耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌红霉素耐药erm基因检测

目的 探讨耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌 (MRCNS)erm基因的存在状况。 方法 应用兼并引物扩增MRCNS菌的erm基因。 结果 5 5株MRCNS菌中有 4 5株检出erm基因。 结论 MRCNS菌获得erm基因的红霉素耐药率为 81.8%。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性及erm基因的检测与分析

目的了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药性及erm基因存在状况。方法采用ATB Staph药敏试验板微量肉汤法对50株金黄色葡萄球菌(SAU)进行15种抗菌药物敏感性测定,采用聚合酶链反应(PCR)技术检测MRSA的erm基因。结果检出的42株MRSA对万古霉素、替考拉宁、夫西地酸和奎奴普汀/达福普汀均100.0%敏感;对青霉素、苯唑西林、庆大霉素、四环素、环丙沙星和左氧氟沙星100.0%耐药;42株MRSA中erm基因阳性的35株,阳性率为83.3%。结论临床分离的MRSA多药耐药性已十分严重;MRSA对红霉素的耐药机制主要是由erm基因编码甲基化酶,使药物作用靶位改变所致。

肺炎链球菌分离株红霉素耐药erm、mef基因检测研究

目的 :了解引起苏州地区儿科临床肺炎链球菌 (Sp)分离株红霉素耐药的状况。方法 :设计、优化与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因 (erm )和主动外排转运体基因 (mef)PCR检测体系 ,对 2 0 0 2年 9月～ 2 0 0 3年 4月呼吸道感染患儿痰标本中分离到的 2 3株Sp菌 (红霉素敏感表型 3例、中敏 3例、耐药 17例 )进行检测。结果 :红霉素耐药、中敏、敏感Sp菌分别检出耐药基因 94.1% (16 17)、10 0 %、3 3 .3 % (1 3 )。ermB基因PCR检出率 43 .5% (10 2 3 ) ;ermA ermB基因通用兼并引物PCR检出率 69.6% (16 2 3 ) ;mefA基因PCR检出率 2 6.1% (6 2 3 ) ;erm或 和mef基因检出率 87.0 % (2 0 2 3 )。携带erm基因的耐药表型率 93 .3 % (14 15) ,其中单独ermA基因为 10 0 % (4 4) ;ermB +ermA B基因为 87.5% (14 16)。单独携带mef基因的耐药表型率 50 % (2 4) ,而erm或 和mef基因为 80 % (16 2 0 )。结论 :本地区Sp菌株中存在ermA、ermB和mef基因 ;三者单独或共同表达均可致Sp菌红霉素耐药 ;

红霉素抗性基因ermE在链霉菌中的表达及抗性测定

红霉素抗性基因ermE编码一种甲基化酶,可以对50S核糖体亚基上的23S rRNA进行甲基化修饰．甲基化作用可能引起核糖体构型变化,阻碍红霉素与50S核糖体亚基的结合,从而使宿主获得抗性．研究中将来自红色糖多孢茵(Saccharopolyspora erythraea)的ermE基因克隆到链霉菌高拷贝表达载体pUWL201和pIJ6021上组成型启动子ermEp和硫链丝菌素诱导型启动子PtipA的下游,构建出了链霉菌表达质粒pKIM4,pKIM7和pKIM8．将pKIM4,pKIM7和pKIM8分别转入S．lividans链霉菌中,每种转化子都能表现出明显的红霉素抗性,并且ermE基因在TK64/pKIM8转化子中还实现了高效表达．

杀白细胞毒素基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的红霉素耐药基因的检测

目的了解杀白细胞毒素(PVL)基因阳性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MR-SA)的红霉素耐药基因(ermA/B/C)检出情况。方法收集2007年1月—2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株,采用聚合酶链反应对45株MRSA的ermA/B/C和PVL基因进行检测,分析PVL基因阳性MRSA的ermA/B/C检出率。结果45株MRSA中有33株检出ermA/B/C,检出率为73%(33/45);有12株检出PVL基因,检出率为27%(12/45);12株PVL基因阳性MRSA中有9株检出ermA/B/C,检出率为75%(9/12);33株PVL基因阴性MRSA中仅24株检出ermA/B/C,检出率为73%(24/33)。结论PVL基因阳性与PVL基因阴性MRSA的ermA/B/C检出率基本一致,MRSA的重要致病基因——PVL的产生可能与红霉素耐药基因ermA/B/C无关。

