表皮生长因子受体在小鼠睾丸内免疫组织化学定位

采用生物素—抗生物素蛋白DCS体系(biotin-avidin DCS system)间接免疫荧光新技术,以176小鼠抗人A431细胞的表皮生长因子受体McAb进行表皮生长因子受体在小鼠睾丸内免疫组织化学定位的研究。在体实验结果显示,小鼠睾丸曲细精管的精原细胞和支持细胞内可见斑点状荧光,其它各级生精细胞均未见荧光。离体实验结果显示,体外培养的小鼠支持细胞内有相当强的荧光。证明精原细胞和支持细胞是表皮生长因子的靶细胞。

表皮生长因子受体(EGFR)在大鼠和小鼠睾丸中的表达和分布

为了解大鼠和小鼠事丸EGFR的表达和分布规律及其与精子发生的关系，本试验应用BALB／c小鼠抗人A431细胞的EGFR单克隆抗体及ABC免疫组织化学方法，研究了大鼠和小鼠EGFR的表达和分布情况。免疫组织化学观察的结果显示：1．出生后，大鼠和小鼠睾丸中的间质细胞即表达EGFR。此时间质细胞体积小，细胞数量也少，所以EGFR的表达是有限。2．性成熟期，表达EGFR的睾丸间质细胞增多；此外，少数精原细胞、精母细胞及管周肌样细胞也表达EGFR。进入性成熟期后，睾丸内EGFR表达量增加。3．成熟期睾丸中，部分精原细胞和精母细胞分别表达EGFR或EGF，可通过自分泌或旁分泌机制，实现其局部调节。此机制有利于精子的发生。这些结果提示：在大鼠和小鼠睾丸中，EGFR的这一与性成熟有关的表达和分布规律与EGF是相似的。EGF通过EGFR作用于生精过程，与性成熟和精子发生关系密切。

小鼠生精周期表皮生长因子受体在睾丸曲细精管的分布

目的 观察生精周期不同阶段中表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）在小鼠曲细精管的分布规律，以进一步理解ＥＧＦＲ在生精过程中的意义。 方法 通过糖原及多糖显色反应确定曲细精管的生精周期，采用链霉菌抗生物素蛋白－ 过氧化酶免疫组化技术观察ＥＧＦＲ在相应曲细精管上皮的分布。 结果 曲细精管部分支持细胞和管周细胞呈ＥＧＦＲ阳性反应。Ⅶ～Ⅸ早期部分精原细胞、细线期精母细胞的细胞核呈ＥＧＦＲ阳性反应。Ⅹ～Ⅺ期多数粗线期精母细胞、双线期精母细胞，Ⅻ期终变期精母细胞、次级精母细胞和１～４ 阶段（Ⅰ～Ⅳ期）精子细胞胞核旁的胞质内出现ＥＧＦＲ 阳性反应颗粒区。９ 阶段（Ⅸ期）和１５阶段（Ⅴ～Ⅵ期）精子细胞在顶体区出现ＥＧＦＲ阳性反应区。 结论 ＥＧＦＲ在曲细精管上皮的分布与生精周期及精子形成有密切关系。

补肾中药何首乌饮对衰老大鼠睾丸组织表皮生长因子及其受体表达的影响

目的：观察何首乌饮对衰老雄性大鼠睾丸组织表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）表达的影响。方法：选用D-半乳糖连续腹腔注射建立亚急性衰老大鼠模型，并用补肾中药何首乌饮进行干预，采用免疫组织化学和免疫印迹观察各实验组大鼠EGF、EGFR在睾丸组织表达的变化。结果：与正常对照组大鼠比较，模型组、自然恢复组大鼠睾丸组织EGF、EG—FR表达减少，而何首乌饮可以提高睾丸组织EGF、EGFR表达，与模型组和自然恢复组比较差异有统计学意义。结论：何首乌饮能够提高衰老大鼠睾丸组织EGF、EGFR表达，具有一定延缓睾丸组织衰老作用。

吉非替尼对小鼠睾丸癌I-10细胞生长抑制及诱导凋亡作用

目的:观察吉非替尼对体外培养的小鼠睾丸癌细胞(I-10)生长抑制及诱导凋亡作用。方法:将不同浓度(0、1.25、2.5、5、10、20、40μmol/L)吉非替尼作用于对数生长期的睾丸癌I-10细胞。MTT法检测吉非替尼对I-10细胞生长的抑制作用;Annexin V/PI双染法观察吉非替尼作用后I-10细胞的早期凋亡;Hoechst 33258荧光染色法观察吉非替尼作用后I-10细胞晚期凋亡;Western印迹法检测吉非替尼作用后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase 3/9的变化。结果:10、20μmol/L的吉非替尼对I-10细胞增殖有明显抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),40μmol/L的吉非替尼作用下,I-10细胞的生存率为(32.4±2.8)%,与对照组相比差异显著(P<0.01);40μmol/L吉非替尼组I-10细胞的早期和晚期凋亡率分别为(26.7±4.2)%和(59.33±10.2)%,与对照组相比差异显著(P<0.05、P<0.01);吉非替尼(10、20、40μmol/L)作用后,与对照组相比,促凋亡蛋白Bax表达分别增加了(41.9±7.1)%、(60.1±9.8)%、(69.0±11.3)%(P均<0.05)而抑凋亡蛋白Bcl-2表达分别减少了(50.3±8.9)%、(63.9±6.9)%、(88.7±13.9)%(P<0.05);剪切的caspase3表达分别增加(69.0±6.9)%、(71.5±8.1)%、(110.9±14.2)%(P<0.05);剪切的caspase9表达分别增加了(51.8±4.9)%、(54.7±6.7)%、(43.8±11.8)%(P均<0.05)。结论:吉非替尼可以增加I-10细胞的细胞毒性并诱导细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡信号通路有关。

