女贞子-淫羊藿药对对顺铂所致大鼠肾毒性的保护作用

目的探究女贞子-淫羊藿药对对顺铂所致大鼠肾毒性的保护作用。方法将Wistar雄性大鼠应用随机数字表法分为对照组、模型组、女贞子-淫羊藿药对组,每组10只。除对照组外,其他两组均于第4 d腹腔注射顺铂3 mg/kg;女贞子-淫羊藿药对组在给予顺铂前3 d灌胃350 mg/kg提取物,连续7 d。取材结束后,计算大鼠体重变化率和脏器指数,考察肾功指标和组织病理学变化,采用免疫组化法观察大鼠肾脏肾损伤分子1(Kidney injury molecule-1,KIM-1)和NADPH氧化酶4(Anti-NADPH oxidase 4,NOX4)阳性信号的表达和分布;Western Blot法检测KIM-1和NOX4蛋白表达的影响;试剂盒微量法检测大鼠肾组织中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸/还原型辅酶II(NADP+/NADPH)水平的变化;ELISA法检测女贞子-淫羊藿药对对大鼠肾组织中白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平的影响。结果相较于对照组,顺铂导致大鼠体重和肾组织SOD、CAT、GSH和TNF-α水平显著性降低(P<0.05),肾脏器指数、血清血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,CREA)、尿酸(uric acid,UA)、肾组织MDA、NADP+/NADPH、IL-1β、IL-6水平显著性升高(P<0.05),HE染色显微镜下显示肾小管上皮细胞坏死脱落,管腔变形空泡化,KIM-1和NOX4阳性信号和蛋白表达均明显增加(P<0.05);相比于模型组,女贞子-淫羊藿药对干预使肾组织SOD、CAT、GSH和TNF-α水平显著升高(P<0.05),肾脏器指数、血清BUN、UA和肾组织MDA、NADP+/NADPH、IL-6水平显著下降(P<0.05),肾组织HE染色显示损伤减轻且KIM-1和NOX4阳性信号和蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论女贞子-淫羊藿药对通过抑制肾组织中KIM-1的表达,激活抗氧化酶的活性和抑制炎症因子的释放,发挥了对顺铂肾毒性的保护作用。

淫羊藿药材HPLC指纹图谱的研究

目的 :采用高效液相色谱法建立淫羊藿药材的指纹图谱。方法 :用AlltechC18(4 6× 2 5 0mm ,5 μm)色谱柱 ,0 5 %冰醋酸溶液和乙腈为流动相 ,采用梯度洗脱 ,流速 1 0ml/min ,检测波长 2 72nm。结果 :淫羊藿药材指纹图谱共检出 7个峰 ,峰面积之和大于总峰面积的 90 % ,其精密度、稳定性、重复性均符合《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求 (暂行 )》中的有关规定。结论

应用体外培养法研究淫羊藿水提物对人精子膜功能损伤的保护作用

目的:观察淫羊藿水提取物对人精子膜功能氧化损伤的保护作用,探讨淫羊藿治疗弱精子症男性不育的作用机制。方法:应用体外培养的方法,经Percoll梯度离心法优选后的精子作为正常精子模型,采用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶(HX-XO)体系产生活性氧(ROS)。在有氧环境下,ROS、不同浓度的淫羊藿水提物与精子悬液共同孵育后,检测精子膜脂质过氧化损伤程度,通过精子尾部低渗膨胀试验、精子顶体完整率评估精子膜功能。透射电镜观察精子超微结构,并与已知的抗氧化剂VitC对照。结果:淫羊藿水提物小、中、大剂量(125、250、500mg/mL)在相同的条件下均可提高精子悬液超氧化物歧化酶(SOD)活力,降低丙二醛(MDA)含量,显示对ROS所致精子膜的氧化损伤均具有不同程度的干预作用,对精子膜功能具有一定的保护作用。其中250mg/mL的淫羊藿水提物与VitC(0.25mg/mL)相比无统计学差异(P>0.05),500mg/mL的淫羊藿水提物明显优于VitC(P<0.05、P<0.01)。淫羊藿水提物对精子膜结构和功能的保护作用呈剂量依赖性,大剂量(500mg/mL)时作用最显著。结论:淫羊藿水提物对人精子膜结构和功能损伤具有明显的保护作用,其作用机制与提高SOD活力,抗脂质过氧化物产生有关。