食源性单核细胞增生李斯特菌四环素、红霉素耐药基因研究

研究了食源性单核细胞增生李斯特菌四环素、红霉素耐药基因的分布状况及和耐药表型的关系。采用微量肉汤稀释法对2005~2007年河北省疾病预防控制中心分离到的食源性单核细胞增生李斯特菌株进行四环素、红霉素药敏实验;应用PCR方法对实验菌株进行四环素耐药基因tet（M）、tet（S）、tet（L）、tet（K）、tet（B）、及与tet（M）基因关系密切的转座子Tn916、红霉素核糖体甲基化酶基因ermB、ermC、及与ermB基因关系密切的转座子Tn917检测,对阳性样本序列进行鉴定分析;应用血清学分型、脉冲场凝胶电泳（PFGE）、及脂肪酸聚类分析方法分析四环素耐药菌株之间的相关性,确定基因型和多态性。结果表明,91株单核细胞增生李斯特菌四环素敏感77株、耐药14株;红霉素敏感89株、耐药2株,其中包含1株菌同时交叉耐药四环素和红霉素;14株四环素耐药株中含tet（M）基因的13株,在13株tet（M）基因阳性菌中,tet（M）位于Tn916转座子上的9株;1株同时交叉耐药四环素、红霉素菌同时携带tet（S）、ermB基因;ermC基因、转座子Tn917均为阴性;四环素、红霉素敏感株中未检测到上述任何耐药基因。14株四环素耐药菌株血清型分布以1/2a型为主（n=12）,部分菌株PFGE、脂肪酸分型完全一致。食源性单核细胞增生李斯特菌获得tet（M）基因是耐四环素的主要机制之一,具有水平传播耐药基因能力的接合型转座子Tn916与该菌四环素耐药播散有直接关系;ermB基因介导的核糖体靶位点改变存在食源性单核细胞增生李斯特菌红霉素耐药株中;PFGE基因型结合脂肪酸聚类分析能够用来分析菌株之间的相关性。

葡萄球菌对克林霉素诱导耐药表型及基因型检测研究

目的了解葡萄球菌对红霉素及克林霉素的耐药性,测定红霉素诱导克林霉素耐药状况和基因型特征。方法收集我院2005～2007年分离到的350株葡萄球菌采用K-B法做药敏试验,对红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株做D试验检测,PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC、msrA、msrB和linA/linA’基因。结果350株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药64株,D试验阳性为18.3%。基因型分别是ermA9株、ermB2株、ermC48株、msrA7株、msrB11株、全部阴性的5株、linA/linA’64株、ermC+msrB7株。结论红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,检测葡萄球菌中红霉素对克林霉素的诱导耐药性可帮助临床医生正确选用大环内酯类、林可酰胺类和链阳霉素B类抗生素。

医院环境中葡萄球菌诱导克林霉素耐药及基因分析

目的了解医院环境中存在的葡萄球菌属细菌分布,检测环境分离株对红霉素和克林霉素的耐药性,并检测红霉素对克林霉素诱导性耐药的发生率。方法按照院内感染管理环境采样标准采集医院环境包括空气、物体表面、工作人员手、样品。分离其中葡萄球菌属细菌,用k-b法检测其对红霉素及克林霉素的耐药性,并做纸片法D试验检测红霉素诱导克林霉素耐药发生率。结果 210株葡萄球菌中金黄色葡萄球菌16株,表皮葡萄球菌162株,其他凝固酶阴性葡萄球菌32株;其中红霉素耐药克林霉素耐药62株,占29.52%,红霉素敏感克林霉素敏感29株,占13.81%,红霉素耐药或中介克林霉素敏感或中介119株,占56.67%,其中D试验阳性82株,占39.05%,D试验阴性37株,占17.62%.红霉素核糖体甲基化酶基因ermC是诱导耐药的主要基因,占56.09%(46/82)。结论医院环境中葡萄球菌分布以表皮葡萄球菌为主,D试验阳性率与临床分离标本基本一致,常规D试验检测有助于临床合理使用大环内酯类及林可霉素类抗菌药物,ermC是诱导耐药的主要基因。

