Pathogenesis of congenital pyrimidine 5′ -nucleotidase | deficiency: A study on relationship among erythrocyte morphology, enzyme protein content and activity

Objective:To further explore the mechanism of congenital pyrimidine 5'-nucleotidase I deficiency.Methods:The samples were collected from the family members of a patient with P5N'-I deficiency.The enzyme activities were measured by UMP method and the enzyme proteins were quantified by ELISA while the morphology of peripheral blood cells was observed.Results:The enzyme contents reduced as their enzyme activities decreased in the family especially in four members.There was a significant positive correlation(r=0.955)between the activity and the content of P5'N-I.The count of the stippling cell was varied in the family.Conclusion:One of the reasons for congenital P5'N-I deficiency might be the deficiency in the enzyme content.The morphology of peripheral blood erythrocyte may be an assistant diagnotic index.The P5'N-I activites and contents were measured simultaneously may be a effective method in clinic diagnosis.

测定人红细胞嘧啶5′核苷酸酶含量的双抗体夹心ELISA方法

为了进一步探讨嘧啶 5′核苷酸酶 (P5′N)缺乏症的发病机制 ,我们利用P5′N的特异性底物尿苷一磷酸 (UMP)作为配基 ,制备尿苷一磷酸 己二酰肼 琼脂糖 4B(UMP ADH Sepharose 4B)亲和层析柱 ,结合硫酸铵分级分离和沉淀、离子层析及亲和层析等方法提纯人红细胞P5′N。将所得P5′N免疫家兔 ,获得兔抗人抗体。以兔抗人P5′N抗体为包被抗体 ,辣根过氧化物酶 (HRP) 兔抗人P5′N抗体为显示抗体 ,经方阵法、抗原阻断试验及抗原替代试验后 ,建立定量测定人红细胞的P5′N双抗体夹心酶联免疫吸附实验。实验结果显示 ,所得兔抗人红细胞P5′N抗体效价为 1∶4 ,所建双抗体夹心ELISA法灵敏度为 5ng ml,其阻断率大于 95 %,而取代率小于 30 %。同时 ,测定正常人红细胞P5′N含量为 (71.77± 10 .98)ng mgNHP。该法特异性强 ,敏感性高 ,可检测最低含量为 5 - 2 0ng ml的P5′N含量 ,在临床上能适应大样本测定。

职业性铅接触者红细胞嘧啶5＇－核苷酸酶、超氧化物歧化酶活性测定

本文对１６名铅接触者、１４名铅中毒者和２０名非铅接触者进行了红细胞嘧啶５＇－核苷酸酶（Ｐ５Ｎ）和超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性测定，并进行统计分析。结果表明铅可抑制红细胞Ｐ５Ｎ的活性，其抑制程度与铅毒效应密切相关：对照组（非接铅组）活性范围５．６～１４．２，平均１０．２μｍｏｌ尿嘧啶／ｈ／Ｈｂｇ／ｄｌ；接铅组活性范围为２．３～７．２，平均为４．４μｍｏｌ尿嘧啶／ｈ／Ｈｂｇ／ｄｌ，与非接铅组比较Ｐ＜０．００１；铅中毒组活性范围１．５～３．７，平均２．５μｍｏｌ尿嘧啶／ｈ／Ｈｂｇ／ｄｌ，与接铅组比较Ｐ＜０．００１。ＳＯＤ活性三组间无差别。

白血病红细胞G6PD、PK和P5＇－N的观察

对白血病患者进行了红细胞Ｇ６ＰＤ、ＰＫ和Ｐ５’－Ｎ活性测定。治疗前急白患者红细胞Ｇ６ＰＤ、ＰＫ和Ｐ５’－Ｎ均低于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。缓解期急白患者红细胞Ｇ６ＰＤ、ＰＫ和Ｐ５’－Ｎ均高于治疗前患者（Ｐ＜０．００１）。慢粒患者红细胞Ｇ６ＰＤ和Ｐ５’－Ｎ与正常对照组无显著差异（Ｐ＞０．０５），而ＰＫ低于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。

