miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响

目的探讨miR-30c-5p对人绒毛滋养层细胞线粒体自噬、间充质转化及PEG10水平影响。方法人绒毛滋养层细胞HTR-8/SVneo分为空白组(HTR-8/SVneo细胞正常培养)、低氧组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养)、miR-30c-5p mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p mimics)、NC-mimics组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-mimics)、miR-30c-5p inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染miR-30c-5p inhibitor)、NC-inhibitor组(HTR-8/SVneo细胞低氧培养转染NC-inhibitor)。qRT-PCR检测各组细胞miR-30c-5p表达;Transwell小室检测细胞侵袭数目;划痕试剂盒检测细胞划痕愈合率;相关试剂盒检测ROS水平;免疫印记检测PEG10、Parkin、PINK1蛋白水平。结果空白组、低氧组、miR-30c-5p mimics组、NC-mimics组、miR-30c-5p inhibitor组及NC-inhibitor组的miR-30c-5p表达分别为1.00±0.00、1.00±0.00、1.61±0.15、1.03±0.13、0.75±0.08及0.96±0.10,差异有统计学意义(F=45.750,P<0.05);与空白组相比,低氧组HTR-8/SVneo细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05);低氧组与NC-mimics组、NC-inhibitor组比较上述指标,差异均无统计学意义(P>0.05);与低氧组相比,miR-30c-5p mimics组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1降低,ROS升高,差异均有统计学意义(P<0.05),miR-30c-5p inhibitor组细胞侵袭数目、划痕愈合率、PEG10、Parkin、PINK1升高,ROS降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论抑制miR-30c-5p可加快低氧状态下的人绒毛滋养层细胞侵袭及迁移,并通过促进线粒体自噬降低ROS表达,机制与抑制PEG10水平相关。

鼻咽癌组织中miR-107、FoxM1的表达及与病理特征和上皮间质转化的关系

目的研究鼻咽癌(NPC)组织中微小RNA(miR)-107、叉头盒蛋白M1(FoxM1)的表达,分析二者表达与上皮间质转化(EMT)基因表达的相关性及与患者临床病理特征的关系。方法选取79例NPC患者,RT-qPCR法检测NPC组织及癌旁组织中miR-107、FoxM1 mRNA、EMT通路基因N钙黏素(N-cad)、E钙黏素(E-cad)及锌指转录因子(Snail)mRNA表达。采用t检验分析两者表达与患者临床病理特征的关系,Pearson线性相关分析miR-107与FoxM1 mRNA表达的相关性及miR-107、FoxM1 mRNA表达与EMT通路基因表达的相关性。结果NPC组织中FoxM1、N-cad、Snail mRNA的相对表达量均高于癌旁组织,而miR-107、E-cad mRNA的相对表达量均低于癌旁组织(P均<0.05)。NPC组织中miR-107、FoxM1表达与TNM分期有关(P均<0.05),而与性别、年龄、吸烟史、组织分化程度及是否伴有淋巴结转移无关(P均>0.05)。miR-107和FoxM1的表达呈负相关关系(r=-0.603,P<0.05)。NPC组织中miR-107表达与E-cad mRNA表达呈正相关关系(r=0.627,P<0.05),与N-cad、Snail mRNA表达均呈负相关关系(r分别为-0.724、-0.621,P均<0.05)。FoxM1 mRNA表达与E-cad mRNA表达呈负相关关系(r=-0.537,P<0.05),与N-cad、Snail mRNA表达均呈正相关关系(r分别为0.634、0.736,P均<0.05)。结论NPC组织中miR-107表达降低,而FoxM1表达增高,miR-107及FoxM1可能通过促进EMT通路基因表达,促进NPC进展,有可能成为新的NPC肿瘤标志物。

