高效液相色谱法测定四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸

建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)同时测定四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸5’-尿苷酸(5’-UMP)、5’-鸟苷酸(5’-GMP)、5’-肌苷酸(5’-IMP)和5’-腺苷酸(5’-AMP)含量。采用Waters Atlantis T3(4.6 mm×250 mm,3μm)色谱柱,以0.01 mol/L KH_2PO_4溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,紫外检测器在260 nm处进行检测,外标法进行定量。结果表明:各呈味核苷酸线性关系良好,相关系数R^2均为0.999 9,回收率在96.19%~103.25%内,相对标准偏差在1.08%~1.28%内。四角蛤蜊与菲律宾蛤仔中均含有4种呈味核苷酸,其中5’-AMP含量最多,其次是5’-IMP和5’-UMP,而5’-GMP含量最低。该方法简单,重现性好、灵敏度和准确度高,适用于四角蛤蜊、菲律宾蛤仔中呈味核苷酸含量测定,为研究贝类风味及贝类食品的开发提供一定的依据。

反相高效液相色谱法测定中国对虾肉中呈味核苷酸

核苷酸5'-CMP、5'-UMP、5'-GMP、5'-IMP、5'-AMP等是食品重要的鲜味物质。采用C18高效液相色谱柱,以甲醇与0.05mol/LKH2PO4溶液1:1(V/V)为流动相,梯度洗脱,能将其很好地分离。DAD检测器在260nm处检测,各呈味核苷酸的测定标准曲线在0.00～0.10mg/ml的范围内呈很好的线性关系,R2分别在0.9902～1.0000之间。对中国对虾肉中的呈味核苷酸进行测定,结果表明:加标回收率在99.96%～100.34%之间,变异系数在0.04%～0.4%之间。方法的精密度和准确度均较高,可应用于食品中呈味核苷酸的分析检测。

改进的高效液相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中5种核苷酸

建立并优化了高效液相色谱检测婴幼儿配方奶粉中5种核苷酸(尿嘧啶核苷酸(UMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)、胞嘧啶核苷酸(CMP))的方法。样品用水提取后,经乙酸沉淀蛋白质和HLB固相萃取柱净化,采用Waters XBrigde Amide(150 mm×4.6 mm,3.5μm)色谱柱分离,以乙腈、10 mmol/L磷酸二氢钠溶液和0.12%(v/v)磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,二极管阵列检测器(波长为254nm)检测。结果表明,5种核苷酸检测的线性范围宽,相关性好,相关系数(r2)均为0.999 9;方法的加标回收率为86.9%~105.7%;定量限为5.6~8.0 mg/kg;日内和日间精密度分别为0.5%~1.7%(n=5)和0.6%~1.9%(n=9)。该法前处理简单,分离效果好,回收率高,重复性好,可作为婴幼儿配方奶粉中5种核苷酸的有效检测方法。

