分泌ephrinAl-caspase-3的T淋巴细胞株的建立

目的培养T淋巴细胞,研究其被pAd-ephrinAl-caspase-3重组腺病毒感染后的表达情况。方法通过细胞培养方法培养T淋巴细胞,将构建好的重组腺病毒感染T淋巴细胞,用间接免疫荧光检测T淋巴细胞的感染效率;用MTT法检测T淋巴细胞增殖和毒性;用定量PCR和ELISA检测ephrinAl-caspase-3的表达量。结果成功培养了T淋巴细胞且被重组腺病毒感染后,ephrinAl和caspase-3表达增高;随着MOI的升高,细胞的生存数量减少、细胞增殖活力下降(P<0.05),而且具有时间和剂量依赖性。结论分泌ephrinAl-caspase-3的T淋巴细胞构建成功。

分泌EphrinAl-Caspase-3的T淋巴细胞对裸鼠乳腺癌组织生长的抑制作用

目的探讨分泌Ephrin Al-Caspase-3的T淋巴细胞体内移植对癌细胞的抑制作用。方法将裸鼠(n=35)接种乳腺癌细胞,构建裸鼠乳腺癌模型。待肿瘤体积达到0.1 cm3大小,选取30只具有平均大小瘤组织的裸鼠随机分为PBS组、未感染腺病毒组、感染Ad-EphrinA1-Caspase-3的T淋巴细胞组,经瘤内移植,每隔2~3 d测量肿瘤大小。另选取3组荷瘤裸鼠,经上述细胞移植后,每隔2~3 d获取裸鼠皮下肿瘤组织匀浆,ELISA检测Ephrin A1-Caspase-3的含量。实验结束后各组动物断颈处死剥离肿瘤制成切片,在荧光显微镜下观察表达绿色荧光蛋白的T淋巴细胞,免疫荧光法进行Caspase-3、Ki-67的检测。结果乳腺癌细胞接种裸鼠1周后可用手摸到皮下肿瘤,证明乳腺癌细胞荷瘤动物模型制做成功。接种后第8天各组裸鼠肿瘤体积差异变大,治疗组与PBS组/T淋巴细胞组相比差异极显著(P<0.05)。单纯T淋巴细胞移植组肿瘤体积虽较PBS对照组生长缓慢,但两者间并无明显统计学差异。Ephrin A1-Caspase-3治疗组第2天可以检测出Ephrin A1-Caspase-3的表达,第8天达到高峰,随后分泌量逐渐降低。PBS对照组和T淋巴细胞组未检测到Ephrin A1-Caspase-3的表达。在治疗组肿瘤组织中观察到分散的绿色荧光蛋白标记的Ephrin Al-Caspase-3-T淋巴细胞,而在PBS组和T淋巴细胞组中未检测到绿色荧光蛋白的存在。治疗组感染细胞中,Caspase-3阳性细胞比例上调,Ki-67阳性细胞比例下调。在PBS组和T淋巴细胞组未检测到Ephrin Al-Caspase-3的表达。结论Ephrin Al-Caspase-3可显著抑制乳腺癌细胞的生长,发挥抗肿瘤效应。

食管鳞状细胞癌组织中EphA2和EphrinA1的表达

目的:观察食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)组织中EphA2和EphrinA1蛋白及mRNA的表达水平,分析它们与食管癌患者预后的关系。方法:应用组织芯片技术和免疫组织化学方法检测173例食管鳞癌组织和19例正常食管黏膜组织中EphA2和EphrinA1蛋白表达水平;用激光捕获显微切割(LCM)技术和RT-PCR检测食管鳞癌组织中EphA2和EphrinA1 mRNA的水平。结果:食管鳞癌组织中EphA2阳性表达率80.9%、EphrinA1阳性表达率为84.4%,均明显高于正常食管黏膜(P<0.05);EphA2和EphrinA1蛋白表达同食管鳞癌患者的年龄、肿瘤部位、肿瘤大小、组织学分级无关;EphA2蛋白的表达水平与食管鳞癌患者的性别、淋巴结转移有关(P<0.05),EphrinA1蛋白的表达与食管鳞癌患者的临床分期有关(P<0.05)。生存分析显示:EphA2和EphrinA1蛋白的高表达与食管鳞癌患者的生存期有关。结论:EphA2和EphrinA1蛋白的高表达提示食管鳞癌患者预后不佳。