柚皮素基于TGF-β2介导对白内障晶状体病理性上皮间充质转化的作用研究

目的探讨白内障的发病机制是否与人晶状体上皮细胞系B3(HLE-B3)的病理性上皮间充质转化(EMT)有关,并评价柚皮素基于转化生长因子-β2(TGF-β2)介导对白内障晶状体病理性EMT的作用及机制。方法常规培养HLE-B3细胞,筛选TGF-β2和柚皮素的最佳浓度后,TGF-β2处理HLE-B3细胞诱导EMT,建立白内障体外模型。随机将细胞分为对照组(CG)、TGF-β2组(TGF-β2)、柚皮素组(Nar)、柚皮素+TGF-β2组(Nar+TGF-β2)培养48 h,采用跨孔迁移实验检测细胞侵袭能力,伤口愈合实验测定HLE-B3的迁移能力,细胞计数法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)法测定细胞增殖能力。Western Blot和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测EMT相关标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)和胞质紧密粘连蛋白1(ZO-1)的表达水平。结果(1)细胞活性与增殖:与CG组比较,Nar组和Nar+TGF-β2组细胞活性较低(t_(Nar)=16.404,t_(Nar)+TGF-β2=16.119,均P=0.000),EdU阳性细胞数较少(t_(Nar)=13.918,t_(Nar)+TGF-β2=13.473,均P=0.000),差异有统计学意义。(2)细胞侵袭和迁移:与CG组比较,TGF-β2组细胞侵袭个数较多(t=26.198,P=0.000),细胞迁移率较高(t=11.703,P=0.000);而Nar组细胞侵袭个数较少(t=23.975,P=0.000),细胞迁移率较低(t=7.198,P=0.000),差异均有统计学意义。(3)细胞凋亡:与CG组比较,TGF-β2组细胞凋亡率较高(t=5.806,P=0.000),Nar组细胞凋亡率较低(t=3.838,P=0.005),差异均有统计学意义。(4)EMT相关蛋白和mRNA:与CG组比较,TGF-β2组HLE-B3细胞α-SMA蛋白表达较高(t=4.847,P=0.001)、mRNA表达较高(t=8.684,P=0.000),E-cadherin和ZO-1蛋白表达较低(t_(E-cadherin)=5.584,t_(ZO-1)=5.251,均P=0.001)、mRNA表达较低(t_(E-cadherin)=5.379,P=0.001;t_(ZO-1)=2.365,P=0.045);Nar组α-SMA蛋白表达较低(t=5.144,P=0.001)、mRNA表达较低(t=3.961,P=0.004),E-cadherin和ZO-1蛋白表达较高(t_(E-cadherin)=6.175,t_(ZO-1)=8.383,均P=0.000)、mRNA表达较高(t_(E-cadherin)=5.379,t_(ZO-1)=5.125,均P=0.001),差异均有统计学意义。结论柚皮素能抑制TGF-β2诱导的HLE-B3细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡能力及EMT。

裂果薯皂苷Ⅰ抑制人肺癌细胞生长、迁移和侵袭的机制初探

目的:研究裂果薯皂苷Ⅰ(SSPHⅠ)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的生长、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法:利用Autodock软件将SSPHⅠ和关键靶标间质—上皮转化因子(Met)蛋白进行分子对接。采用集落形成法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞克隆形成能力和细胞的生长曲线,伤口愈合实验和Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力。用FITC鬼笔环肽荧光染色法检测细胞的肌动蛋白细胞骨架重组,免疫蛋白印迹(western blotting)法检测Met蛋白磷酸化水平。结果:SSPHⅠ明显抑制A549和PC9细胞的克隆能力、细胞活性、迁移和侵袭能力(P<0.05);同时,SSPHⅠ显著抑制F-肌动蛋白细胞骨架形成。分子对接模拟显示SSPHⅠ和Met具有良好的结合活性。western blotting结果显示,SSPHⅠ明显降低了A549细胞的Met蛋白的磷酸化水平。结论:SSPHⅠ可明显抑制NSCLC细胞生长、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HGF/Met信号通路有关。