烟台近海3种贝类中呈味核苷酸和氨基酸的测定及比较分析

对水产品中呈味核苷酸和氨基酸的高效液相色谱检测方法进行了优化,并对烟台近海长牡蛎（Ostrea gigas）、栉孔扇贝（Chlamys farreri）和中国蛤蜊（Mactra chinensis）3种贝类中呈味核苷酸和氨基酸的含量进行了比较分析,从而为开发贝类复合调味料提供科学依据。以纯水提取呈味物质,采用DABS-Cl柱前衍生反相高效液相色谱法测定游离氨基酸,流动相为17 mmoL/L柠檬酸溶液（pH 6.4,含4%DMF）和乙腈溶液（含4%DMF）,梯度洗脱,检测波长436 nm。反相离子对色谱法测定呈味核苷酸, pH 4.5的磷酸二氢钾溶液和乙腈溶液为流动相,磷酸二氢钾溶液内含5 mmoL/L四甲基氢氧化氨（TMAOH）,梯度洗脱,检测波长254 nm。方法加标回收率为90.2%~108%,相对标准偏差（RSD）为0.7%~7.1%。准确度、精密度均满足分析要求。测定结果显示：长牡蛎中牛磺酸、丙氨酸和谷氨酸含量较高,栉孔扇贝中甘氨酸、牛磺酸和丙氨酸含量较高,中国蛤蜊含有较多的甘氨酸、牛磺酸和丙氨酸；3种贝类中,丙氨酸、谷氨酸的TAV均大于1,栉孔扇贝和中国蛤蜊中,甘氨酸的TAV大于1,对呈味具有显著贡献。呈味核苷酸中,长牡蛎中IMP含量最高,占总呈味核苷酸的80%,其次是GMP。中国蛤蜊中AMP含量最高,其次是IMP。而栉孔扇贝中仅检测到IMP。3种贝类中呈味核苷酸含量虽然都较低, TAV未超过1,但核苷酸之间、核苷酸和氨基酸之间的协同增效作用,会对贝类的呈味产生重要影响。本研究通过对烟台近海3种贝类中各类鲜味物质和多种辅助呈味物质的含量、比例关系及其相互作用规律进行探讨,旨在为充分利用贝类营养氨基本作为复合调味料及其功能性开发和评价提供科学依据。

牡蛎体液主要呈味物质的测定及脂类成分分析

为充分利用牡蛎体液中呈味核苷酸（5′-CMP、5′-AMP、5′-UMP、5′-GMP、5′-IMP）、游离氨基酸和脂肪酸，采用反相高效液相色谱法测定煮制前后牡蛎体液中呈味核苷酸和氨基酸的含量，气质联用法（GC．MS）测定脂肪酸含量。结果显示，五种呈味核苷酸分离较好，样品的加标平均回收率在98．76％～100．92％之间，6次重复测量的变异系数在1．42％～1．83％之间，方法的精密度和准确度均较高。牡蛎体液中检出三种呈味核苷酸5′-cMP（14．32mg·100mL-1）、5′-GMP（7．27mg·100mL-1）和5′-IMP（2．14mg·100mL-1），煮制后含量有所下降；谷氨酸（2．78mg·mL-1）、甘氨酸（1．04mg·mL-1）和精氨酸（5．47mg·mL-1）等呈味氨基酸含量较高；煮制后脂肪酸含量较丰富，18种脂肪酸总含量为702．36μg·mL-1，其中饱和脂肪酸含量（319．75μg·mL-1）占脂肪酸总量的45．52％，不饱和脂肪酸（382．61μg·mL11）占脂肪酸总量的54．48％，EPA和DHA占脂肪酸总量的16．48％。它们之间的协同作用赋予牡蛎体液鲜美味道和-定营养。

阴离子交换高效液相色谱法测定婴幼儿食品与乳品中的核苷酸

建立了阴离子交换高效液相色谱测定婴幼儿食品和乳品中5种游离核苷酸———胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、尿嘧啶核苷酸(UMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)的分析方法。样品经水提取和沉淀剂沉淀蛋白质后,采用强阴离子交换(SAX)色谱柱分离,以甲醇和磷酸二氢钾水溶液(10 mmol/L,p H 4.5)为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长254 nm,外标法定量。结果表明,该方法在0.200~200 mg/L范围内线性关系良好,5种核苷酸的相关系数(r)为0.999 8~1.000 0,加标回收率为95.5%~108%,相对标准偏差(RSD)为1.0%~3.2%。该方法的分离效果好,线性范围宽,稳定性和准确性好,解决了依据GB 5413.40-2016进行样品检测时的基质干扰问题。