胚胎附植期梅山猪EphrinA1全编码区克隆及生物信息学分析

为了研究促红细胞生成素产生肝细胞配体A1(Ephrin A1)对梅山猪胚胎附植期胚胎在子宫内膜间迁移和对子宫内膜黏附活动的影响,利用克隆测序、生物信息学和qRT-PCR方法,克隆了Ephrin A1基因的全长编码序列,对其表达的蛋白结构和功能进行了预测,并检测了其mRNA表达变化。梅山猪Ephrin A1基因编码区有5个c SNPs变异,其中2个导致氨基酸突变,分别为Glu29Asn和Trp33Arg,位于Ephrin A1外显子1和外显子2上。Ephrin A1编码序列中含5个外显子,编码205个氨基酸。Ephrin A1为不稳定的亲水性蛋白,有1个信号肽和一个保守区域,无跨膜区。另外,Ephrin A1在梅山猪胚胎附植期有较强的mRNA表达。表明Ephrin A1基因可能参与梅山猪的胚胎附植调控,其c SNPs有望成为影响猪产仔数基因的潜在分子标记。

Eph受体家族及其配体的信号转导途径及功能

Eph受体是已知最大的酪氨酸蛋白激酶受体家族 ,Eph受体和其膜附着型配体 (ephrin)在发育过程中呈现不同的表达模式 ,近来研究证明 ,Eph受体和其配体在包括神经网络形成 ,神经管和轴旁中胚层的成型(patterning) ,细胞迁移导向和轴突路径导引 ,血管形成等许多的发育过程中起重要作用 .Eph受体及其配体也与肿瘤发生有关 。

肉桂醛对癫痫大鼠皮质小窝蛋白表达的影响

目的观察小窝蛋白(Cav)-1、Survivin和Ephrin A2在红藻氨酸(KA)诱导的急性癫痫大鼠皮质表达的变化,初步探讨癫痫发作机制及肉桂醛干预作用。方法将60只成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、Na Cl对照组、癫痫组、肉桂醛小剂量组(25 mg/ml)、肉桂醛中剂量组(37.5 mg/ml)及肉桂醛大剂量组(50 mg/ml)。KA制备癫痫模型,Western印迹检测大鼠皮质Cav-1、Survivin和Ephrin A2的表达。结果 Na Cl对照组和正常组Cav-1、Survivin和Ephrin A2蛋白的表达无差异(P>0.05),癫痫组大鼠皮质Cav-1、Survivin和Ephrin A2蛋白的表达显著高于Na Cl对照组(P<0.01);与癫痫组比较,肉桂醛组Cav-1、Survivin和Ephrin A2的表达降低,且与肉桂醛的浓度呈负相关关系(P<0.05)。结论肉桂醛降低癫痫的发作与调节Cav-1、Survivin、Ephrin A2蛋白的表达有关。

Eph家族蛋白研究进展

Eph家族蛋白包括Eph受体和Ephrin配体,是蛋白酪氨酸激酶家族中的最大成员。由于其具有独特的受体-配体复合物的结构特点及其受体与配体间特有的相互作用模式,所以它们极有可能成为疾病治疗的药物靶标,故该蛋白家族的相关领域研究日益受到重视。该文首先从Eph家族蛋白的分类、表达特点、结构和受体-配体相互作用特点以及其在神经系统中的功能等几个方面简要综述了其相关领域的最新研究进展,进而从结构、作用模式、功能几方面对Eph家族蛋白在神经系统疾患防治中的潜在价值和未来的研究方向进行了探讨和展望。

骨吸收与骨形成耦联中Eph/ephrin信号转导的研究进展

破骨细胞的骨吸收活动与成骨细胞的骨形成活动相互作用调节,形成一种特殊的耦联机制,影响骨骼生长、发育及正常骨组织结构的维持.最近几年提出的Eph/ephrin双向信号转导在骨吸收与骨形成耦联中的研究越来越受到关注.从Eph/ephrin分子结构、信号转导机制及生物学意义等几方面对该理论作一阐述.