细胞分裂周期蛋白42通过内皮-间充质转化参与动脉型肺动脉高压小鼠右心室纤维化

目的:探讨细胞分裂周期蛋白42(Cdc42)是否通过内皮-间充质转化(EndMT)参与动脉型肺动脉高压(PAH)小鼠右心纤维化。方法:健康雄性C57BL/6小鼠(5~8周龄)18只,随机分成常氧对照(NC)组、PAH模型[SU5416(血管内皮生长因子受体2抑制剂)+低氧,SuHx]组和SuHx+ML141(Cdc42抑制剂)组,每组6只。所有存活小鼠在4周后用异氟烷麻醉,行心脏超声检查及右心室收缩压(RVSP)监测,之后处死小鼠。用HE和Masson染色观察小鼠右室心肌细胞改变及纤维化程度。使用磁珠分选小鼠心脏内皮细胞并用不同条件处理。通过Western blot检测小鼠心脏组织Cdc42表达水平及内皮细胞Cdc42和EndMT相关蛋白[波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板内皮细胞黏附分子1(PECAM-1/CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和锌指蛋白Snail]表达水平,同时用倒置显微镜观察各组内皮细胞形态。结果:体内实验结果显示,与NC组相比,SuHx组小鼠心脏组织Cdc42表达水平显著升高(P<0.05);预防给予ML141(8 mg/kg)可降低小鼠RVSP,增大三尖瓣环平面收缩期位移(TAPSE),减轻心脏(尤其是血管旁)纤维化(P<0.01)。体外实验结果显示,SuHx组和低氧72 h组小鼠心脏内皮细胞Cdc42表达水平显著升高,EndMT增强,EndMT相关蛋白vimentin和α-SMA的表达显著增加,CD31和VE-cadherin的表达显著降低(P<0.05);预防给予ML141(10μmol/L)后可缓解低氧72 h诱导的EndMT。结论:Cdc42可能通过上调EndMT参与PAH小鼠右心纤维化。

姜黄素逆转HGF诱导PC9细胞对吉非替尼的耐药

目的:探索姜黄素逆转肝细胞生长因子(HGF)诱导的肺癌细胞吉非替尼耐药性的分子机制。方法:利用MTT实验、划痕修复实验和Western blot观察HGF、吉非替尼和姜黄素对PC9细胞药物敏感性、迁移能力、上皮间质转化和相关信号通路的影响.结果:HGF可显著降低PC9细胞对吉非替尼的敏感性,而姜黄素可显著逆转HGF诱导的PC9细胞对吉非替尼的耐药性。HGF还可诱导PC9细胞发生迁移及上皮间质转化,激活c-Met/AKT/mTOR通路,单独吉非替尼不能逆转HGF诱导的迁移、上皮间质转化及c-Met/AKT/mTOR通路活化,而吉非替尼联合姜黄素可抑制HGF诱导的c-Met/AKT/mTOR通路活化并逆转PC9细胞的迁移和上皮间质转化。结论:姜黄素抑制HGF诱导的PC9细胞吉非替尼耐药性可能是通过逆转上皮间质转化和抑制c-Met/AKT/mTOR通路实现的。

内皮间质转分化在动脉粥样硬化中的研究进展

内皮间质转分化在机体发育过程中发挥重要作用,也参与包括动脉粥样硬化在内的多种心血管疾病的发生发展。氧化应激、炎症、振荡剪切应力等促动脉粥样硬化因素可以导致内皮间质转分化的发生。内皮间质转分化可以导致斑块的钙化、纤维帽变薄,增加斑块的不稳定性。内皮间质转分化可能成为防治动脉粥样硬化的又一关键环节。该文将对内皮间质转分化在动脉粥样硬化方面的研究进行总结。

基于GEO数据库对结肠癌BMI1基因筛选及其对人结肠癌细胞增殖及侵袭迁移机制研究

目的利用生物信息学对结肠癌差异表达基因进行分析,探索结肠癌治疗的新靶点,并通过RNA干扰了解其对结肠癌细胞增殖及侵袭迁移机制研究。方法从GEO数据库下载结肠癌基因芯片数据库,利用GEO2R筛选差异表达基因,并通过RT⁃qPCR和Western Blot检测RNA干扰对靶基因表达变化。CCK⁃8测定LOVO细胞的增殖和活力,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移力,流式细胞术检测细胞周期变化。结果GEO2R筛选差异表达基因BMI1,RNA干扰靶基因后细胞增殖及侵袭迁移能力下降,细胞周期停滞于G1期,S期明显缩短,其下游P16ink4a基因表达增高,E-钙粘蛋白(E⁃cadherin)的表达增加,而波形蛋白(Vimentin)的表达减少。结论利用生物信息学分析可找出结肠癌差异表达靶基因BMI1,RNA干扰BMI1后可能通过P16ink4a表达上调和EMT下调抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移,为结肠癌的基因治疗提供新的思路。

