多重交叉置换扩增联合羟基萘酚蓝检测脓肿分枝杆菌方法的建立

目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方法进行初步评价。结果建立的MAB-MCDA-HNB检测限为100 fg的DNA模板。31株细菌菌株中,只有脓肿分枝杆菌检测结果为阳性,其它细菌包括结核分枝杆菌,卡介苗,马赛分枝杆菌、鸟分枝杆菌等非结核分枝杆菌和金黄色葡萄球菌等均为阴性。脓肿分枝杆菌模拟痰标本检测灵敏度为1.7×10~3 CFU/mL(每次反应17 CFU)。结论MAB-MCDA-HNB方法能够快速准确诊断脓肿分枝杆菌的感染。

广东地区脓肿分枝杆菌复合群对克拉霉素的耐药机制研究

目的探讨脓肿分枝杆菌复合群(MABC)对克拉霉素的耐药机制,为MABC肺病诊治提供依据。方法对广州市胸科医院冻存的191株龟-脓肿分枝杆菌复合群进行hsp65、rpoB、ITS多靶位基因菌种鉴定,确定为MABC的菌株进行克拉霉素最低抑菌浓度(MIC)药敏,延长培养时间至14 d,记录3、7、10、14 d的MIC值,观察MABC对克拉霉素诱导耐药情况,并对耐药相关基因rrl和erm(41)进行测序,研究克拉霉素耐药表型和基因型的关系。结果 191株龟-脓肿分枝杆菌复合群经多靶位基因法鉴定出2株龟分枝杆菌,189株MABC,其中111株脓肿分枝杆菌,78株马赛分枝杆菌。111株脓肿分枝杆菌中,克拉霉素获得性耐药1株,获得性耐药率0.9%;克拉霉素诱导耐药78株,诱导耐药率70.3%;总耐药株79株,总耐药率71.2%;78株马赛分枝杆菌无诱导耐药,克拉霉素获得性耐药5株,获得性耐药率6.4%;总耐药株5株,总耐药率为6.4%;脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌总耐药率和获得性耐药率差异均有统计学意义(P<0.05)。6株克拉霉素获得性耐药菌株中,rrl突变的菌株5株,突变率为83.3%;所有的脓肿分枝杆菌erm(41)序列完整,所有的马赛分枝杆菌erm(41)序列有短缺;111株脓肿分枝杆菌,T28序列型菌株84株、C28序列型菌株27株。78株马赛分枝杆菌皆为T28序列型。结论 MABC为我国较为常见的非结核分枝杆菌,耐药率高,可用药物有限,治疗困难,主要菌种为脓肿分枝杆菌,根本的原因在于克拉霉素诱导耐药,准确的菌种鉴定、可靠的药敏试验对指导MABC肺病的临床治疗有重要意义。