Ephrin-A5在脑梗死大鼠脑组织中的分布和动态表达

目的:研究发育期的轴突导向分子ephrin-A5在成年大鼠缺血性脑梗死皮层内的分布以及梗死灶周围不同时点的表达变化,探讨ephrin-A5基因在缺血性脑梗死后对神经再生的作用。方法:建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用免疫组化技术检测ephrin-A5的分布、细胞定位,并于脑梗死后1、2、4周用荧光定量PCR法检测梗死灶周ephrin-A5表达量的变化。结果:免疫组化结果显示:大脑中动脉皮层支梗塞后ephrin-A5主要表达于梗死灶侧皮层的V2MM(第二视皮质内侧内区)、V2ML(第二视皮质内侧外区)、V2L(第二视皮质外侧区)、Au1(第一听皮质)、AuV(第二听皮质,腹侧区),分布在神经元胞体、树突中,轴突亦有少量分布。荧光定量PCR结果显示:ephrin-A5mRNA在脑梗死后表达量上升,1周达到高峰,第2、4周保持第1周水平。结论:脑梗死后eph-rin-A5在梗死灶周神经元胞体、树突中持续高水平表达,它可能是造成成年哺乳动物中枢神经系统损伤后神经轴突再投射障碍的重要原因之一。

Hp感染的胃癌组织中Eph A2和Ephrin A1的表达与远处转移的关系

采用蛋白印迹法和逆转录-聚合酶链反应法检测胃癌及正常胃黏膜组织中Eph A2、Ephrin A1和E-cadherin的蛋白及mRNA水平,分析其与临床资料的关系,初步探讨幽门螺杆菌(Hp)促进胃癌发展的机制。结果胃癌组Eph A2和Ephrin A1蛋白及mRNA水平显著高于正常胃黏膜组(P<0.05),且伴Hp感染组显著高于未伴Hp感染组(P<0.05);胃癌组Eph A2和Ephrin A1蛋白及mRNA水平与存在淋巴结转移呈正相关;Eph A2和Ephrin A1分别与E-cadherin蛋白表达量呈负相关。说明Hp可能通过诱导胃癌细胞合成更多的Eph A2和Ephrin A1,从而抑制E-cadherin蛋白的表达,使胃癌细胞通过淋巴系统发生转移。

Eph-ephrin双向信号功能的研究进展

产生促红细胞生成素的肝细胞（erythropoietin-producinghepatocyte，Eph）受体是众多的细胞表面型酪氨酸蛋白激体酶受体中的一种，是酪氨酸蛋白激酶受体家族中的最大成员。其配体主要表达于细胞表面，被命名为ephrin。Eph受体及其配体ephrin统称为Eph家族蛋白。Eph受体属跨膜蛋白，存在胞外配体结合区、跨膜区和胞内区。Eph胞内近细胞膜区域相对保守，包含1个具有酪氨酸残基的高度保守的近膜区结构域，紧接1个具酪氨酸激酶活性的结构域、SAM（sterilealphamotif）结构域和C端的PDZ结合序列。

血管特异生长因子及其治疗血管相关疾病机制的研究进展

综述血管特异生长因子调节机体血管发生、结构和功能的机制。通过体外直接注入或转基因技术,提高机体内这些生长因子含量可治疗局部组织缺血。抑制这些生长因子基因表达或生物活性则能够治疗引起血管发育异常的病变。

独活寄生汤调控风寒湿痹型骨关节炎软骨下骨重建失衡的作用机制探讨

软骨下骨是软骨的重要功能单位之一,主要功能为吸收应力、缓冲震荡和维持关节形状。软骨下骨重建失衡在骨关节炎病理过程中发挥重要的调控作用,提示抑制软骨下骨重建失衡可能是治疗骨关节炎的一个潜在有效途径。独活寄生汤是治疗风寒湿痹型骨关节炎的经典名方,长期应用于临床,疗效显著;但独活寄生汤成分的复杂性及多样性限制了其临床上的广泛应用,其作用靶点的研究是目前研究亟待解决的关键问题之一。因此,文章基于Ephrin/Eph信号通路与RANKL/RANK/OPG信号通路是调控软骨下骨重建的关键因素,探讨独活寄生汤调控骨关节炎软骨下骨重建失衡的作用机制,为初步阐明独活寄生汤的作用靶点提供新思路。