肺炎链球菌的耐药基因及其分子生物学检测

目的肺炎链球菌对β-内酰胺类,大环内酯类抗生素的耐药率在世界各地以较快速度上升,其流行趋势已引起医学界的普遍关注,但不同地区差异较大。肺炎链球菌的β-内酰胺耐药性主要由青霉素结合蛋白变异所致,非pbp基因突变也会导致β-内酰胺耐药性,大环内酯耐药性肺炎链球菌的耐药表型MLS型,M型分别由耐药基因ermB和mefA介导。分子生物学方法的应用使肺炎链球菌耐药性的发生得到较全面的阐述,同时对耐药基因的检测也更快速和准确。

肺炎支原体红霉素耐药机制研究

目的了解肺炎支原体(MP)对红霉素耐药情况及耐药机制。方法对60例临床证实为MP感染患儿鼻咽分泌物或咽拭子标本进行分离培养,药物敏感试验筛选耐药株,进行耐药基因检测。结果60例标本中,分离阳性株5例,耐药株4例,占80%。敏感株和标准株的23SrRNA基因序列与基因库的MP基因序列相同,4例耐药株的23SrRNA基因发生点突变,两株突变位点在2063,G替代了A,另两株突变位点在2064,G替代了A。5株分离株erm编码的甲基化酶基因均为阴性。结论MP对红霉素有耐药株产生,4株MP红霉素耐药株的耐药分子基础是23SrRNA基因发生点突变,未发现erm编码的甲基化酶基因。

血流感染金黄色葡萄球菌克林霉素耐药与分子流行病学研究

目的了解2014年全院血流感染金黄色葡萄球菌红霉素对克林霉素诱导耐药基因情况及分子流行病学分析。方法收集2014年全年临床血液标本分离的金黄色葡萄球菌。以双纸片法筛选红霉素对克林霉素诱导耐药的表型。erm基因检测采用PCR方法,并用spa及多位点序列分型(MLST)方法了解不同erm型分子流行情况。结果 33株金黄色葡萄球菌中MRSA分离率78.79%。且MRSA均携带有ermA基因。在7株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)中,4株分别携带ermB或ermC基因。spa及MLST结果显示,该院血流感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以ST239-t030型别为主;而MSSA存在较多型别,如ST59-t437、ST398-t3625等。结论 MRSA有较高分离率,主要以ST239-t030克隆株为主。erm基因主要以ermA检出为主(86.67%)。菌株对抗菌药物耐药明显,实验室应加强对克林霉素诱导耐药的检测,以指导临床合理使用抗菌药物。

葡萄球菌对克林霉素诱导耐药的检测和分析

目的调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素诱导耐药状况和基因型特征。方法收集我院2004年分离到的70株红霉素耐药、克林霉素敏感和中介葡萄球菌临床分离株,双纸片法做克林霉素诱导耐药(D试验),PCR检测细菌的ermA、ermB、ermC和msrA基因。结果70株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药32株(45.7%)。基因型分别是ermA1株,ermC33株,msrA18株,ermC+msrA5株,全部阴性的13株。结论我院葡萄球菌克林霉素诱导耐药率较高,且存在多种基因型,应提高对诱导耐药葡萄球菌的监测和控制。

肠球菌对大环内酯类抗生素的耐药机制

肠球菌是重要的条件致病菌 ,常对多种抗生素耐药 ,在院内感染的病原菌中居重要地位。大环内酯类、林可酰胺类和链阳菌素B是结构无关但功能相近的三类抗生素 (MLSB) ,可以作为治疗肠球菌感染的替代药物。近年来新的大环内酯类抗生素大量用于临床 ,在药物选择压力下 ,肠球菌对大环内酯类抗生素耐药较为严重。

