基因表达谱揭示淫羊藿总黄酮对皮质酮大鼠肾上腺皮质再生的调控机制

目的观察淫羊藿总黄酮(epi medium flavonoids,EF)对皮质酮大鼠肾上腺皮质再生的调控作用。方法采用碘化丙啶染色流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡率;用末端转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记(TUNEL)法原位显示凋亡细胞;用基因芯片技术检测mRNA表达。结果模型组与正常对照组比较,肾上腺细胞G0/G1期阻滞,凋亡率明显升高(P<0·05);EF干预后G0/G1期比例下降,G2/M期比例显著上升(P<0·01),凋亡率下降(P<0·05)。TUNEL法原位细胞凋亡检测显示正常对照组、模型组、治疗组凋亡阳性细胞数分别为(4·67±1·53)、(70·67±9·29)、(18·67±7·64)个(n=3)。皮质酮主要抑制肾上腺的基因表达,其中7个促进细胞周期的基因如V-ras、V-jun均下调。EF治疗后,肾上腺基因表达以上调为主,其中有6个促进细胞周期基因、1个抗凋亡基因,与肾上腺皮质细胞再生密切相关的上游分子IGF-Ⅱ及其受体IGFR,FGF7及其受体FGFR基因,7个参与类固醇生物合成的基因均上调。结论EF通过促进肾上腺皮质细胞增殖、抑制其细胞凋亡、促进类固醇生物合成,从而促进肾上腺皮质再生是EF在激素撤除过程中发挥保护肾上腺皮质功能的机制。

仝小林运用淫羊藿经验

淫羊藿功在补肾阳,强筋骨,祛风湿。仝小林教授通过多年来对中药"量效关系"的研究,对用药剂量与中药配伍有独到的体会,同一药物在大、中、小剂量时功效特点有异。具体到淫羊藿,大剂量可用于治疗癌症,特别是肝癌;小中剂量时,配伍附子、人参治疗抑郁症,配伍巴戟天、红参治疗肾性贫血,配伍蜈蚣粉治疗阳痿,配伍山萸肉治疗尿频等;小剂量淫羊藿配伍西洋参、制何首乌代茶饮可延缓衰老。

淫羊藿总黄酮和薯蓣皂苷元联合用药对自然围绝经期大鼠影响的实验研究

目的:观察中药有效组分淫羊藿总黄酮、薯蓣皂苷元对围绝经期大鼠内分泌激素水平、卵巢病变等影响。方法:自然衰老围绝经期雌性SD大鼠30只,随机分为3组,各10只,分别是中药低、高剂量组,老年模型组,另设6月龄左右雌性SD大鼠10只为青年对照组。中药组给予中药复方有效成分8周,观察阴道涂片变化,检测大鼠血清雌二醇(E_2)、促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素(LH)值,免疫蛋白印迹法检测卵巢凋亡蛋白半胱天冬酶(Caspase-3)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白含量变化。结果:与老年模型组比较,青年对照组阴道涂片中有核上皮细胞百分率、E_2水平明显较高,LH、FSH、Caspase-3、VEGF的水平明显较低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);中药高剂量组阴道涂片中有核上皮细胞百分率、E_2、VEGF水平明显升高,Caspase-3的水平明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01);中药低剂量组阴道涂片中有核上皮细胞百分率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:淫羊藿总黄酮、薯蓣皂苷元合用能升高血清E_2和卵巢VEGF水平,降低卵巢Caspase-3的表达,从而延缓大鼠围绝经期的进程。

淫羊藿常压提取分离总黄酮含量的测定

在淫羊藿常压提取淫羊藿总黄酮过程中,利用高效液相色谱法对分离提取的淫羊藿总黄酮含量进行了测定.根据液相色谱图可知,乙酸乙酯萃取所得产品杂峰少,产品纯.

巫山淫羊藿愈伤组织细胞的悬浮培养条件优化的初步研究

通过研究接种量、激素配比、糖浓度、培养基种类对巫山淫羊藿悬浮培养细胞生长及其愈伤组织黄酮类含量的影响,建立了巫山淫羊藿细胞悬浮培养的技术体系。结果表明:巫山淫羊藿愈伤组织细胞悬浮培养在B5基本培养基中并附加1.0mg·L-12,4-D和0.2mg·L-1BA,蔗糖浓度40g·L-1,接种量每30mL为鲜重2g时,黄酮类化合物含量最高。说明用松脆的巫山淫羊藿胚性愈伤组织可容易建立理想的悬浮细胞培养体系。

淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔干眼泪腺上皮细胞凋亡模型Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达的影响

目的观察淫羊藿总黄酮含药血浆对雄兔干眼泪腺上皮细胞Caspase-3、Caspase-8 mRNA表达的影响。方法取61只健康无眼疾1月龄雄性新西兰大耳白兔,随机取1只雄兔泪腺,培养泪腺上皮细胞,取第3代泪腺上皮细胞用于实验。60只雄兔随机分成淫羊藿总黄酮10.0倍组、5. 0倍组、2.5倍组和空白对照组,通过MTT法确定后续干预细胞的含药血浆的浓度。将所培养第3代泪腺上皮细胞随机分为淫羊藿总黄酮治疗组、含雄激素培养对照组和空白组(DMEM/F12低糖培养基中分别加入含淫羊藿总黄酮血浆、10^(-6)mol·L^(-1)丙酸睾酮和空白血浆)。干预48 h后各组均加入H_2O_2继续培养60 min诱导细胞凋亡,采用RT-PCR法检测各组细胞凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-8 mRNA的表达。结果 MTT实验显示应选取淫羊藿总黄酮2. 5倍组作为干预细胞含药血浆的浓度。淫羊藿总黄酮10. 0倍组、5. 0倍组、2. 5倍组和空白对照组兔血浆中朝藿定A浓度分别为120. 5μg·L^(-1)、65. 7μg·L^(-1)、21. 9μg·L^(-1)、0μg·L^(-1),淫羊藿苷浓度分别为130. 8μg·L^(-1)、45. 3μg·L^(-1)、18. 9μg·L^(-1)、0μg·L^(-1)。淫羊藿总黄酮治疗组、含雄激素培养对照组、空白组的Caspase-3 mRNA相对含量分别为0. 35±0. 07、0. 68±0. 18、1. 00±0. 19,Caspase-8 mRNA相对含量分别为0. 27±0. 21、0. 72±0. 10、1. 00±0. 15。空白组Caspase-3、Caspase-8mRNA的表达均高于含雄激素培养组,空白组和含雄激素培养组均高于淫羊藿总黄酮治疗组,差异均有统计学意义(均为P <0. 05)。结论淫羊藿总黄酮能够下调雄兔干眼泪腺上皮细胞Capase-3、Capase-8 mRNA的表达,这可能是其治疗干眼的关键机制之一。

巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性研究

目的考察巫山淫羊藿悬浮培养细胞的生长特性,为巫山淫羊藿资源利用提供参考。方法选用悬浮培养所获得的均匀悬浮培养细胞为研究对象,在光照条件下进行悬浮培养,每隔3 d取样,测定相关的生理生化指标。结果巫山淫羊藿悬浮细胞的生长曲线呈"S"型,培养基中蔗糖、磷酸盐、硝酸盐、铵盐量均呈急剧下降趋势,最后变化趋于平缓,细胞合成黄酮最佳光照时间为每天12 h,黄酮合成量为27.854 82 mg/L。结论巫山淫羊藿细胞生长特性的研究为其大规模悬浮培养生产天然活性成分奠定了基础。