Eph-ephrin介导反向信号传递的研究进展

双向信号传递是细胞间通讯领域中新近阐明的机制,酪氨酸激酶受体-配体(Eph-ephrin)介导的双向信号传递是此机制中的一个重要代表.Eph酪氨酸激酶家族受体及其配体ephrin家族成员是在神经发育、血管新生等方面起重要作用的分子,通过Eph向细胞内传递的信号称为正向信号,通过其配体ephrin的信号称为反向信号.Ephrin家族又可根据分子结构分为2个亚家族,其中ephrinB为跨膜蛋白,可通过酪氨酸磷酸化依赖和PDZ结合结构域介导2种方式向胞内传递反向信号,活化FAK、JNK、Wnt等信号通路,ephrinA为糖基磷脂酰肌醇锚定蛋白,也具有反向信号传递功能.

雌激素调节Eph/Ephrin在破骨细胞分化中的作用以及与绝经后骨质疏松的关系

目的探讨雌激素调节Eph/Ephrin在破骨细胞分化中的作用以及与绝经后骨质疏松的关系。方法 (1)使用雌激素和雌激素拮抗剂连续8 d培养RAW264.7破骨细胞,提取蛋白质及RNA,检测Eph/Ephrin信号通路。(2)经RANKL连续诱导8 d假手术(Sham组)和卵巢摘除骨质疏松(OVX组)小鼠破骨细胞,提取蛋白质及RNA,检测EphrinB 2变化。(3)向OVX组破骨细胞添加EphrinB 2配体EphB 4-Fc片段,检查抗酒石酸酸性酶(TRAP)和破骨细胞标志物。(4)经RANKL诱导OVX组及Sham组破骨细胞,观察EphrinB 1变化,向OVX添加EphrinB 1配体EphrinB 2-Fc片段,检查TRAP及破骨细胞标物。结果 OVX组TRAP阳性细胞数较Sham组多;比较EphrinB 2水平,雌激素拮抗组<对照组(添加可溶IgG-Fc蛋白)<激素组,OVX组<Sham组;OVX组在加入EphB 4-Fc片段后TRAP阳性细胞减少,破骨细胞标志物水平降低,差异均有显著性(P<0.05)。结论雌激素调节EphrinB 2水平参与破骨细胞分化,经EphB 4-Fc片段处理可抑制绝经骨质疏松破骨细胞,起到治疗作用。

神经元-小胶质细胞EphA4/ephrin通路调控小胶质细胞介导的缺血后炎性损伤

目的观察神经元-小胶质细胞间EphA4/ephrin信号通路在脑缺血后的炎性损伤中的作用及机制。方法建立神经元-小胶质细胞混合培养体系和糖氧剥夺再复氧(oxygen-glucose deprivation and reperfusion, OGD/R)模型,使用预聚集化的EphA4-Fc激动小胶质细胞ephrin配体,检测OGD/R后的细胞凋亡、小胶质细胞增殖和亚型极化以及小胶质细胞功能改变。结果 EphA4受体高表达于原代神经元,与对照组相比,预聚集化EphA4-Fc干预加重OGD/R导致的细胞凋亡,促进小胶质细胞增殖以及向M1型(促炎型)极化(炎症表型)。结论神经元-小胶质细胞间EphA4/ephrin信号通路通过调控小胶质细胞亚型极化参与脑缺血后的炎性损伤的过程。

Ephrin B2基因在维甲酸诱导神经干细胞分化过程中的表达

目的 研究EphrinB2基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞的分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法 用 1μmol/L的维甲酸诱导人胚胎神经干细胞 ,诱导 7d后 ,做NSE免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。于ATRA诱导前、诱导 3d和诱导 7d ,提取细胞的总RNA。用半定量RT PCR法检测EphrinB2基因的表达情况。结果 与对照组相比 ,全反式维甲酸能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1)。EphrinB 2基因在维甲酸诱导后明显上调 (P <0 .0 0 1)。结论 EphrinB2基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起正调控作用 ,EphrinB2基因与神经元的分化关系密切。

