独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化的影响

目的探讨独角莲醇提物对胰腺癌细胞恶性生物学行为及上皮间质转化(EMT)的影响。方法体外培养人胰腺癌细胞PANC-1,取传3代、对数生长期、生长状态良好的PANC-1细胞,随机分为Control组及独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组,独角莲醇提物500、600、700、800、900μg/mL组分别予相应浓度的独角莲醇提物干预,Control组不予独角莲醇提物干预。干预24、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力;干预48 h,采用划痕实验检测细胞迁移能力,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Western blotting法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2及EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果与Control组比较,独角莲醇提物500μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著升高,而独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组培养24、48 h细胞活力均显著降低(P均<0.05)。随着浓度增加和培养时间延长,独角莲醇提物各浓度组细胞活力显著下降,呈现浓度和时间依赖性(P均<0.05)。独角莲醇提物500μg/mL组无论是培养24 h还是培养48 h细胞活力均显著升高,在后续研究中剔除。此外,由于培养48 h独角莲醇提物各浓度组细胞活力降低更显著,故选择培养48 h进行后续研究。与Control组比较,独角莲醇提物600、700、800、900μg/mL组划痕愈合率逐渐降低,细胞凋亡率逐渐升高,凋亡相关蛋白Bcl-2表达下调、Bax表达上调,EMT相关蛋白E-cadherin表达上调、N-cadherin表达下调(P均<0.05)。结论一定浓度的独角莲醇提物不仅能抑制人胰腺癌细胞增殖和迁移并促进其凋亡,还能抑制其EMT。

天冬酰胺合成酶通过促进β-catenin核转位驱动胆管癌转移

目的:检测天冬酰胺合成酶(ASNS)在胆管癌(CCA)中的表达情况,探讨ASNS在CCA转移中的作用及其机制。方法:通过公共数据库分析各肿瘤组织中ASNS的mRNA表达;收集CCA患者病理组织(n=27),构建硫代乙酰胺诱导的大鼠自发CCA模型和左中位胆管结扎联合二乙基亚硝胺诱导的小鼠自发CCA模型,通过免疫组化、Western blot和免疫荧光法检测ASNS蛋白表达。采用CCK8、划痕和Transwell实验检测ASNS对人CCA细胞HuCCT1和HCCC-9810增殖、迁移和侵袭的影响。构建ASNS稳定敲减的CCA细胞株HuCCT1^(shNC)、HuCCT1^(shASNS)、HCCC-9810^(shNC)和HCCC-9810^(shASNS),通过肝原位种植和尾静脉注射研究ASNS对CCA细胞肝内生长和肺转移的影响。利用公共数据库富集与ASNS相关的信号通路,并用免疫荧光和Western blot验证相关分子机制。结果:无论在人或动物CCA组织中,ASNS表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。ASNS以酶活性非依赖性方式促进CCA细胞HuCCT1和HCCC-9810的增殖、迁移与侵袭。生物信息学分析显示,β-catenin在ASNS高表达的CCA组织中富集,ASNS通过促进β-catenin核转位,启动CCA细胞上皮-间充质转化(EMT)。β-catenin抑制剂XAV-939可显著抑制CCA细胞的侵袭与迁移。结论:ASNS在CCA中高表达,通过促进β-catenin核转位,介导EMT,驱动CCA转移。

高压VDMOS用外延片的外延参数设计

通过理论计算,对VDMOS器件的外延层厚度和掺杂浓度进行了优化设计,探讨用于VDMOS的外延工艺,讨论了外延层厚度和过渡区的测试方法,提出了有效外延层厚度是影响击穿电压的最关键参数,应用此参数监控外延工艺,提高了片内及批次间的击穿电压一致性。特别通过对600 V的VDMOS外延参数及其器件结果分析得出,用此参数来调整中间和边缘厚度及不同外延设备之间的参数,使同种参数下有效外延层厚度保持相当,则可以大大减少离散性和设备间变差。