高效液相色谱法测定人红细胞膜脂肪酸含量及组成

本文采用高效液相色谱法测定了４２例正常成人红细胞膜脂肪酸（ＦＡ）含量及组成。结果表明：该法分离效果好、定量准确。重复性变异系数平均５．５％，回收率平均９４．７％。人红细胞膜主要由廿二碳六烯酸（Ｃ２２６）、花生四烯酸（Ｃ２０４）、亚油酸（Ｃ１８２）、软脂酸（Ｃ１６０）、油酸（Ｃ１８１）和硬脂酸（Ｃ１８０）等六种ＦＡ组成，其中花生四烯酸含量最高，其次为硬脂酸。不饱和脂肪酸占７１．６％。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用测定DNA分子中4种脱氧核苷酸

建立了用反相离子对色谱和电感耦合等离子体质谱的联用技术同时测定DNA分子中4种脱氧核苷酸的含量。液相流动相最佳条件是:pH4.8,甲醇2.5%,10mmol/LNH4Ac。为了避免直接测定31P时14N16O1H+,15N16O+等复合离子的干扰造成信噪较差的问题,利用碰撞/反应池技术(CCT)加入O2和31P生成31P16O复合离子后测定该复合离子的信号可提高测定磷的信噪比。使用该联用技术测定4种脱氧核苷酸的检出限分别为0.211μmol/L(dCMP)、0.204μmol/L(dTMP)、0.173μmol/L(dGMP)和0.225μmol/L(dAMP),并且测定经过核酸酶酶解的质粒DNA后生成的4种脱氧核苷酸的含量分别是:152.9±2.4μmol/L(dCMP)、228.2±4.0μmol/L(dTMP)、125.3±3.0μmol/L(dGMP)和222.9±3.3μmol/L(dAMP)。

高效液相色谱测定人血液中腺苷酸含量

本文应用离子交换高效液相色谱法对人血液中腺苷酸(ATP、ADP、AMP)含量进行了测定。结果表明,健康人血液中的ATP,ADP,AMP含量分别为0.577±0.027mmol/L,0.150±0.010mmol/L,0.037±0.002mmoi/L。回收率分别为92.38%,91.28%、96.22%。此外,本法与经典的酶法和荧光素酶法比较具有高速,灵敏,省时及操作简便等优点。为临床和基础研宄提供了有效的分析方法。

人红细胞衰老过程能量代谢和胞龄依赖性变化研究

采用固定角转头15000r/min、8℃高速离心,将红细胞按胞龄分为少龄、中龄和老龄,分别聚集在离心管上、中、下三层。结果表明,随着红细胞在外周血中走向衰老,其胰岛素结合能力和ATP、NAD浓度都显著降低。这种变化有3种可能解释:1.成熟红细胞不再有蛋白质合成能力。2.与红细胞整个发育过程中,不断走向适应于担负简单而又特殊的生理功能的趋势有关。3.这种变化很大程度上是人体各种细胞衰老过程机制所决定的。

高效液相色谱/荧光法测定血浆、红细胞与尿液中的硫胺素及其磷酸酯

建立了同时测定血浆、红细胞、尿液中硫胺素（T）、一磷酸硫胺素（TMP）、二磷酸硫胺素（TDP）的柱前衍生/反相高效液相色谱-荧光检测法.样品经高氯酸除蛋白,铁氰化钾衍生后,采用反相色谱柱分离,荧光检测器测定,外标法定量.色谱柱为C18柱（250 mm×4.6 mm,5μm i.d.）,流动相为0.2 mol/L KH2PO4溶液（pH 7.0,含0.000 3 mol/L四丁基氢氧化铵）-甲醇和甲醇-水,采用梯度程序进行洗脱,流速为0.8mL/min.荧光检测器激发波长为365 nm,发射波长为435 nm.结果表明：T,TMP在0.5～ 20.0μg/L,TDP在5.0 ～ 200.0 μg/L质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数分别为0.99,0.98,0.99.T,TMP,TDP的平均回收率为86.8％～110.2％,相对标准偏差（RSDs）为2.5％～10.9％.3种化合物在血浆及红细胞中的检出限（LODs）为0.03～0.35 μg/L,定量下限（LOQs）为0.09～1.18 μg/L.T在尿液中的检出限（LODs）为1.58μg/L,定量下限（LOQs）为5.26 μg/L.该方法的准确度和精密度均较高,能够满足临床检测和科研需要.