雷帕霉素对人肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的抑制作用

目的探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的人肾小管上皮细胞发生上皮肌成纤维细胞转化(Epi-thelial-Myofibroblast Transition,EMT)的作用,以及该作用与上皮细胞中锌指蛋白(Snail)基因水平变化的关系。方法体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为阴性对照组、转化生长因子β-1(TGF-β1)(1μg/L)阳性对照组和TGF-β1+RAPA组。TGF-β1+RAPA组不同浓度的雷帕霉素(0.1μg/L,1μg/L,10μg/L,100μg/L)与TGF-β1(1μg/L)共同作用,各组作用时间均为48h。用间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法分别检测细胞平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)表达,同时用RT-PCR方法检测细胞Snail mRNA水平的变化。再选取最大作用浓度的雷帕霉素作用不同时间(12h、24h、48h、72h),用RT-PCR、Western Blot方法检测α-SMA表达水平变化。结果间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法检测均表明,TGF-β1阳性作用组较阴性对照组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著增强(P<0.05),而E-cadherin表达则几乎消失,Snail mRNA表达水平显著增强(P<0.05)。与阳性对照组相比,雷帕霉素(10μg/L,100μg/L)与TGF-β1共同作用组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05),而E-cadherin表达则有部分恢复,显著高于阳性对照组(P<0.05),而Snail mRNA表达水平比阳性对照组显著降低(P<0.05)。雷帕霉素以浓度依赖方式抑制TGF-β1诱导的HKC细胞Snail mRNA表达。结论应用体外培养的肾小管上皮细胞研究表明,雷帕霉素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用。此作用可能与该药诱导的Snail表达下调有关。

RNAi介导IGF-1R基因沉默对非小细胞肺癌PC-9/ZD细胞株EMT的影响

目的探讨RNA干扰(RNAi)介导胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞PC-9/ZD发生上皮—间质转化(EMT)的影响。方法构建靶向IGF-1R基因的RNAi重组慢病毒,感染NSCLC表皮生长因子受体—酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)获得性耐药细胞PC-9/ZD;实时荧光定量PCR法检测IGF-1R表达抑制效应及IGF-1R基因沉默后EMT相关分子的mRNA表达变化,Transwell实验检测细胞侵袭转移能力变化。结果成功构建靶向IGF-1R基因的RNAi重组慢病毒,滴度为1×106TU/μL,对PC-9/ZD细胞IGF-1R基因的mRNA抑制效率为71.4%。IGF-1R基因沉默后,PC-9/ZD细胞形态呈现间质向上皮化转变,上皮标志物E-cadherin的mRNA表达量升高(P<0.05),间质标志物Vimentin的mRNA表达量降低(P<0.05),且侵袭转移能力减弱(P<0.05)。结论靶向IGF-1R基因沉默可逆转PC-9/ZD细胞EMT。

丙戊酸通过GSK3β/β-catenin信号轴抑制胃癌细胞的增殖和迁移

目的探讨丙戊酸(valproic acid,VPA)对胃癌细胞增殖、迁移的影响及可能涉及的分子机制。方法以0、2、4、6和8 mmol·L^-1浓度的VPA分别处理人胃癌细胞AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-82324、48、72 h后,MTT法检测细胞的活性;软琼脂克隆实验检测VPA对胃癌细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell迁移实验检测VPA对胃癌细胞迁移能力的影响;应用STITCH、STRING和Enrichr数据库预测VPA可能影响的信号通路;免疫印迹实验检测上皮间质转化和GSK3β/β-catenin信号通路等标志物的表达情况;免疫荧光实验检测上皮间质化相关标志物的表达情况。结果与对照组相比,VPA可显著抑制AGS、SGC-7901、MGC-803和BGC-823细胞的增殖,且呈浓度和时间依赖性;可抑制AGS和SGC-7901细胞的迁移能力及EMT进程(上皮标志物E-cadherin表达上调,间质标志物Vimentin、Snail表达下调);可下调p-GSK3βser9和β-catenin的蛋白表达水平。结论VPA可有效抑制胃癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与GSK3β/β-catenin信号轴的抑制及EMT进程的逆转有关。