AntagomiR-103协同阿霉素对TGF-β1诱导的HepG2细胞转化及生长的影响

目的:探讨antagomiR-103协同阿霉素(ADM)对TGF-β1诱导肝癌细胞(HepG2)发生上皮-间质细胞转化(EMT)及HepG2细胞存活率的影响。方法:HepG2细胞体外培养,设为control组、TGF-β1组、TGF-β1+ADM组、TGF-β1+microRNA inhibitor N.C组、TGF-β1+ADM+microRNA inhibitor N.C组、TGF-β1+antagomiR-103组、TGF-β1+ADM+antagomiR-103组及使用western-blot检测EMT标志蛋白N-Cadherin、E-Cadherin、vimentin的表达水平;设control组、TGF-β1组、antagomiR-103组、TGF-β1+antagomiR-103组,用不同浓度的ADM作用于各组细胞24 h,使用MTT法检测细胞存活率,并计算IC50。结果:与control组相比,antagomiR-103+ADM组E-Cadherin表达上调,N-Cadherin、Vimentin表达下调;细胞存活率随ADM浓度的增高而逐渐降低;在ADM浓度相同的条件下,不同药物预处理组之间进行比较,当ADM浓度为25 mg/L时,antagomiR-103+ADM组的细胞存活率明显低于其他组。结论:antagomiR-103联合ADM可抑制TGF-β1诱导发生EMT的HepG2细胞存活。

湿生扁蕾呫吨酮对UC肠纤维化-CAC演变模型大鼠TGF-β1/Smad通路及EMT因子表达的影响

目的:探讨湿生扁蕾呫吨酮对大鼠溃疡性结肠炎(UC)肠纤维化向结肠炎相关性结肠癌(CAC)演变中TGF-β1/Smad通路及上皮间质转化(EMT)因子表达的影响。方法:70只Wistar大鼠随机分为正常对照组、UC肠纤维模型对照组、CAC模型对照组、湿生扁蕾呫吨酮35、70、140 mg/kg组和沙利度胺14 mg/kg组,每组10只。除正常对照组外,其余60只大鼠灌肠给予三硝基苯磺酸(TNBS)建立UC肠纤维模型,从中选取50只注射二甲苯肼(DMH)建立CAC模型,其中40只给予相应药物干预;对大鼠疾病活动指数(DAI)、结肠长度、壁厚和结肠湿质量指数等进行基础评价;Masson染色观察结肠病理变化;Western blot和qPCR法分别检测转化生长因子β1(TGF-β1)、磷酸化smad2/3(p-Smad2/3)蛋白表达和E-钙粘蛋白(Ecad)、β-连环蛋白(Bcatenin)mRNA表达,免疫组化(IHC)检测锌指蛋白Snail表达(AOD)。结果:与正常对照组比较,CAC模型对照组结肠长度缩短,壁厚和结肠湿质量指数显著升高(P<0.01),结肠内壁可见高分化腺瘤,TGF-β1和p-Smad2/3蛋白表达显著下调(P<0.01),Ecad mRNA显著下调,Bcatenin mRNA显著上调(P<0.01),Snail蛋白表达显著升高(P<0.01);与CAC模型对照组比较,湿生扁蕾呫吨酮70、140 mg/kg组结肠长度显著增加(P<0.01),壁厚、结肠湿质量指数、DAI得分显著降低(P<0.05或P<0.01),湿生扁蕾呫吨酮35、70、140 mg/kg组胶原容积百分率显著升高(P<0.01),但结肠腺瘤分化程度降低,各给药组TGF-β1和p-smad2/3蛋白表达显著上调(P<0.01),Ecad mRNA表达上调、Bcatenin mRNA表达下调,Snail蛋白表达降低(P<0.01)。结论:湿生扁蕾呫吨酮可有效抑制UC肠纤维化向CAC演变,其机制可能与促进TGF-β1/Smad通路中TGF-β1和p-Smad2/3表达,干预和调控EMT因子Ecad、Bcatenin mRNA和Snail表达有关。