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马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析 被引量:13
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作者 王柳 于力 +3 位作者 张绍杰 仇华吉 王玫 童光志 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期1-6,共6页
从马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒株感染的驴胎皮肤(FDD)细胞中提取前病毒DNA,以其为模板,通过PCR扩增出EIAV弱毒株的LTR,并将其克隆到载体质粒pUC19中。经酶切分析,PCR及Southern杂交筛选、... 从马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒株感染的驴胎皮肤(FDD)细胞中提取前病毒DNA,以其为模板,通过PCR扩增出EIAV弱毒株的LTR,并将其克隆到载体质粒pUC19中。经酶切分析,PCR及Southern杂交筛选、鉴定,获得含有EIAV弱毒株LTR片段的重组质粒pLTR。对该质粒的序列分析发现,在中国EIAV弱毒株LTR的U3区含有4个与细胞转录因子结合的位点,其中有3个PU.1位点和1个AP-1位点,U3区还存在1个TATATAA启动子序列;R区长为81bp,含有1个帽位点GG和1个Poly(A)信号序列AATAAA;在帽位点下游是1个病毒Tat蛋白结合位点,即TAR位点;U5区长为39bp。中国EIAV弱毒株LTR序列与国外发表的其他毒株序列相比,在LTR的一些调控部位有变异发生,中国EIAV弱毒株与美国EIAV原型株(Wyoming株)LTR区核苷酸序列有18.72%的差异。 展开更多
关键词 马传染性贫血 克隆 病毒 弱毒株 序列分析
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马传染性贫血强/弱毒嵌合病毒的体外构建 被引量:3
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作者 涂亚斌 王柳 +3 位作者 仇华吉 温建新 谷守林 童光志 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期179-181,共3页
Equine infectious anemia virus (EIAV) causes equine infectious anemia and persistent infection as well as repeated high-titer viremia in horses.The long-terminal repeat (LTR) of EIAV proviral genome contains an eukary... Equine infectious anemia virus (EIAV) causes equine infectious anemia and persistent infection as well as repeated high-titer viremia in horses.The long-terminal repeat (LTR) of EIAV proviral genome contains an eukaryotic promoter which plays an important regulation role on transcription and replication of the virus.In the study,the LTRs of an infectious molecular clone derived from EIAV donkey leukocyte-attenuated vaccine virus (DLA) were substituted with those of EIAV L strain,a virulent EIAV from which DLA strain was derived,resulting in a chimeric plasmid pOK-LTR DLA/L.The purified pOK-LTR DLA/L was used to transfect leukocyte cultures from EIAV-negative donkey.Reverse transcriptase (RT) activity was detectable by the 7th passage in cell cultures of the transfection products.The cytopathogenic effects typical for EIAV infection were developed since the 8th passage of cell cultures,and virions with cone-shaped core could be observed under electron microscope.It proved that the constructed chimeric pOK-LTR DLA/L is infective and it may be used in future for exploring of molecular mechanism of pathogenesis and immunity of EIAV. 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 嵌合病毒 长末端重复序列 分子克隆
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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株致弱过程中不同代次病毒LTR的进化分析 被引量:1
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作者 王雪峰 杨彬 +6 位作者 韩秀娥 林跃智 姜成刚 吕晓玲 赵利平 周建华 王凤龙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期915-919,共5页
为揭示马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗的减毒机理,本研究对EIAV弱毒疫苗株在体外驴白细胞传代过程中不同代次毒株的长末端重复序列(LTR)进行扩增和分析。结果显示:随着病毒在体外传代次数的增加,各病毒株遗传多样性逐渐增加,并与致弱... 为揭示马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗的减毒机理,本研究对EIAV弱毒疫苗株在体外驴白细胞传代过程中不同代次毒株的长末端重复序列(LTR)进行扩增和分析。结果显示:随着病毒在体外传代次数的增加,各病毒株遗传多样性逐渐增加,并与致弱前亲本株EIAVDV117的遗传距离逐渐增大;EIAV在体外传代过程中LTR的变异主要集中在U3区和R区的转录起始位点,但随着传代次数的增加,在负调节区丢失了GATA结合位点,并在增强子区出现了E-box基序。此外,传代初期低代次病毒株与后期的高代次弱毒株在负调节区的AP-1结合位点和转录起始位点以及TAR的起始位点存在明显差异。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 长末端重复序列 进化分析
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Tat蛋白对马传染性贫血病毒长末端重复序列启动子活性的影响