嘌呤核苷酸补偿对海洛因依赖大鼠脑中嘌呤核苷酸含量的影响及机制研究

目的探讨外源性补偿嘌呤核苷酸对海洛因依赖大鼠嘌呤核苷酸含量的影响。方法将30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、海洛因组、海洛因+嘌呤核苷酸组(HAG)。各组采用高效液相色谱法检测大鼠脑中GMP、AMP、GTP、ATP含量。结果海洛因组与对照组比较AMP、GTP含量明显降低(P<0.01),GMP、ATP含量改变不明显。补偿嘌呤核苷酸后,AMP含量比海洛因组升高明显(P<0.01)。结论海洛因成瘾大鼠脑中存在嘌呤核苷酸缺失的现象,外源性补偿嘌呤核苷酸能够代偿体内嘌呤核苷酸缺失的状态。

固相萃取-液相色谱法测定婴幼儿配方乳粉中的游离核苷酸

该文建立了婴幼儿配方乳粉中5种游离核苷酸的检测方法。婴幼儿配方乳粉经乙二胺四乙酸二钠和氯化钠溶液提取,强阴离子(SAX)固相萃取柱净化,通过反相Atlantis T3色谱柱分离,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果表明:方法抗干扰能力强、准确度高,尤其对羊奶粉净化效果好、分离度高。5种游离核苷酸在0.5~10 mg/L范围内线性关系良好(r≥0.999);添加水平在0.05~0.50 g/kg时,回收率为91.1%~112%,相对标准偏差为2.3%~4.7%;检出限为0.001 0~0.001 5 g/kg,定量限为0.003 0~0.004 5 g/kg。对乳粉质控样品进行检测,结果与中位值比较的偏差在10%以内。该方法可为监管部门提供技术支持,为乳品行业健康发展提供保障。

高效液相色谱-串联质谱法测定婴幼儿奶粉中核苷酸

建立了高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)测定婴幼儿奶粉中胞嘧啶核苷酸(CMP)、腺嘌呤核苷酸(AMP)、鸟嘌呤核苷酸(GMP)、尿嘧啶核苷核(UMP)、次黄嘌呤核苷酸(IMP)等5种核苷酸含量。使用碱性磷酸酶去磷酸化作用,把样品中的核苷酸水解成相应核苷,经选择性硼酸固相萃取净化,ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm×1.8μm)色谱柱分离,以5 mmol/L甲酸铵溶液和乙腈为流动相进行梯度洗脱。采用电喷雾正离子源,内标法定量,以多反应监测(MRM)模式进行质谱分析。结果表明,奶粉中5种核苷在各自线性范围内的线性关系良好,相关系数均大于0.998,回收率为74.2%~110.7%,相对标准偏差在0.8%~5.3%之间(n=6),CMP、AMP、GMP、UMP、IMP的定量限分别为0.7、0.1、0.7、3.3、0.6 mg/100 g。该方法灵敏度高、重现性好、定量准确,可用于测定婴幼儿奶粉中核苷酸含量。

高效液相色谱法测定乳粉中5种核苷酸的含量

建立乳粉中核苷酸高效液相色谱的测定方法。采用超纯水作为提取剂,0.5%的乙酸沉淀蛋白,SAX固相萃取小柱净化,C18色谱柱分离,流动相为0.1 mol/L的磷酸二氢钾溶液。每100 g乳粉中核苷酸添加量为0.3-50 mg时,回收率大于90%,定量限为0.3 mg/100 g。该方法具有结果准确、操作简便、重复性好等优点,可用于乳粉中核苷酸的检测。