正交试验优化淫羊藿总黄酮和多糖的分步提取工艺优化

通过对淫羊藿总黄酮和多糖进行分步提取工艺优化,探寻一种提高淫羊藿综合利用率的提取工艺。利用单因素结合正交试验优化淫羊藿总黄酮的超声波辅助提取工艺,并对此工艺所得药渣进行多糖的水煮提取工艺优化。结果表明,总黄酮提取的最优工艺条件为按料液比1:10(g/mL)加入70%乙醇溶液,在60℃提取温度、150W超声功率下提取2次,每次5min,提取效率达4.72%;多糖提取的最优工艺条件为按料液比1:10加入水,在90℃提取温度提取2次,每次30min,提取效率达1.89%。优化后的淫羊藿总黄酮和多糖分步提取工艺操作简单、能耗低、提取效率高、多糖损失率低、较大限度地提高了淫羊藿的综合利用率。

淫羊藿提取物抗抑郁作用研究

目的研究淫羊藿提取物的抗抑郁作用。方法采用行为绝望模型悬尾试验(TST)和强迫游泳试验(FST)研究淫羊藿提取物对小鼠行为、脑内单胺氧化酶A(M AO-A)、单胺氧化酶B(M AO-B)活性与肝脏中M AO-A和M AO-B活性及丙二醛(M DA)水平的影响;采用利血平拮抗模型探讨淫羊藿提取物可能存在的抗抑郁作用途径。结果淫羊藿提取物(25、50、100、200 m g/kg)能显著缩短TST和FST小鼠悬尾和游泳不动时间,显著抑制TST小鼠脑和肝组织M AO-A和M AO-B活性,逆转肝组织M DA水平的升高。淫羊藿提取物对利血平所致小鼠体温的下降无明显改善作用。结论淫羊藿提取物具有一定抗抑郁作用。

心叶淫羊藿化学成分研究

目的研究心叶淫羊藿(Epimedium brevicornumMaxim.)的化学成分。方法利用硅胶柱色谱分离和纯化,通过理化方法及波谱分析鉴定其结构。结果分离得到5个化合物,波谱鉴定为:5,7,4′-三羟基-8,5′-二异戊烯基黄酮(Ⅰ)、淫羊藿素(i-caritin)(Ⅱ)、去甲淫羊藿素(desmethylicaritin)(Ⅲ)、3,7-二羟基-4′-甲氧基黄酮(Ⅳ)和3,7,3′,4′,5′-五羟基黄酮(robinetin)(Ⅴ)。结论其中化合物Ⅰ为一新化合物,化合物Ⅳ和Ⅴ首次从该植物中分离得到。

毛细管区带电泳法测定几个不同种的淫羊藿中绿原酸的含量

目的建立淫羊藿中绿原酸舍量的毛细管区带电泳（CZE）测定方法，比较不同种的淫羊藿中绿原酸含量。方法采用熔融石英毛细管柱（50μm×95cm，有效长度86．8cm）作为分离通道；以20mmol·L^-1硼砂（pH=9．12）为运行缓冲液；运行电压30kV；毛细管柱温20℃；检测波长：327nm；进样压力：5kPa，5s、外标法测定舍量。结果淫羊藿中绿原酸成分峰得到完全分离，测定精密度得到明显改善；绿原酸的线性范围为3．28—42．64mg·L^-1，r=0．9995；方法的加样回收率为100．36％，RSD为2．15％。结论本方法简便、准确，重复性好。

心叶淫羊藿化学成分研究(Ⅱ)

目的对心叶淫羊藿Epimedium brevicornum全草进行化学成分研究。方法利用硅胶柱色谱、高效液相色谱分离和纯化,通过理化方法及波谱数据分析鉴定其结构。结果分离得到8个化合物,波谱鉴定为:5-羟基-2-异戊烯基苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(Ⅰ)、4-羟基-2-异戊烯基苯酚-1-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅱ)、5,7,4′-三羟基黄酮-7-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅲ)、宝藿苷(baohuosideⅠ,Ⅳ)、宝藿苷(baohuosideⅡ,Ⅴ)、淫羊藿苷C(icariside C,Ⅵ)、淫羊藿苷(icariin,Ⅶ)和淫羊藿苷(icariside,ⅠⅦ)。结论化合物为新化合物,命名为淫羊藿酚;化合物和系首次从该植物中分离得到。

中压制备系统联合自动纯化系统制备淫羊藿中的朝藿定A、B、C对照品

目的采用中压制备系统联合自动纯化系统从淫羊藿原药材中分离制备朝藿定A、B、C 3种成分。方法淫羊藿提取物经大孔吸附树脂粗分离获得相应的组分后,利用中压制备系统联合自动纯化系统完成精制纯化。结果从4.5kg淫羊藿原药材(总黄酮含量约5%)中获得朝藿定A 2.4g、朝藿定B 14.8g和朝藿定C 1.7g,纯度均达到98%以上。结论此方法通过三步分离即可实现朝藿定A、B、C 3种成分的完全分离,具有高效快速、产品纯度高的特点,适于淫羊藿中朝藿定A、B、C系列对照品的规模制备。