上皮间质转化在肝细胞癌侵袭转移中的研究进展

上皮间质转化(EMT)现象是指上皮细胞通过特定程序转化获得具有间质细胞表型的过程。EMT在胚胎发生、器官纤维化和肿瘤转移过程中发挥重要作用,在原发性肝细胞癌的转移中存在这一现象。该文重点介绍Notch通路、Wnt(wingless-type)/β联蛋白通路、转化生长因子β/Smad通路和Hedgehog通路,以及转录因子Snail、Twist、ZEB-1和同源盒基因B7的组成及其在原发性肝细胞癌的EMT过程中起到的重要调控作用。EMT分子机制的研究是一个有前景的课题,可为原发性肝细胞癌的治疗提供新的靶点。

健脾化瘀法含药血清对肝癌细胞Smad3蛋白及EMT的影响

目的:探讨健脾化瘀法含药血清对肝癌细胞Smad3蛋白磷酸化及上皮间质转移标志蛋白E-cadherin/Ncadherin表达水平及侵袭转移能力的影响。方法:分别以不同浓度(10%和20%)健脾化瘀法中药含药血清及10%小牛血清对照组培养肝癌细胞MHCC97-H,实时定量PCR检测细胞Smad3和Snail mRNA水平,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力。结果:实时定量PCR结果显示高浓度组(20%含药血清组)、低浓度组(10%含药血清组)和对照组(10%小牛血清对照)Smad3的mRNA水平分别为0.87±0.24、0.97±0.28和1.18±0.34(P>0.05);高浓度组Snail的mRNA水平低于对照组(0.49±0.05 vs.1.10±0.21,P=0.034)。与对照组相比,高浓度含药血清组48h的p-Smad3、Snail和N-cadherin明显降低,E-cadherin明显升高(P<0.05)。与对照组相比,低浓度含药血清组48h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P<0.05);而Smad3、p-Smad3及snail的结果与对照组无明显差异(P>0.05)。划痕法结果显示,与对照组比较,20%含药血清组及10%含药血清组肝癌细胞的划痕愈合较慢,差异均有统计学意义(P<0.05)。Transwell显示与对照组相比,20%含药血清组及10%含药血清组MHCC97-H细胞的迁移受抑制,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:健脾化瘀法中药能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与抑制Smad3蛋白磷酸化及上皮间质转化有关。

小鼠肝硬化—肝癌上皮间质转化的研究

目的通过建立动物模型,观察肝硬化及肝癌上皮间质转化过程。方法建立小鼠肝硬化、肝癌动物模型,进行HE染色和免疫组化染色。结果存活小鼠肝硬化诱导成功率100%,病死率30%。存活小鼠肝癌诱导成功率100%,病死率40%。在肝硬化和肝癌动物模型中,E-钙黏蛋白阳性表达率为46.7%和7.1%,β3整联蛋白阳性表达率为40.0%和7.1%,波形蛋白阳性表达率为13.6%和40.0%,纤维连接蛋白阳性表达率为20.0%和57.1%。结论小鼠肝硬化和肝癌组织模型中,E-钙黏蛋白、β3整联蛋白的低表达和波形蛋白、纤维连接蛋白的高表达与肝硬化向肝癌的上皮间质转化过程有关,为临床检测的重要参照指标。

