphB4信号通路蛋白能够改善去卵巢小鼠的骨力学性能,减少破骨细胞数量,提升骨代谢指标,从而防治绝经后骨质疏松。

EPHB4与复发性流产绒毛血管生成相关性研究

目的探讨复发性流产(RSA)患者绒毛组织中EPHB4下调与绒毛血管生成障碍的关系。方法收集19例RSA患者(RSA组)和14例早孕要求终止妊娠患者(NC组)的绒毛组织样本,通过RT-qPCR和Westernblotting检测EPHB4的表达,通过免疫组化染色标记CD31计算绒毛微血管密度,并分析两者间的相关性。结果RSA组患者的组织中EPHB4的表达、微血管密度低于NC组(P<0.05)。EPHB4mRNA与绒毛微血管密度成中度正相关(r=0.4961,P=0.0362)。结论EPHB4在RSA患者中表达下调,可能通过抑制绒毛血管生成参与RSA的发生发展。

基于EphB2/Ephrin-B1/JNK通路探讨复方苦参汤调控溃疡性结肠炎的内在机制研究

目的:研究复方苦参汤对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用及其机制。方法:选取健康雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、模型组、美沙拉嗪阳性对照组及复方苦参汤低、中、高剂量组,每组10只,除正常对照组外其余各组均采用三硝基苯磺酸+乙醇制备溃疡性结肠炎大鼠模型,于造模成功后给予相应药物进行治疗,观察大鼠的一般情况及疾病活动指数(DAI),检测血清TNF-α、IL-6、IL-4、IL-1β含量,取结肠组织观察其组织病理学变化,检测结肠组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)、一氧化氮合酶(iNOS)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,RT-PCR检测大鼠结肠组织EphB2、Ephrin-B1、JNK mRNA表达,Western blot检测大鼠结肠组织EphB2、Ephrin-B1、JNK蛋白表达。结果:与模型组比较,美沙拉嗪组及复方苦参汤中、高剂量组大鼠饮食、毛发光泽及活动情况明显改善,DAI评分显著降低(P<0.05);结肠黏膜趋向完整,溃疡缺损程度明显减轻,黏膜下层和肌层轻度水肿,炎细胞浸润明显减少;血清IL-4及结肠组织SOD、GSH-Px水平显著升高,血清TNF-α、IL-6、IL-1β及结肠组织MDA、MPO、iNOS水平显著降低(P<0.05)。结论:复方苦参汤可抑制UC大鼠的炎性因子水平及氧化应激反应,进而对溃疡性结肠炎大鼠起到治疗作用,其机制可能与调控EphB2/Ephrin-B1/JNK通路有关。

EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α3-nAChRs电流的影响

目的探讨EphB/Ephrin-B1信号对鸡胚睫状神经节(ciliary ganglion,CG)神经元上α3-尼古丁乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,α3-nAChRs)电流的影响。方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α3-nAChRs电流,细胞被随机分为:对照组;Ephrin-B1Fc治疗组——用Ephrin-B1与IgG重组后形成的Ephrin-B1Fc刺激细胞;IgG治疗组——用重组Ephrin-B1Fc所需相同浓度的IgG刺激细胞;Ephrin-B1治疗组——用重组Ephrin-B1Fc所需相同浓度的Ephrin-B1刺激细胞,观察电流的变化。结果对照组、IgG治疗组和Ephrin-B1治疗组之间α3-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而此3组与Ephrin-B1Fc治疗组之间有显著差异(均P<0.05),Ephrin-B1Fc可浓度依赖性抑制α3-nAChRs电流,该过程可快速发生并呈现可逆性。培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为4.9μg/ml和8.4μg/ml。结论本研究表明Eph/Ephrin-B1信号可影响CG神经元α3-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。

EphB/Ephrin-B1信号对睫状神经节α7-尼古丁乙酰胆碱受体电流的影响

目的探讨EphB/Ephrin-B1信号对鸡胚睫状神经节(CG)神经元上α7-尼古丁乙酰胆碱受体(α7-nAChRs)电流的影响。方法用膜片钳技术分别在培养的和急性分离的CG神经元上记录α7-nAChRs电流。细胞被随机分为:对照组、Ephrin-B1Fc处理组、IgG处理组和Ephrin-B1处理组,观察电流的变化。结果对照组、IgG组和Ephrin-B1处理组之间α7-nAChRs电流无显著差异(P>0.05),而这3组与Ephrin-B1Fc处理组之间有显著差异(P<0.05)。Ephrin-B1Fc可浓度依赖性抑制α7-nAChRs电流,该过程可在数分钟内发生,并呈现可逆性。培养的和急性分离的CG神经元Ipeak/Cm的IC50分别为0.032mg/L和1.4mg/L。结论Eph/Ephrin-B1信号可影响CG神经元α7-nAChRs的电流,提示Eph/Ephrin-B1可能参与交感神经系统功能的调控。