同型半胱氨酸诱导的ERK调节作用与上皮生长因子受体的间接激活

目的探讨同型半胱氨酸(Hcy)与神经细胞上皮生长因子受体间接激活信号传导途径之间的关系。方法选取出生7 d的CD-1小鼠,进行小脑颗粒神经元原代培养7 d后,将细胞随机分为4组:生理盐水对照组、AG1478对照组、Hcy处理组、AG1478和Hcy处理组。采用Western blot半定量检测各组细胞内磷酸化ERK1/2水平,采用流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果 Hcy处理组磷酸化ERK1/2与盐水对照组和AG1478对照组相比明显增加(P<0.05),而经过AG1478预处理15 min后再加入Hcy(0.1mmol/L)的实验组则与盐水对照组和AG1478对照组相比无统计学差异。在培养的小鼠小脑颗粒神经元中加入Hcy(0.1 mmol/L)培养6 h后,可见明显的细胞凋亡;当AG1478预处理15 min后再加入Hcy(0.1 mmol/L)培养6 h时,细胞凋亡率明显高于Hcy处理组(P<0.05);生理盐水对照组和AG1478对照组则无明显细胞凋亡。结论在小鼠小脑颗粒神经元中,Hcy可以间接激活上皮生长因子信号传导途径,引起ERK1/2磷酸化,这一间接激活途径可能具有神经保护作用。

结扎输出小管前后小鼠附睾表皮生长因子受体表达的变化

目的:观察结扎输出小管(EDL)前后小鼠附睾表皮生长因子受体(EGFR)的变化,探讨睾丸网液成分是否影响附睾EGFR的表达。方法:应用免疫组化和图像分析方法观察并比较EDL前、EDL后3d、7d、14d小鼠(n=7)附睾起始部和体部的结构和EGFR表达。结果:EDL后,小鼠附睾起始部和体部EGFR表达强度降低。起始部EGFR阳性面积自EDL后第3天明显减少,第7天较第3天有所增加,第14天恢复到正常水平。小鼠附睾体部EGFR阳性面积在结扎早期无明显变化,到EDL后第14天明显增加。EDL后第3天起,小鼠附睾起始部管壁和管腔面积显著减少。EDL后第14天附睾体部管壁和管腔面积减少。结论:睾丸网液的成分通过不同作用机制影响附睾起始部和体部的结构和EGFR的表达。

表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)单链抗体亲和力检测的间接ELISA的建立及优化

目的建立检测表皮生长因子受体变体Ⅲ(EGFRvⅢ)单链抗体PD0721亲和力检测的ELISA,并且对实验条件进行优化。方法利用本课题组制备的单链抗体PD0721,建立检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA,并采用棋盘滴定法对实验条件中的抗体抗原浓度、二抗浓度、包被条件等方面进行优化,对本方法的灵敏度及精密度进行考察。结果使用PBS稀释抗原至1.25 mg/L于4℃包被12 h,加入120 ng/mL PD0721单链抗体以及1∶8000的酶标抗体为最佳检测结果。优化后的结果,在PD0721单链抗体浓度为15 ng/mL~480 ng/mL范围内回归模型拟合效果良好,最低检测限为7.5 ng/mL。组内差异系数为0.11%~0.99%,组间差异系数为0.68%~3.15%。结论建立了能准确、稳定检测PD0721单链抗体亲和力的间接ELISA。

小鼠胚胎发育过程中表皮生长因子受体的免疫荧光定位研究

用间接免疫荧光法研究了第12—19天小鼠胚胎的表皮生长因子受体(EGFR)在各种组织中的分布。结果表明,特异性荧光出现在EGFR阳性细胞的细胞膜上。第14.5天鼠胚鼻粘膜上皮首先显示很强的EGFR特异性荧光,此后荧光稍为减弱,直至第19天后消失。消化系统中,舌味觉上皮在第16天、胃粘膜上皮在第17—18天间、十二指肠上皮在第17.5—18.5天、直肠粘膜上皮在第15.5—16天和肛管粘膜上皮在第15天均显示强特异性荧光。肝细胞从第14.5天起有弱阳性反应,随胎龄增大强度缓慢地增强。此外,在胚胎发育不同时期,还看到若干组织呈现阳性反应,包括膀胱粘膜变移上皮、眼睑原基、腺垂体上皮、舌下腺腺泡细胞、附属腺上皮细胞、胰岛细胞、颌下腺腺上皮和导管上皮细胞、降主动脉内皮以及卵巢髓质部富含血管的疏松结缔组织中的成纤维细胞等。