Purɑ对癫痫大鼠行为学及海马神经元Caspase-3表达的影响

目的探讨Purɑ对匹罗卡品致痫大鼠行为及海马神经元的保护作用。方法 SPF级雄性SD大鼠,随机分成3组(每组10只):Purα过表达组(过表达组)、正常组、沉默癫痫(沉默组)组。立体定位下注射过表达及沉默的Purɑ慢病毒颗粒到大鼠海马CA1区,正常组注射同等体积的生理盐水。病毒注射两周后建立锂-匹罗卡品致痫模型,观察过表达组、癫痫模型组(正常组建模成功)、沉默组大鼠行为学改变,免疫组化染色法观察Caspase-3蛋白的表达。结果过表达组与沉默组相比,行为学改变明显,差异有统计学意义(P<0.01)。过表达组、癫痫模型组较沉默组Caspase-3细胞减少(P<0.01)。结论 Purɑ对匹罗卡品致痫大鼠模型中的海马神经元细胞凋亡有保护作用。

穴位埋线对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用研究

目的观察穴位埋线对氯化锂-匹罗卡品致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法 80只SD雄鼠随机分为空白组、模型组、西药组及埋线组,每组20只。制造癫痫模型,分别进行相应的干预,28 d后对各组大鼠进行Racine分级评定并记录各组癫痫平均发作时间;处死取材,行HE染色及免疫组化。结果癫痫发作程度及平均发作时间:模型组大鼠可出现典型地癫痫发作征象(P<0.01);与模型组比较,西药组及埋线组发作程度明显减轻,平均癫痫发作时间明显减少(P<0.05)。海马CA1区HE染色结果:模型组大鼠存在大量调亡细胞;埋线组及西药组可见少量凋亡细胞。海马Capase-3阳性细胞数及蛋白的表达:模型组大鼠海马阳性细胞数及蛋白表达明显增多 (P<0.05);与模型组比较,埋线组与西药组均明显减少(P<0.05)。以上结果中,西药组与埋线组结果无统计学差异(P>0.05)。结论癫痫可造成大鼠海马神经元损伤,穴位埋线可以减缓海马神经细胞丢失程度,减缓细胞凋亡进程,减弱癫痫发作程度,起到脑保护作用。

核因子-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层的保护性作用

目的观察核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层的保护性作用。方法将26只正常雄性SD大鼠随机分为3组:正常对照组(NS组,n=6)、毛果芸香碱诱导癫痫组(SE组,n=10)和PDTC干预组(PDTC组,n=10)。SE组一次性腹腔注射毛果芸香碱诱导大鼠癫痫发作;PDTC干预组分别于造模前24h、20min、SE发作后24 h腹腔注射PDTC 100mg.kg-1;NS组给予等量生理盐水。于造模成功后48h处死各组大鼠,采用Nissl染色和Fluoro-Jade C(FJC)染色法分别检测并比较各组大鼠梨状皮层存活神经细胞情况和退行性神经元数目。结果 Nissl染色结果显示,SE组大鼠梨状皮层大量神经细胞丢失,胞体结构完整性遭到破坏。FJG染色结果显示,SE组FJC阳性细胞数目明显增多;经PDTC干预后可明显改善梨状皮层神经损伤,FJC阳性细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PDTC对毛果芸香碱诱导癫痫大鼠梨状皮层损伤具有明显的保护性作用。

穴位埋线对癫痫大鼠认知及PI3K-AKT信号通路的影响

目的观察穴位埋线对癫痫大鼠认知及PI3K-AKT信号通路的影响。方法80只SD雄鼠随机分为空白组、模型组、西药组及埋线组,每组20只。模型制造成功后分别进行相应干预共28 d,预定时间行水迷宫实验及处死取海马行TUNNEL、Western Blot法检测PI3K-AKT信号通路相关因子PI3K及Akt的蛋白表达的情况。结果Morris水迷宫实验:模型组大鼠潜伏期明显增多,空间探索实验中模型组的穿越平台数明显少于空白组(P<0.05);西药组及埋线组大鼠的潜伏期时间较模型组均明显缩短,穿越平台数均明显增多(P<0.05)。TUNNEL染色:模型组大鼠海马TUNNEL染色阳性细胞数目明显增多(P<0.05);西药组及穴位埋线组海马TUNNEL染色阳性细胞数目均较模型组明显减少(P<0.05)。Western Blot PI3K、Akt蛋白表达:大鼠癫痫发作后模型组、埋线组和西药组的PI3K及Akt蛋白表达均快速上升,经西药及穴位埋线干预后PI3K、Akt蛋白表达均有不同程度的下降,其中以埋线组蛋白表达下降最多。结论穴位埋线可以通过激活癫痫大鼠PI3K-AKT信号通路来抗神经元细胞凋亡,减少海马神经元损伤及改善认知。

氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达circRNA的筛选及功能分析

目的:探究氯化锂-匹罗卡品诱导癫痫大鼠海马组织差异表达共价闭合、单链环状RNA(circRNA)及功能分析。方法:通过构建氯化锂-匹罗卡品癫痫大鼠模型,取癫痫大鼠及对照大鼠海马组织通过Illumina高通量测序平台进行转录组测序,并通过EdgeR包对circRNA进行差异分析、通过R语言进行GO及KEGG信号通路富集分析,通过Targetscan与miRanda软件进行circRNA与miRNA互作分析寻找circRNA核心调控靶标。结果:对照组及癫痫组大鼠海马的circRNA进行差异分析获得的262个差异表达circRNA,信号通路富集分析发现与胞蛋白修饰过程、蛋白质变性过程、树突形态调控、神经元分化调节、离子跨膜转运的调节等生物过程相关。并进一步确定了可能与circRNA存在互作的核心调控miRNA,包括miR-322-5p、miR-322-3p、miR-323-5p、miR-323-3p、miR-301a-5p、miR-301a-3p、miR-324-5p、miR-324-3p等。结论:本研究筛选了氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠与正常大鼠脑组织差异circRNA,系统地分析了其可能的作用功能机制,为癫痫诊断或治疗寻找到可靠的生物标志物。

钠氢交换体1在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织内的表达

目的 检测钠氢交换体1(NHE1)在氯化锂-匹罗卡品点燃癫痫大鼠模型海马组织中的表达。方法 选取雄性SD大鼠90只,其中45只采用腹腔注射氯化锂-匹罗卡品构建癫痫模型作为模型组,45只采用腹腔注射生理盐水组作为对照组;取模型组和对照组大鼠各36只,采用蛋白印迹(Western blot)法检测造模后第1、3、7、14、30及60天时2组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白的定量表达;取模型组和对照组大鼠各3只,采用免疫组织化学分析造模后第14天时2组大鼠海马组织NHE1的蛋白表达;取模型组和对照组大鼠各6只,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测造模后第14天2组大鼠海马组织NHE1 m RNA的的表达特点。结果造模后第1、3、7、14、30及60天时,模型组大鼠海马组织匀浆中NHE1蛋白表达较对照组增高(P<0.05),且模型组大鼠海马组织NHE1蛋白表达从第1天开始增高、第14天时达到高峰、第30天和第60天逐渐下降(P<0.05);造模后第14天时,模型组大鼠海马组织不同亚区NHE1阳性表达较对照组相应区域增强,且NHE1m RNA水平也高于对照组(P<0.05)。结论 氯化锂-匹罗卡品点燃模型癫痫大鼠海马组织中NHE1表达随时间呈动态变化,且在第14天表达最高,提示NHE1可能与癫痫的发生发展过程密切相关。