吉非替尼通过增加Foxo3a活性抑制肺纤维化小鼠上皮-间质转分化

目的:研究吉非替尼对肺纤维化小鼠转录因子叉头框蛋白O3a(Foxo3a)活性、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平及相关通路的影响,探讨吉非替尼抑制肺上皮-间质转分化的可能机制。方法:将30只SPF级雌性昆明小鼠随机分为3组:对照组(生理盐水气管内雾化)、博来霉素组(博来霉素3 mg/kg溶于100μL生理盐水气管内雾化)和吉非替尼处理组(博来霉素气管内雾化后,每天吉非替尼20 mg/kg溶于100μL生理盐水灌胃)。实验第14天收集样本,将小鼠肺组织置于10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片后行HE与Masson染色;RT-PCR法检测Foxo3a和α-SMA mRNA表达水平;Western blotting法检测表皮生长因子受体(EGFR)、Akt、Foxo3a和α-SMA蛋白表达水平。结果:吉非替尼处理组小鼠肺组织病理损伤较博来霉素组明显减轻,胶原沉积明显减少,炎症损伤评分及纤维化评分明显下降(均P<0.01),Foxo3a mRNA表达水平明显升高(P<0.05),α-SMA mRNA表达水平明显下降(P<0.05),总Foxo3a蛋白表达增加,但Foxo3a磷酸化水平显著下降(P<0.01),胞核Foxo3a蛋白明显增加(P<0.05);同时,EGFR和Akt磷酸化水平也显著下降(P<0.01,P<0.05),上皮-间质转分化标志蛋白α-SMA表达水平明显降低(P<0.05)。结论:吉非替尼抑制博来霉素诱导的肺纤维化,其机制可能与抑制EGFR/Akt通路活化、增强转录因子Foxo3a活性、从而抑制上皮-间质转分化密切相关。

淫羊藿次苷Ⅱ对舌鳞状细胞癌上皮⁃间质转化的抑制作用

目的观察淫羊藿次苷Ⅱ(icariinⅡ,ICSⅡ)对舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)上皮⁃间质转化(epithelial⁃mesenchymal transition,EMT)的抑制作用,及其通过Notch1/PTEN/FAK通路的调控机制。方法取对数期Tca⁃8113细胞,随机分为空白组,ICSⅡ低、中、高剂量组。测定各组增殖抑制率,迁移、侵袭能力,Notch1、PTEN、FAK、p⁃FAK蛋白相对表达量。结果ICSⅡ低、中、高剂量组24、48、72 h增殖抑制率均呈上升趋势(P<0.05);空白组,ICSⅡ低、中、高剂量组迁移率呈降低趋势(P<0.05),每个视野穿膜细胞数呈减少趋势(P<0.05),Notch1蛋白相对表达量及p⁃FAK/FAK呈降低趋势(P<0.05),PTEN蛋白相对表达量呈升高趋势(P<0.05)。结论ICSⅡ可抑制TSCC EMT,且呈剂量依赖性,推测与该药物可下调Notch1表达、上调PTEN表达、抑制FAK磷酸化有关。

苦参碱对TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞成纤维细胞生长因子2的调控作用

目的研究苦参碱对成纤维细胞生长因子2(FGF-2)在人腹膜间皮细胞(HPMCs)上皮间充质转分化(EMT)中的调控作用。方法将HPMCs分为三组(对照组、TGF-β1刺激组及0.8 mg/mL苦参碱+TGF-β1处理组);TGF-β1刺激组用含5 ng/mL TGF-β1的完全培养基,处理组用含0.8 mg/mL苦参碱和5 ng/mL TGF-β1的完全培养基,对照组用等量完全培养基。干预处理48 h后,采用转录组测序分析各组HPMCs细胞FGF-2的mRNA表达情况,最后采用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR分别检测各组HPMCs细胞FGF-2蛋白和mRNA的表达情况。结果 5 ng/mL TGF-β1刺激HPMCs细胞,发现其能上调FGF-2的蛋白和mRNA的表达水平(其中蛋白上调2.00倍,mRNA上调6.18倍),而苦参碱干预后能显著下调TGF-β1刺激后FGF-2的蛋白和mRNA的表达水平(其中蛋白下调1.77倍,mRNA下调4.30倍)。结论苦参碱通过对成纤维细胞生长因子2发挥抑制作用,进而阻止成纤维细胞在腹膜聚集,最终防止腹膜纤维化的发生。