EphB2受体及其配体Ephrin-B在结直肠癌中的研究进展

EphB2受体及其配体Ephrin-B系统的功能失调将导致肠上皮具有增殖能力细胞沿着隐窝-鞭毛轴杂乱排列;而且在结直肠癌患者癌组织中,EphB2的表达越低,浸润深度越深,分化越差,远处转移越多,存活率越低;体外实验也证明其高表达在癌细胞菌落形成实验可抑制癌细胞的生长,配体Ephrin-B对EphB2受体的激活可降低肿瘤细胞的侵袭性.在本文中我们将就EphB2/Ephrin-B系统关于肠上皮干细胞迁徙导向的调控,及其在大肠癌的多步癌变过程中的抑制作用的最新研究进展加以综述.

急性脑缺血通过激活EphB2/ephrin-B1/NMDA受体信号通路促进小鼠海马神经发生

目的:观察急性脑缺血对小鼠海马神经发生的影响,并探讨该过程是否涉及EphB2/ephrin-B1/NMDA受体信号通路的激活。方法:52只C57BL/6小鼠随机分为2组,即假手术组和急性脑缺血模型组,每组26只,其中每组用于Morris水迷宫实验6只,HE染色4只,BrdU免疫荧光染色4只,双皮质素(DCX)免疫荧光染色4只,RT-qPCR实验4只,Western blot实验4只。采用双侧颈总动脉夹闭法建立小鼠脑缺血模型。HE染色观察小鼠海马CA1区病理改变;Morris水迷宫实验检测小鼠学习与记忆等认知功能的改变;免疫荧光染色观察小鼠海马区BrdU阳性细胞和DCX蛋白表达以评估神经发生情况;RT-qPCR及Western blot检测小鼠海马EphB2、ephrin-B1、reelin、微管相关蛋白2(MAP-2)及NMDA受体亚基NR2A和NR2B的mRNA及蛋白表达。结果:脑缺血小鼠海马CA1区神经元损伤显著(P<0.01),学习记忆功能显著下降(P<0.01),提示脑缺血模型成功建立;海马区BrdU阳性细胞和DCX蛋白表达显著增加(P<0.01),表明脑缺血后海马出现神经发生;同时海马区EphB2、ephrin-B1、reelin、MAP-2、NR2A和NR2B的表达水平也显著上调(P<0.05)。结论:急性脑缺血能促进小鼠海马神经干细胞增殖及内源性神经发生,其促进神经发生的机制可能与激活EphB2/ephrin-B1/NMDA受体信号通路有关。

MiR-326调控EphB3抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移

目的 探究miR-326通过调控EphB3的表达,抑制乳腺癌侵袭转移的分子机制。方法 RTFQ-PCR用于检测miR-326在正常乳腺上皮细胞及乳腺癌细胞中的表达情况及miR-326过表达质粒的转染效率。EdU细胞增殖实验、Transwell实验用于检测不同分组细胞增殖、迁移和侵袭能力的变化。双荧光素酶实验用于验证miR-326与EphB3是否存在结合位点。Western blot法检测过表达miR-326后乳腺癌细胞中EphB3的表达情况。结果 RTFQ-PCR结果显示,miR-326在乳腺癌细胞中低表达,且转染成功(P<0.05)。EdU增殖实验和Transwell实验结果表明,过表达miR-326能够抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR-326可以与EphB3的3′-UTR相互结合(P<0.05)。Western blot和Transwell实验结果显示,miR-326可以负向调控EphB3抑制乳腺癌细胞的侵袭转移(P<0.05)。结论 miR-326在乳腺癌的发生发展过程中起着抑癌基因的作用,并通过调控EphB3的表达抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移。