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作者 刘益民 左咏梅 +4 位作者 周艳君 王晓钧 童光志 相文华 沈荣显 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期301-304,共4页
将来源于马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株第25代和第118代病毒的LTR,白细胞弱毒(EIAV-DLA)的LTR,以及TAR起始碱基和/或poly(A)附加位点发生突变的驴胎皮肤细胞弱毒(EIAV-FDD)的LTR分别克隆到pCAT3-Basic质粒中,获得了6个重组质粒pCAT-25、... 将来源于马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株第25代和第118代病毒的LTR,白细胞弱毒(EIAV-DLA)的LTR,以及TAR起始碱基和/或poly(A)附加位点发生突变的驴胎皮肤细胞弱毒(EIAV-FDD)的LTR分别克隆到pCAT3-Basic质粒中,获得了6个重组质粒pCAT-25、pCAT-118、pCAT-FD、pCAT-G219A、pCAT-A294C和pCAT-G219A-A294C。同时用pcDNA3.1(+)构建了EIAV反式激活蛋白(Tat)基因的重组真核表达质粒pcTM7-D。将pcTM7-D分别与含有不同LTR的重组质粒共转染驴胎皮肤细胞,考察Tat对LTR启动子活性的增强作用。结果表明,在皮肤细胞中Tat蛋白可以特异性增强来源于皮肤细胞弱毒疫苗株LTR的启动子活性,而对白细胞源的LTR无明显增强作用;TAR起始位点和poly(A)的单碱基突变和联合突变对Tat的反式激活作用并无明显影响。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 长末端重复序列 反式激活蛋白 启动子
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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株及其亲本驴强毒株长末端重复序列(LTR)的启动子活性比较
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作者 周家喜 孔宪刚 +6 位作者 张宝山 刘胜旺 刘丽玲 孙成群 刘相东 刘永刚 杨威 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期342-347,共6页
将马传染性贫血病毒驴强毒(donkey adaptedequineinfectiousanemiavirus,D AEIAV)、马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒(donkeyleukocyteattenuatedEIAV,DLAEIAV)及EIAVWyoming株的全长长末端重复序列(LTR)分别克隆到报告基因载体pCAT Basicv... 将马传染性贫血病毒驴强毒(donkey adaptedequineinfectiousanemiavirus,D AEIAV)、马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒(donkeyleukocyteattenuatedEIAV,DLAEIAV)及EIAVWyoming株的全长长末端重复序列(LTR)分别克隆到报告基因载体pCAT Basicvector中,获得重组质粒p D A LTR CAT、p DLA LTR CAT及p Wyo LTR CAT。将这3个重组质粒分别体外转染EIAV阴性健康驴的白细胞,比较这三者LTR启动报告基因CAT表达的基础活性和在tat pcDNA3共转染条件下激活活性的差异。结果表明:在驴白细胞中,DLAEIAVLTR启动CAT表达的活性略高于D AEIAVLTR;而与EIAVWyoming株LTR比较,DLAEIAV与D AEIAV二者LTR启动CAT表达的活性都较低。在有共转染重组表达质粒tat pcDNA3条件下,D AEIAV、DLAEIAV及EIAVWyoming株LTR起始CAT表达的活性都得到提高,分别提高了4 8倍、6 0倍和3 2倍。上述结果提示,LTR可能是体现DLAEIAV驴白细胞适应性的因素,不一定是影响其毒力减弱的根本原因。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 驴白细胞弱毒疫苗株 亲本驴强毒株 长末端重复序列 启动子活性比较
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马传染性贫血病毒非编码区LTR嵌合克隆的生物学特性
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作者 魏丽丽 王晓钧 +7 位作者 耿庆华 童骁 粱华 沈韬 张晓燕 相文华 邵一鸣 沈荣显 《中国病毒学》 CSCD 2006年第3期244-248,共5页
将已构建的马传染性贫血病毒LTR强弱毒嵌合克隆衍生毒vLGFD9-12体内接种健康试验马,在150d观察期内,各组试验动物体症均未见异常。血液学分析发现,vLGFD9-12嵌合克隆衍生病毒与亲本弱毒疫苗株的白细胞与血红蛋白含量总体上没有明显的规... 将已构建的马传染性贫血病毒LTR强弱毒嵌合克隆衍生毒vLGFD9-12体内接种健康试验马,在150d观察期内,各组试验动物体症均未见异常。血液学分析发现,vLGFD9-12嵌合克隆衍生病毒与亲本弱毒疫苗株的白细胞与血红蛋白含量总体上没有明显的规律性的变化。在动物外周血中均检测到一定的病毒RNA拷贝数,但拷贝数较低。二者在诱导EIAV特异性淋巴细胞增殖功能和特异性细胞毒性杀伤反应中,亦具有相似的变化趋势和效应。本项研究为进一步确定我国马传贫弱毒疫苗株毒力致弱及免疫保护的分子机制奠定了重要的分子生物学基础。 展开更多
关键词 马传染性贫血病毒 衍生病毒 LTR
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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒株LTR启动子功能的研究 被引量:1
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作者 王柳 杨志彪 +3 位作者 仇华吉 张绍杰 孟松树 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第6期1-3,共3页
为了证明我国马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒株的长末端重复序列 (LTR)是否能够启动基因的表达 ,我们将该LTR克隆于含CAT基因的载体中 ,获得重组质粒pCAT_LTR ,用pCAT_LTR分别转染驴胎皮肤细胞 (FDD)、胶质母细胞瘤(TJ_90 5 )细... 为了证明我国马传染性贫血病毒 (EIAV)驴白细胞弱毒株的长末端重复序列 (LTR)是否能够启动基因的表达 ,我们将该LTR克隆于含CAT基因的载体中 ,获得重组质粒pCAT_LTR ,用pCAT_LTR分别转染驴胎皮肤细胞 (FDD)、胶质母细胞瘤(TJ_90 5 )细胞、驴白细胞及接种EIAV弱毒的FDD及驴白细胞 ,结果以EIAV弱毒的LTR为启动子 ,CAT在这几种细胞中均获得了不同程度的表达 ,证实了我国EIAV弱毒株的LTR在FDD、TJ_90 5及驴白细胞中确实具有一定的启动子功能 ,并能被反式激活表达 。 展开更多
关键词 传染性贫血病毒 弱毒株 LTR 启动子功能
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