Tspan8过表达与肝癌上皮间变及转移的关系

目的探讨四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌转移、上皮间变的关系及其机制。方法利用前期构建的TSPAN8shRNAs慢病毒质粒并筛选稳转细胞株MHCC97．H．LV．GFP．shRNA．Tspan8，沉默Tspan8基因表达。WST法检测细胞增殖变化；蛋白印迹法检测基质金属蛋白酶12表达改变；应用Transwell检测细胞侵袭能力变化；5．0×10^6肝癌细胞肝内注射行体内实验，检测肿瘤生长及肺转移情况。在层黏蛋白-5（1aminin-5）作用于肝癌细胞株MHCC97-H—Mock和MHCC97-H—shRNA-Tspan8两天后，观察2组细胞形态差异，是否发生EMT改变并检测上皮及间质分子标志物。进一步应用免疫共沉淀和荧光分析Tspan8可否与整合素“形成复合物。结果体内外实验显示，与Tspan8-RNA干扰的MHCC-97H细胞（MHCC97-H-shRNA—Tspan8）比较，Tspan8高表达的肝癌细胞MHCC-97H和对照组MHCC97-H—Mock（LV-GFP）增殖侵袭能力、成瘤生长及肝癌肺转移等方面明显增强（P〈0．05）。MHCC97-H—shRNA-Tspan8细胞中MMP-12表达抑制明显，细胞侵袭能力明显下降。进一步的研究显示：在层黏蛋白_5的诱导下四跨膜蛋白Tspan8可与拍结合并诱导高表达肝癌细胞MHCC97一H发生上皮间质转化，而在RNA干扰组肝癌细胞中（MHCC97-H—shRNA-Tspan8）未见发生；免疫共沉淀显示Tspan8可与面结合形成复合物，提示Tspan8偶联饯6后形成复合物并可促进肝癌侵袭转移。结论四跨膜蛋白Tspan8表达与肝癌侵袭转移正相关，并可能与整合素α6结合而诱导肝癌细胞发生上皮间质转化有关，是肝癌复发转移及预后干预的潜在靶点和分子靶向治疗指标。

巨噬细胞分泌的可溶性因子诱导HepG2细胞发生上皮间质化

目的研究THP-1来源的巨噬细胞对肝癌细胞HepG2的上皮间质化作用（epithelial—mesenchymaltransition，EMT），探讨肿瘤相关性巨噬细胞（tumor-associatedmacrophages，TAMs）在肝癌进展中的作用及机制。方法将THP-1来源的巨噬细胞与HepG2细胞共培养模拟肝癌相关微环境，观察共培养后HepG2细胞的形态变化。利用免疫荧光（immunofluorescence，IF）及Western-blot检测HepG2细胞与巨噬细胞共培养后E-cadherin表达的变化（E-cadherin表达缺失是EMT的标志）。通过FlowCytomix检测分析THP-1细胞及THP-1来源的巨噬细胞培养上清中部分细胞因子表达量的差异。结果HepG2细胞与THP-1来源的巨噬细胞共培养后，其细胞形态发生明显变化，由原来上皮细胞形态转化成为一种梭形的间质细胞形态。IF及Western-blot均显示HepG2细胞共培养后Ecadherin表达明显下调。THP-1细胞激活并分化为巨噬细胞后，白细胞介素IL-8及IL-1β表达量分别增加了40倍和20倍，P〈0．01；肿瘤坏死因子TNF-a表达量增加了8倍，P=0．056。结论巨噬细胞可诱导HepG2细胞发生EMT，该作用可能与其分泌的细胞因子IL-8及IL-1β和TNF-a增高有关。

肿瘤坏死因子-α诱导膀胱癌细胞上皮间质转化

目的观察肿瘤坏死因子-α（TNF-α）诱导人膀胱癌细胞的上皮间质转化（EMT）及分子机制。方法5μg／LTNF-α处理BLX细胞，凝胶迁移实验（EMSA）观察NF-κB活性，Westernblot和免疫荧光检测波形蛋白（Vimentin）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达及定位，体外侵袭转移实验观察细胞侵袭转移能力。逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测EMT相关转录因子的表达。结果TNF-α激活核转录因子-κB（NF-κB），促使细胞由多边形向纺锤形转换，E-cadherin表达下调（0．37±0．08比0．75±0．15，P〈0．05）且细胞膜定位消失，Vimentin表达上调（0．46±0．12比0．00±0．00，P〈0．05），细胞转移和侵袭能力提高（182．00±17．58比134．00±9．00；119．00±7．21比85．33±10．11，P〈0．05）。TNF-α诱导Twist和Slug转录因子表达上调（0．91±0．03比0．36±0．07；0．78±0．11比0．22±0．10，P〈0．01）。结论TNF-α激活NF-κB诱导膀胱癌细胞发生EMT，可能在膀胱癌侵袭转移中发挥作用。