红藻氨酸致痫大鼠海马Cav-1、EphrinA2蛋白的变化及肉桂醛的干预作用

目的探讨肉桂醛对红藻氨酸(KA)致痫大鼠海马Cav-1和Ephrin A2蛋白的影响。方法 60只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、Na Cl组、癫痫组、肉桂醛低剂量(25 mg/kg)组、肉桂醛中剂量(37.5 mg/kg)组及肉桂醛高剂量(50 mg/kg)组。癫痫组和肉桂醛治疗组均采用大鼠脑右侧海马CA3区一次性注射1μg/μl KA 1μl诱发癫痫发作,Na Cl对照组注射等量Na Cl溶液,观察其行为学表现,Western印迹检测各组大鼠海马组织Cav-1和Ephrin A2蛋白的表达。结果实验性癫痫大鼠模型制作成功,肉桂醛各剂量组和癫痫组实验动物全部达到点燃标准,肉桂醛治疗组大鼠癫痫发作潜伏期延长,发作时间明显缩短,发作级别降低。海马区Cav-1和Ephrin A2蛋白的表达在正常组与Na Cl组无差异(P>0.05);与Na Cl组比较,癫痫组大鼠海马Cav-1和Ephrin A2蛋白表达均明显增加(P<0.01);肉桂醛各治疗组大鼠海马Cav-1和Ephrin A2蛋白的表达低于癫痫组(P<0.05),且与肉桂醛浓度有关。结论 KA海马区注射可获得稳定的癫痫大鼠模型,肉桂醛通过降低大鼠海马Cav-1和Ephrin A2蛋白的表达,起到抗癫痫作用。

Eph家族在哺乳动物皮肤毛囊中的研究进展

Eph家族蛋白包括Eph受体和Ephrin配体,是已知的蛋白酪氨酸激酶家族中最大的成员,而哺乳动物的毛囊是皮肤的重要附属结构,是产生被毛的组织,它的性状和组织结构决定着动物被毛的品质和产量。近年来的研究显示,Eph家族在哺乳动物皮肤毛囊的发育中具有十分重要的作用,可能参与毛囊的形成过程,对Ehp家族在哺乳动物毛囊中的表达及作用的深入研究可以指导毛用动物的选育进程,故该蛋白家族的相关领域研究日益受到重视。本文对Eph家族蛋白的分类及结构特点、Eph-Ephrin系统的信号传导和生物功能等相关领域的研究进展进行了简要综述,并对Eph家族在毛囊的形成过程及育种工作中的潜在价值和未来的研究方向进行了探讨和展望,以期为相关研究提供参考。

红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马EphA5受体及其配体ephrinA3基因表达变化的研究

目的研究在红藻氨酸(Kainic acid,KA)诱导的损伤型颞叶癫痫(Mesial temporal lobe epilepsy,MTLE)的大鼠海马中,轴突导向因子EphA5受体及其配体ephrinA3基因表达的变化,探讨EphA5/ephrinA3与癫痫后海马兴奋性神经网络形成的作用和关系。方法侧脑室内微量注射KA,建立KA诱导的成年大鼠MTLE模型,用原位杂交法检测癫痫发作1d、1周、2周、3周、4周大鼠海马内EphA5/ephrinA3 mRNA的表达,定量分析表达的动态变化。结果EphA5/ephrinA3 mRNA于癫痫发作后1周,在海马齿状回颗粒细胞层和CA_3区锥体细胞层开始增强,2周达到高峰,4周恢复接近对照组水平。结论在KA所致的癫痫持续状态(Status epilepsy,SE)中,海马神经元通过增强EphA5/ephrinA3 mRNA的表达。调控MTLE大鼠海马内苔藓纤维和突触的重建,是癫痫后海马新的稳定的异常兴奋性神经网络形成的可能机制。