EphB2调控claudin-6对子宫内膜癌侵袭和转移的影响

目的探讨EphB2和claudin-6的靶向关系,观察敲低和过表达EphB2基因通过调控claudin-6对子宫内膜癌细胞生长、迁移及侵袭的影响。方法采用TCGA数据库分析EphB2在子宫内膜癌和癌旁组织中的差异表达及其与临床病理特征的关系;应用GSEA法预测EphB2可能相关的功能通路;应用TCGA数据库分析EphB2互作基因;利用体外培养子宫内膜癌细胞;采用脂质体转染法转染子宫内膜癌细胞敲低和过表达EphB2基因;采用qRT-PCR法和Western blot法检测敲低和过表达EphB2各组细胞EphB2和claudin-6表达水平;提取转染后细胞进行细胞增殖、迁移和侵袭实验;免疫组化检测EphB2和claudin-6蛋白在子宫内膜样癌中的表达。结果TCGA数据库分析543例患者显示EphB2在子宫内膜癌中高表达,claudin-6可能是EphB2最具相关性基因(R=0.6);GSEA数据库分析显示EphB2表达可能与细胞黏附和细胞连接通路相关。qRT-PCR法显示干扰后EphB2 mRNA表达:阴性对照组:1.055±0.284、siRNA-EphB2组:0.499±0.264。划痕实验法检测不同分组中癌细胞的迁移能力,干扰后划痕愈合率显示:阴性对照组:0.629±0.02、空白对照组:0.676±0.006、siRNA-EphB2组:0.352±0.009;过表达后划痕愈合率显示:空白对照组:0.151±0.012、空载体组:0.271±0.015、EphB2过表达组:0.672±0.011;敲低EphB2后claudin-6表达显著下降,细胞增殖活力明显降低,细胞侵袭能力亦受到明显抑制,差异有统计学意义(P均<0.05);过表达EphB2后claudin-6表达明显上升,细胞迁移和侵袭能力亦明显增强,差异有统计学意义(P均<0.05)。实验显示:EphB2和claudin-6在子宫内膜样癌(128例)和癌旁组织(28例)中的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论EphB2在子宫内膜癌中高表达,EphB2基因敲低和过表达影响子宫内膜癌细胞的生长及恶性生物学行为,其机制可能与调控claudin-6表达水平有关。

靶向阻断EphB信号缓解炎症痛的机制

目的 探究EphB1-Fc靶向阻断EphB受体介导的信号在抑制慢性炎症痛中的作用,并探讨其病理机制。方法 18只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组(Control组)、CFA模型组(CFA组)及CFA和EphB1-Fc联合处理组(CFA+EphB1-Fc组),每组6只。在模型组和联合处理组大鼠左侧足底皮下注射50μL完全弗氏佐剂(CFA),使注射区域产生红、肿、热和痛等炎症反应。在对照组大鼠同侧足底皮下注射等剂量的生理盐水。模型构建7 d后,联合处理组鞘内注射5μg EphB1-Fc(10μL),其余两组大鼠鞘内注射等量的生理盐水。记录3组大鼠痛觉行为变化;免疫荧光和免疫印迹分析3组大鼠脊髓组织中EphB信号变化及脊髓炎症相关蛋白水平变化。结果 EphB1-Fc可显著缓解CFA诱导的大鼠机械痛敏,降低脊髓组织中炎症相关因子IL-1β表达;EphB1-Fc给药可阻断EphB1/Src/NF-κB信号。结论 靶向阻断EphB1介导的Src/NF-κB信号降低脊髓炎症缓解病理性疼痛。

模拟失重下EphrinB2/EphB4通路在共培养体系中血管平滑肌细胞增殖及凋亡中的作用

目的探究模拟失重下EphrinB2/EphB4通路对共培养体系中血管平滑肌细胞的增殖及凋亡的影响,为探索失重环境下航天员心血管功能失调的机制提供思路。方法利用细胞回转器对人主动脉内皮细胞(HAECs)和人主动脉平滑肌细胞(HASMCs)的共培养体系进行模拟失重处理,分为正常重力(Control)组、模拟失重(MG)组,培养48 h后,采用qRT-PCR和Western blotting检测HASMCs中EphB4、EphrinB2的表达变化情况,加入EphB4抑制剂NVP-BHG712,观察其对模拟失重下共培养体系中HASMCs的α平滑肌动蛋白(α-SMA)、HASMCs增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等表达的影响;采用免疫荧光检测尾悬吊28 d大鼠颈动脉平滑肌细胞中EphB4的表达情况。结果HAECs和HASMCs共培养48 h后,与Control组相比,MG组HASMCs中EphB4和EphrinB2水平明显升高(P<0.05),α-SMA及Bax表达显著下降(P<0.05),PCNA与Bcl-2表达显著增高(P<0.05);与MG组相比,共培养体系中加入EphB4通路抑制剂NVP-BHG712可以使模拟失重下的HASMCs中Bax和α-SMA表达显著升高(P<0.05),PCNA和Bcl-2表达显著下降(P<0.05)。结论模拟失重效应通过EphrinB2/EphB4通路促进共培养体系中HASMCs的增殖,促进HAECs和HASMCs共培养体系中HASMCs向合成表型转换,并抑制凋亡。