粪肠球菌对泰利霉素药物敏感性与耐药基因erm的分布

目的了解粪肠球菌对泰利霉素和其他常用抗菌药物的耐药性,以及泰利霉素耐药与红霉素耐药相关基因ermA、ermB、ermC之间的关系。方法对本院2010-2016年从各种临床标本收集鉴定的320株粪肠球菌,用微量肉汤稀释法测定这些菌株对泰利霉素及8种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度,并用PCR法检测耐药基因ermA、ermB、ermC的分布。结果320株粪肠球菌对泰利霉素中介耐药26株,耐药138株,耐药率达51.3%;对红霉素耐药率达95.6%,泰利霉素抗粪肠球菌效果优于红霉素。对利奈唑胺、万古霉素、呋喃妥因和氨苄西林耐药率分别为15.6%、0.6%、2.2%和0.6%。共10株(3.1%)携带ermA基因,207株(64.7%)携带ermB基因,对泰利霉素中介组中有23株ermB基因阳性,耐药组有131株ermB基因阳性,仅1株(0.3%)ermC基因阳性,该菌同时携带ermB基因。结论粪肠球菌对泰利霉素已有较高耐药率。粪肠球菌对泰利霉素MIC值改变与ermB基因密切相关,与ermA、ermC基因无明显相关性。

多重交叉置换扩增联合羟基萘酚蓝检测脓肿分枝杆菌方法的建立

目的建立一种可视化的恒温扩增方法用于检测脓肿分枝杆菌(MAB)。方法采用特异性全长erm(41)基因建立基于多交叉置换扩增(MCDA)结合羟基萘酚蓝(HNB)的方法,通过比色法直接检测扩增产物,采用23株脓肿分枝杆菌复合群和8种细菌标准株对该方法进行初步评价。结果建立的MAB-MCDA-HNB检测限为100 fg的DNA模板。31株细菌菌株中,只有脓肿分枝杆菌检测结果为阳性,其它细菌包括结核分枝杆菌,卡介苗,马赛分枝杆菌、鸟分枝杆菌等非结核分枝杆菌和金黄色葡萄球菌等均为阴性。脓肿分枝杆菌模拟痰标本检测灵敏度为1.7×10~3 CFU/mL(每次反应17 CFU)。结论MAB-MCDA-HNB方法能够快速准确诊断脓肿分枝杆菌的感染。

广东地区脓肿分枝杆菌复合群对克拉霉素的耐药机制研究

目的探讨脓肿分枝杆菌复合群(MABC)对克拉霉素的耐药机制,为MABC肺病诊治提供依据。方法对广州市胸科医院冻存的191株龟-脓肿分枝杆菌复合群进行hsp65、rpoB、ITS多靶位基因菌种鉴定,确定为MABC的菌株进行克拉霉素最低抑菌浓度(MIC)药敏,延长培养时间至14 d,记录3、7、10、14 d的MIC值,观察MABC对克拉霉素诱导耐药情况,并对耐药相关基因rrl和erm(41)进行测序,研究克拉霉素耐药表型和基因型的关系。结果 191株龟-脓肿分枝杆菌复合群经多靶位基因法鉴定出2株龟分枝杆菌,189株MABC,其中111株脓肿分枝杆菌,78株马赛分枝杆菌。111株脓肿分枝杆菌中,克拉霉素获得性耐药1株,获得性耐药率0.9%;克拉霉素诱导耐药78株,诱导耐药率70.3%;总耐药株79株,总耐药率71.2%;78株马赛分枝杆菌无诱导耐药,克拉霉素获得性耐药5株,获得性耐药率6.4%;总耐药株5株,总耐药率为6.4%;脓肿分枝杆菌和马赛分枝杆菌总耐药率和获得性耐药率差异均有统计学意义(P<0.05)。6株克拉霉素获得性耐药菌株中,rrl突变的菌株5株,突变率为83.3%;所有的脓肿分枝杆菌erm(41)序列完整,所有的马赛分枝杆菌erm(41)序列有短缺;111株脓肿分枝杆菌,T28序列型菌株84株、C28序列型菌株27株。78株马赛分枝杆菌皆为T28序列型。结论 MABC为我国较为常见的非结核分枝杆菌,耐药率高,可用药物有限,治疗困难,主要菌种为脓肿分枝杆菌,根本的原因在于克拉霉素诱导耐药,准确的菌种鉴定、可靠的药敏试验对指导MABC肺病的临床治疗有重要意义。