中药喘可治对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用机理研究

目的研究中药喘可治(Chuankezhi,CKZ)对小鼠T淋巴细胞活化的双向调节作用的机理。方法无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,分别加入巴戟天(Bajitian,BJT)提取物(50μg·mL-1)、淫羊藿(Yinyanghuo,YYH)提取物(100μg·mL-1)和喘可治(50μg·mL-1BJT+100μg·mL-1YYH),预孵育4h后,加入刺激剂,12h后,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69的表达水平。结果与对照组相比,巴戟天提取物处理组中CD3+T淋巴细胞CD69的表达水平明显升高;与刺激组相比,巴戟天提取物可以协同刺激CD69的表达。淫羊藿提取物对静息状态下的CD+3T淋巴细胞CD69的表达作用不明显,但可以抑制刺激剂引起的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。与前两者相比,喘可治则呈现明显的双向免疫调节作用,即上调静息状态的CD+3T淋巴细胞CD69的表达,下调刺激状态的CD3+T淋巴细胞CD69的表达。结论喘可治对T淋巴细胞活化的双向调节作用是巴戟天和淫羊藿共同作用的结果,其中巴戟天具有促进免疫应答的作用,而淫羊藿具有抑制免疫应答的作用。

药用植物淫羊藿与富血小板血浆协同对软骨细胞的增殖作用

观察淫羊藿和富血小板血浆(PRP)对SD大鼠软骨细胞增殖作用的影响,探讨两者对软骨细胞的协同作用。取3周龄SD大鼠的膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,分别采用MTT法、流式细胞术对细胞增殖作用进行检测。结果表明:(1)PRP对软骨细胞增殖有显著的促进作用(P<0.01);(2)淫羊藿对软骨细胞有一定的增殖作用,但不显著;(3)淫羊藿联合PRP对软骨细胞的增殖作用显著下降,效果低于淫羊藿或PRP组(P<0.01)。淫羊藿联合PRP对软骨细胞有显著抑制作用(P<0.01),推断淫羊藿某些成分抑制了PRP中生长因子的活性,从而减弱了PRP对软骨细胞的作用,该推断有待进一步研究确认。

工业制备高效液相色谱法制备淫羊藿中的黄酮系列对照品

淫羊藿甙和朝藿定A、B、C是淫羊藿中重要的活性成分,本研究应用工业制备高效液相色谱从淫羊藿粗提物中分离制备了这4个成分。淫羊藿粗提物经大孔吸附树脂粗分离获得相应的组分后,利用工业制备高效液相色谱完成精制纯化。采用自装填Chromatorex C18制备柱(220 mm×77 mm,10μm),乙腈-水(26∶74或30∶70,v/v)为流动相进行洗脱,在35 min内,实现了这4种成分的基线分离及规模制备。从300 g粗提物(总黄酮含量约20%)中获得淫羊藿甙33 g、朝藿定C4.6 g、朝藿定B3.7 g和朝藿定A0.6 g,产品纯度均达到98%以上。此方法通过两步分离即可实现这4种成分的完全分离,具有快速高效、产品纯度高的特点,适于淫羊藿中淫羊藿甙、朝藿定A、B、C系列对照品的规模制备。

三种药用淫羊藿的地理分布与资源调查

淫羊藿属(Epimedium L.)植物为传统的中草药,也是新优地被观赏植物,具有悠久的药用历史和巨大的开发潜力。对3种重要的药用淫羊藿(朝鲜淫羊藿E.koreanum、心叶淫羊藿E.brevicornum和箭叶淫羊藿E.sagittatum)的地理分布、形态特征和资源现状进行了调查。调查发现,朝鲜淫羊藿分布于中国东北部,主要沿长白山脉分布,长期的过度采收使野生资源遭到严重破坏,保护工作迫在眉睫;心叶淫羊藿分布于西北各省以及山西、河南等省,野生资源丰富,但目前开发利用较少;箭叶淫羊藿广泛分布于华东、华南各省区,但野生资源蕴藏量并不丰富,且不同分布区形态变异较大,物种鉴定尚存诸多疑问。为保证野生资源的可持续利用,未来应控制朝鲜淫羊藿的过度采收,加强心叶淫羊藿的合理开发利用,不同地区的箭叶淫羊藿形态差异较大,质量不稳定,建议对其进行系统的质量评估之后择优开发利用。