EphB3通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤细胞侵袭及迁移的影响

目的探究促红细胞生成素产生的肝细胞受体B3(EphB3)通过PI3K/AKT信号通路对胶质瘤的侵袭、迁移的作用机制。方法通过EphB3慢病毒过表达及EphB3-siRNA感染U87MG、U251细胞系,采用细胞划痕实验、细胞侵袭(Transwell)实验检测细胞的侵袭、迁移能力,采用蛋白印迹法(Western Blot)检测EphB3过表达及siRNA干扰后磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达,采用细胞多重免疫荧光检测EphB3的过表达及敲低检测EphB3、p-PI3K、p-AKT共表达情况;收集Ⅰ~Ⅳ级胶质瘤组织样本40例,采用免疫组化检测EphB3的表达,组织多重免疫荧光检测EphB3及p-PI3K、p-AKT的共表达。结果U87MG、U251细胞系过表达EphB3后细胞侵袭、迁移能力减弱(P<0.05),敲低EphB3后U87MG、U251细胞侵袭、迁移能力增强(P<0.05);EphB3过表达后p-PI3K、p-AKT表达下降(P<0.05),EphB3敲低后p-PI3K、p-AKT表达升高(P<0.05);临床胶质瘤组织样本结果显示,EphB3的表达与胶质瘤WHO分级呈负相关;多重免疫荧光结果显示,胶质瘤的级别与p-PI3K、p-AKT的荧光信号强度呈正相关。结论EphB3的表达可抑制胶质瘤的侵袭及迁移,其机制可能通过PI3K/AKT信号通路来影响肿瘤细胞的侵袭、迁移。

基于EphrinBs/EphBs通路探讨桃红四物汤治疗带状疱疹后遗神经痛大鼠模型的作用机制

目的观察桃红四物汤对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠模型的影响,探讨EphrinBs/EphBs通路在其中的作用机制。方法60只SD大鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组(采用水痘-带状疱疹病毒慢性感染法构建PHN模型)、阳性组[建模后以普瑞巴林27 mg/(kg·d)灌胃]、治疗组[建模后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃],治疗+EphB2-Fc组[建模第3天鞘内注射EphB2-Fc 5μg后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃]和治疗+EphrinB2-Fc组[建模第3天鞘内注射EphrinB2-Fc 5μg后以桃红四物汤5 g/(kg·d)灌胃]。采用行为学法分别在给药后1 d、7 d和14 d时检测大鼠的机械痛阈值,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测脊髓神经细胞凋亡,荧光法检测脊髓组织的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)活性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测EphrinBs/EphBs通路相关蛋白EphrinB2和EphB2的表达。结果与空白组比较,建模后大鼠机械痛阈值明显降低,而大鼠脊髓中IL-1β、TNF-α水平、脊髓神经细胞凋亡指数、Caspase-3活性以及EphrinB2、EphB2蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,给予桃红四物汤治疗的大鼠在给药后7 d和14 d时机械痛阈值均明显升高(P<0.05),而大鼠脊髓中IL-1β、TNF-α水平、脊髓神经细胞凋亡指数、Caspase-3活性以及EphrinB2、EphB2蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。给予EphBs阻滞剂EphB2-Fc后大鼠脊髓组织中EphB2蛋白表达水平明显低于治疗组(P<0.05)。以EphBs激动剂EphrinB2-Fc作用后大鼠脊髓组织中EphrinB2蛋白表达水平明显低于治疗组,而EphB2蛋白表达水平明显高于治疗组(P<0.05)。结论桃红四物汤可能通过抑制EphrinBs/EphBs通路减少炎性因子的释放和脊髓神经细胞凋亡,对PHN大鼠发挥镇痛作用。

