槐耳多糖通过抑制AKT/GSK3β/Snail信号通路抑制胰腺癌细胞增殖和上皮间质转化

目的:探讨槐耳多糖(HP)调节丝苏氨酸蛋白激酶B(AKT)/糖原合酶激酶-3β(GSK3β)/锌指转录因子(Snail)信号通路对胰腺癌(PC)细胞增殖、凋亡和上皮间质转化(EMT)的影响。方法:将人胰腺癌SW1990细胞分为:Control组(正常培养)、HP低浓度组(1μg/mL)、HP中浓度组(5μg/mL)、HP高浓度组(10μg/mL)、激活剂组(10μg/mL HP+10μmol/L AKT/GSK3β/Snail通路激活剂SC79);四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;黏附实验检测细胞黏附能力;划痕实验检测细胞迁移;Transwell小室检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞抗凋亡因子B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及AKT/GSK3β/Snail通路蛋白的表达。结果:与control组比较,HP低、中、高浓度组SW1990细胞OD490值、黏附细胞数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、Vimentin、N-cadherin、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β、Snail蛋白表达水平降低,细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平升高(P<0.05);与HP高浓度组比较,激活剂组SW1990细胞OD490值、黏附细胞数、划痕愈合率、侵袭数、PCNA、Bcl-2、MMP-2、Vimentin、N-cadherin、p-AKT/AKT、p-GSK3β/GSK3β、Snail蛋白表达水平升高,细胞凋亡率及Bax、E-cadherin蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:HP可能通过抑制AKT/GSK3β/Snail信号通路,抑制SW1990细胞增殖、迁移、侵袭和EMT,促进凋亡。

氧化苦参碱抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮-间充质转化及其机制研究

目的:探讨氧化苦参碱(OM)对高糖诱导的大鼠肾小管上皮-间充质转化(EMT)的抑制作用及其可能机制。方法:体外培养大鼠近端肾小管上皮NRK52E细胞,随机分为:对照组、高糖组、高糖+OM不同浓度组和高糖+0.50 g/L OM动态观察组。采用real-time PCR和Western blotting方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果:(1)与对照组相比,高糖组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达水平均进行性增高,Smad7蛋白表达进行性降低,E-cadherin mRNA和蛋白表达进行性降低,呈时间依赖性(P<0.05),而Smad7 mRNA表达进行性增高(P<0.05);(2)与高糖组相比,高糖+OM不同浓度组随OM剂量增加,TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达均逐渐降低,Smad7蛋白表达水平逐渐增高,Ecadherin mRNA和蛋白表达水平逐渐增高,且呈剂量依赖性(P<0.05),而Smad7 mRNA表达无明显差异;(3)与高糖组相比,高糖+0.50 g/L OM动态观察组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白表达持续降低,Smad7蛋白表达持续增高,E-cadherin mRNA和蛋白表达持续增高(P<0.05),而Smad7 mRNA表达无明显差异。结论:OM可抑制高糖诱导的NRK52E细胞发生EMT,其机制可能与OM下调TGF-β1表达及上调Smad7蛋白表达,进而抑制TGF-β1/Smads信号通路的致纤维化效应有关。

马兜铃酸诱导大鼠肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积及垂盆草提取物的作用

目的:研究垂盆草(SSB)提取物对马兜铃酸(AA)诱导的肾小管上皮细胞表型转化和胶原累积的作用,并初步探讨可能的分子机制。方法:将体外培养的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)分为:(1)溶剂对照组:未加入SSB和AA;(2)AA损伤组:只加AA,浓度为1~100 mg/L;(3)SSB提取物干预组:在加入10 mg/L AA基础上,同时加入SSB提取物(10~2 000 mg/L)。细胞培养24 h后,酶联免疫吸附试验检测转化生长因子β1(TGF-β1)含量;细胞免疫荧光染色检测肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮细胞标志物E-cadherin和基质成分III型胶原的表达;实时荧光定量PCR检测α-SMA、E-cadherin、骨形成蛋白7(BMP-7)和I型胶原mRNA的表达。结果:AA可诱导NRK-52E细胞呈现纤维化样改变;1 mg/L和10 mg/L AA不仅可增加基质成分I型和III型胶原的表达量,同时也可促进α-SMA表达,抑制E-cadherin的表达。用SSB提取物干预后,AA所致的纤维化改变明显减轻;SSB提取物下调了α-SMA、I型和III型胶原的表达,并且促进E-cadherin和BMP-7的表达。此外,SSB提取物也抑制TGF-β1的分泌,并呈浓度依赖性。结论:应用SSB提取物干预可明显降低AA所致的肾纤维化效应,可能的机制为SSB提取物降低TGF-β1的表达,抑制小管上皮细胞的表型转化,进而抑制胶原的累积。

miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭、EMT的影响及其分子机制

目的探讨miR-200c对人绒毛膜滋养细胞迁移、侵袭及上皮—间质转化(EMT)的影响,并探讨其可能的分子机制。方法将人绒毛膜滋养细胞HTR-8/SVneo分为过表达组、沉默组及对照组,应用脂质体转染法分别转染miR-200c模拟物(miR-200c mimics)、miR-200c抑制物(miR-200c inhibitor)、miRNA阴性对照(miR-NC)。采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞miR-200c表达,细胞划痕实验和Transwell侵袭实验观察各组细胞迁移和侵袭能力(分别以细胞迁移率和侵袭细胞数表示),Westernblotting法检测各组细胞中EMT相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin、Fibro⁃nectin)和Notch1蛋白相对表达量。双荧光素酶报告基因实验验证miR-200c与Notch1的靶向关系。结果过表达组、对照组和沉默组细胞miR-200c相对表达量依次降低,细胞迁移率和侵袭细胞数依次升高,组间两两比较P均<0.05。过表达组、对照组、沉默组E-cadherin蛋白相对表达量依次降低,N-cadherin、Fibronectin和Notch1蛋白相对表达量依次升高,组间两两比较P均<0.05。转染Notch1-WT(野生型)和miR-200c mimics的细胞相对荧光素酶活性为0.31±0.09,转染Notch1-WT和miR-NC的细胞为0.99±0.03(P<0.05);转染Notch1-MUT(突变型)和miR-200c mimics的细胞相对荧光素酶活性为1.00±0.05,转染Notch1-MUT和miR-NC的细胞为1.02±0.04(P>0.05)。结论miR-200c能够抑制人绒毛膜滋养细胞的迁移、侵袭及EMT,其机制可能与靶向调控Notch1有关。