金城山淫羊藿生长适宜环境因子

[目的]为淫羊藿资源的合理开发利用和人工栽培提供理论依据。[方法]采用Shannon-Wiener指数生态位宽度计算公式，对嘉陵江流域金城山森林公园淫羊藿在不同环境因子范围上的生态位宽度进行测定，探讨自然植被群落中金城山淫羊藿生长的适宜环境因子。[结果]从生态位的角度来看，金城山淫羊藿的适宜海拔为574～623m，适宜土壤含水量为14％，适宜土壤pH值为5、73～5．83，适宜土壤有机质含量为2.28～2．48g/kg，适宜土壤深度为16．0～19.7，适宜光照强度为796．6～1015．0lx。[结论]该研究对开发淫羊藿中药资源和加强淫羊藿野生资源保护有一定的指导意义。

淫羊藿的自由基清除与抗氧化活性

目的研究淫羊藿不同部位的体外抗自由基与抗氧化活性。方法自由基清除活性采用2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基清除(DPPH)实验法;抗氧化活性采用β-胡萝卜素漂白体系实验法。结果乙酸乙酯部位自由基清除活性与抗氧化活性较好。结论淫羊藿乙酸乙酯措取部位含有较多抗氧化成分,可为日后淫羊藿抗氧化提取物在药品领域的开发提供依据。

超微粉碎技术对黄芪多糖、淫羊藿多糖溶出的影响

用蒽酮-硫酸法测定了黄芪、淫羊藿普通粉和超微粉对其多糖溶出量的影响。结果表明,在相同的条件下,超微粉中黄芪多糖、淫羊藿多糖提取量较普通粗粉分别提高了117.13%和315.15%。

北虫草新菌株选育及栽培技术研究

采用细胞组织分离培养技术,选育高产优质北虫草新菌株,并对新菌株进行了培养基配方筛选和栽培技术研究。结果表明:可用于生产的新菌株菌丝见光之后转色快,由白色变浅橘黄色至深橘黄色,菌丝粗壮、挺立,分生孢子呈念珠状;栽培配方以小麦或大米为原料,添加营养液产量高,生物转化率达71%以上;在培养基中添加淫羊藿等中草药能提高北虫草的营养成份,研究结果为进一步开发功能性北虫草提供理论依据和实用技术。

更辰胶囊中主要药味的薄层色谱鉴别研究

目的:建立更辰胶囊的薄层色谱鉴别方法,为制定其质量控制标准提供实验依据。方法:采用薄层色谱法鉴别处方中的主要药味人参和淫羊藿。结果:处方中的人参和淫羊藿的薄层色谱具有鉴别特征。结论:薄层色谱鉴别方法简便可靠,专属性、重复性好,可作为更辰胶囊的质量控制指标。

心叶淫羊藿的化学成分研究

目的对心叶淫羊藿的化学成分进行研究。方法采用硅胶柱层析及重结晶、SephadexLH-20等技术分离、纯化化合物,应用波谱方法鉴定结构。结果共分离鉴定13个化合物,它们的结构确定为黄酮苷类7个:淫羊藿苷(Icariin),淫羊藿苷Ⅰ(IcarisideⅠ),淫羊藿苷Ⅱ(IcarisideⅡ),淫羊藿定A(EpimedinA),淫羊藿定B(EpimedinB),淫羊藿定C(EpimedinC),Icaritin-3-O-D-rhamnoside;(口山)酮类(Xanthone)2个:1,3,5,8-四羟基(口山)酮,1-羟基-3,4,5,-三甲氧基(口山)酮;其他醇类4个:对甲氧基苯酚(p-methoxyphenol),二十三烷酸(behenicacid),β-谷甾醇(β—Sitosterol),胡萝卜苷(daucosterol)。结论化合物Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ为首次从心叶淫羊藿中分离得到。

靶向核受体RXRα的淫羊藿抗炎活性成分的快速精准鉴定

目的建立从中药中高效精准鉴定靶向核受体RXRα的天然活性成分的方法。方法通过受体-配体识别结合的原理,将中药淫羊藿抗炎活性馏分与核受体RXRα蛋白共同孵育,捕获配体小分子,利用高效液相色谱仪、核磁和质谱识别并鉴定配体化合物,生物学技术手段进行化合物活性验证。结果从淫羊藿抗炎馏分中快速筛选出核受体蛋白RXRα的小分子配体宝藿苷Ⅰ,生物学活性测试显示该配体化合物能够有效抑制细胞炎症反应,且具有RXRα依赖性。结论受体-配体识别法能够有效鉴定淫羊藿抗炎馏分中靶向核受体RXRα的活性小分子,该法为天然产物和中药活性成分的精准鉴定提供新的思路,为新型RXRα天然小分子调节剂的快速筛选起到促进作用。