受体酪氨酸激酶EphB1在胃癌中的表达及其临床意义

背景与目的:受体酪氨酸激酶Eph基因家族在神经和脉管系统发育中发挥重要作用,也可能参与某些肿瘤的发生、进展和预后。本研究探讨该家族成员EphB1在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:应用实时定量RT-PCR(real-time reverse-transcriptase PCR)测定61例胃癌组织标本(包括来源于同一患者的正常黏膜和癌组织)和5株胃癌细胞的EphB1mRNA。并应用抗EphB1的特异性多克隆抗体对其中58例进行免疫组化染色,探讨EphB1蛋白在正常黏膜和肿瘤细胞中的表达水平及细胞内定位。结果:EphB1mRNA在胃癌细胞株中呈现不同程度表达。与正常黏膜相比,69%(42/61)的患者胃癌组织EphB1mRNA表达上调,15%(9/61)的患者表达下调,16%(10/61)的患者标本中表达既不上调也不下调。EphB1mRNA表达与患者的性别、肿瘤大小和淋巴结转移有关(P值分别为0.006,0.04和0.039),而与其他临床病理指标无关。EphB1蛋白表达水平与mRNA表达不完全一致。EphB1蛋白在45%(26/58)的患者标本中表达下调,在17%(10/58)的患者中上调,其余标本中表达既不上调也不下调。肿瘤细胞EphB1蛋白丢失与胃壁侵犯深度、分期和淋巴结转移呈正相关(P值分别为0.039,0.001和0.008)。结论:在胃癌进展过程中,EphB1可能发挥肿瘤抑制作用。它有可能成为胃癌预后的新标志物及基因治疗的新靶标。

EphB/EphrinB信号通路对成骨分化能力的影响

目的探讨EphB/EphrinB信号通路对去势小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)的成骨分化能力和绝经后骨质疏松动物模型骨量的影响。方法将24只8周龄健康雌性BALB/c小鼠随机分为去势组(OVX组)和假手术组(Sham组),检测小鼠BMSCs中EphB/EphrinB信号通路表达水平。(2)将去势小鼠分为4组,分别进行腹腔注射相应Eph受体激动剂:EfnB1-Fc及EfnB2-Fc,Eph受体抑制剂EphB2-Fc,对照组腹腔注射human IgG-Fc。各组分别于术后10周将小鼠脱颈处死,在Micro-CT分析下比较股骨骨质情况。去势组和假手术组小鼠取股骨与胫骨骨髓,经密度梯度离心法分离培养并鉴定其骨髓间充质干细胞至P3用于实验,各组BMSCs在成骨诱导条件下7 d后,通过Realtime PCR检测成骨相关基因(Runx2、ALP、Osterix)及破骨细胞分化相关基因(OPG、RANKL)的表达水平,成骨分化14、21 d后,采用ALP染色和茜素红染色观察成骨分化能力。结果与假手术组(Sham组)相比较,去势组(OVX组)中EfnA2、EphB4、EfnB2、EfnB1及EphA4表达显著增高(P<0.01);Sham组中EphA2及EfnB2表达显著降低(P<0.01)。10周后Micro-CT结果显示,与去势对照Fc组比较,Sham组、EfnB1-Fc、EfnB2-Fc及EphB2-Fc去势组骨小梁结构均较完整、骨小梁密度较好(P<0.01);与EfnB1-Fc、EfnB2-Fc去势组相比较,Sham组和EphB2-Fc去势组的骨密度及骨体积分数均明显增高(P<0.01)。Realtime PCR检测成骨相关基因提示,与去势对照Fc组比较,EfnB1-Fc、EfnB2-Fc和EphB2-Fc去势组中ALP与Osterix的表达明显升高(P<0.01);EfnB1-Fc和EphB2-Fc可显著提高BMSCs成骨分化中ALP的活性和骨基质矿化能力,以EphB2-Fc效果最为显著(P<0.01)。与去势对照Fc组比较,EfnB1-Fc、EfnB2-Fc和EphB2-Fc去势组中RANKL的表达未见明显差异(P>0.05),但OPG的表达明显升高(P<0.01),其中,EfnB1-Fc去势组与EphB2-Fc去势组中OPG/RANKL的比率升高最为明显(P<0.01)。结论EphB2/EfnB1双向信号通路可逆转去势所导致的骨量减少,上调ALP与Osterix的表达,促进BMSCs的成骨分化能力,并可通过调节OPG/RNAKL比率影响去势骨髓间充质干细胞的功能,从而间接影响破骨细胞系的分化。

EphB4、HIF-1α在肺癌组织中的表达及其意义

背景与目的 业已发现EphB4和HIF 1α与肿瘤的发生、发展有密切关系。本研究的目的是探讨EphB4、HIF 1α蛋白在肺癌中表达的生物学意义及相互间的关系。方法 采用免疫组织化学SP法检测54例肺癌组织和10例正常肺组织中EphB4、HIF 1α蛋白表达的情况。结果 EphB4 和HIF 1α蛋白在54例肺癌组织中的阳性表达率分别为50.0%(27/54)和42.6%(23/54),较对照组显著升高(P<0.05);肺癌中EphB4和HIF 1α的表达与肉眼类型、分级、分期有密切关系(P<0.05),而与组织学类型、年龄、性别、淋巴结转移无明显关系(P>0.05);EphB4和HIF 1α的表达呈显著正相关关系(P<0.01)。结论 EphB4 和HIF 1α在肺癌中的异常表达与肺癌的发生、进展和恶性度有关,两者存在着一定的协同作用;检测EphB4 和HIF 1α表达有助于预测肺癌预后。

血府逐瘀汤促血管新生中EphB4/ephrinB2信号通路的作用研究

目的:探讨Eph B4/ephrin B2信号通路在血府逐瘀汤促血管新生中的作用。方法:运用血清药理学方法,以1.25%、2.5%、5%浓度的血府逐瘀汤含药血清和空白血清干预人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVEC-12)48h,通过MTT法、Boyden小室迁移法、细胞黏附法、逆转录PCR法分别检测细胞增殖、迁移、黏附、Eph B4和Ephrin B2基因表达的情况。结果:与同血清含量的对照组比较,5%浓度含药血清对细胞的增殖能力起抑制作用。1.25%、2.5%和5%3个浓度含药血清皆有显著的促内皮细胞迁移和黏附作用,并能抑制Eph B4的表达,其中1.25%、2.5%浓度含药血清抑制Ephrin B2的表达。结论:血府逐瘀汤通过促内皮细胞迁移和黏附发挥促血管新生作用,且该作用可能与Eph B4/Ephrin B2通路密切相关。

EphB4及其配体EphrinB2在食管鳞癌中表达及其与血管生成的关系

目的:探讨EphB4受体及其配体EphrinB2在食管鳞癌组织中的表达及其与血管生成的关系。方法:应用免疫组织化学Envision plus法检测60例食管鳞癌和10例癌旁组织中EphB4受体及其配体EphrinB2的表达和VEGF的表达,采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测60例食管鳞癌和10例癌旁食管组织中EphB4、EphrinB2和VEGF mRNA的相对含量,并分析EphB4、EphrinB2和VEGF的表达的相关性。结果:食管鳞癌组织中EphB4、EphrinB2、VEGF mRNA和蛋白的表达均高于癌旁正常食管黏膜,差异有统计学意义(P<0.05)。EphB4 mRNA和EphrinB2 mRNA表达正相关(r=0.541,P<0.05),EphB4 mRNA、EphrinB2 mRNA均和VEGF mRNA表达正相关(r=0.642,r=0.582;P均<0.05)。结论:EphB4和EphrinB2在食管鳞癌中高表达,与血管生成密切相关。

大鼠局灶脑缺血再灌注后Ephrin-B2的表达

目的:探讨Ephrin-B2在大鼠脑缺血再灌注后脑组织中的表达情况以及对血管新生的调节作用。方法:雄性SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组及缺血再灌注组,后者又分为1,3,7,14,28 d亚组,线栓法制备局灶性大脑中动脉缺血再灌注模型;改良神经功能评分(modified neurological severity scores,mNSS)法对各时间点模型进行评分;Western印迹及荧光定量PCR检测缺血脑组织中Ephrin-B2的表达;以免疫荧光双标法定位Ephrin-B2表达的细胞类型;以CD31+内皮细胞计数缺血半暗带中微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:缺血半暗区MVD从缺血再灌注后第3天起较假手术组开始增加,第14天最高(P<0.01),第28天有所回落;再灌注7 d亚组的神经功能评分较1 d及3 d亚组增加,14 d开始下降;Ephrin-B2在血管内皮、血管周围、神经元细胞膜及星形胶质细胞中均有显著表达;Ephrin-B2蛋白及mRNA水平从再灌注第3天开始显著增加,到第7天及14天(P<0.01)表达水平最高。结论:脑缺血再灌注可诱导Ephrin-B2表达升高,并呈动态变化趋势,Ephrin-B2参与了脑缺血后血管新生的调控过程,并促进脑缺血后血管新生,从而促进神经功能恢复。