红细胞嘧啶5'-核苷酸酶缺乏症4例及文献复习

目的:了解红细胞嘧啶5'-核苷酸酶(P5'N)缺乏症的特点。方法:回顾性分析4例红细胞P5'N缺乏症患者的病历资料,并结合文献进行复习。结果:4例患者中3例为男性,1例女性。年龄范围7个月～33岁,病程7个月～17年。所有患者均有轻度至中度的贫血,均有脾脏肿大,红细胞P5'N活性均低于正常。结论:遗传性P5'N缺乏症是一种少见的遗传性非球形细胞溶血性贫血,本病的血液学特点与其他遗传性非球形细胞溶血性贫血的主要区别在于本病红细胞P5'N活性下降。本病尚无特效治疗措施,目前仍以支持治疗为主。

铅接触者红细胞嘧啶5′－核苷酸酶活性与其他生物监测指标相关关系研究

本文在２０名接触铅和２０名非接触铅工人中，进行了红细胞嘧啶５－核苷酸酶（Ｐ５Ｎ）活性，血铅（ＢＰｂ）及尿中δ－氨基乙酰丙酸（δ－ＡＬＡ）测定，并进行相关分析。结果在２０名接触铅工人中红细胞Ｐ５Ｎ活性明显低于对照组并与ＢＰｂ有很好的负相关关系（ｒ＝－０．５１），与尿δ－ＡＬＡ也有负相关关系（ｒ＝０．３１）。

人红细胞嘧啶5′-核苷酸酶Ⅰ分子量鉴定、氨基酸组成分析及其微量测序

为进一步探讨遗传性红细胞嘧啶 5′ 核苷酸酶Ⅰ (P5′N Ⅰ )缺乏症的发病机制 ,在纯化人红细胞P5′N Ⅰ的基础上 ,分别用质谱仪和氨基酸分析仪分析其分子量及氨基酸组成 ,同时将该酶经胰蛋白酶水解后进行微量测序 ,并行生物信息学分析。研究结果 :质谱分析表明在蛋白电泳呈一条带的纯化的人红细胞P5′N Ⅰ中发现 3种分子量成倍数关系 ,且质谱图曲线非常吻合的蛋白 ,分子量分别为 2 6 95 2 .9,5 5 4 76及 110 938。测出 1个酶解肽片段N末端的 10个氨基酸序列为 :I E G P T I R Q I E。在数据库中未发现同源性片段。氨基酸分析表明该酶至少由 18种氨基酸 ,约 2 5 3个氨基酸残基组成。结论 :人红细胞P5′N Ⅰ可能为一种多亚基组成的变构酶 ,生理状态下可能存在同源二聚体或四聚体。所测氨基酸序列可作为筛选目的基因的探针。所测氨基酸组成为确定其蛋白一级结构提供了重要依据。

红细胞嘧啶5′核苷酸酶的纯化及其抗血清的制备

利用UMP ADH Sepharose4B亲和层析的方法纯化正常人红细胞嘧啶 5′ 核苷酸酶 (P5′N ,EC 3 1 3 5) .结果表明 :利用UMP ADH Sepharose4B亲和层析柱可有效、专一性吸附P5′N ,纯化液经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条蛋白质带 ,测定纯化物相对分子质量 2 8× 10 3 ,等电点 ( pI) 5 2 .纯化物免疫家兔后 ,得兔抗人P5′N抗血清 。

红细胞嘧啶5′-核苷酸酶缺乏致溶血性贫血1例报道并文献复习

红细胞嘧啶5′-核苷酸酶缺乏症(pyrimidine 5′-nucleotide deficiency,P5′ND)是一种罕见的遗传性酶缺陷疾病,目前报道较少。文中病例反复出现溶血性贫血、黄疸、脾脏肿大,经完善红细胞酶学试验最终诊断为P5′ND。笔者结合相关文献复习认为,对于慢性非球形溶血性贫血患者,需警惕此类红细胞酶缺陷相关疾病,有条件者可尽量完善二代基因测序筛选致病基因,更好地指导临床实践。现特将其诊疗过程初步整理、总结并报道如下,以期为罕见病的诊治思路提供一定参考价值。

红细胞嘧啶5’-核苷酸酶缺乏症9例并文献复习

目的:探讨红细胞嘧啶5’-核苷酸酶(P5’N)缺乏症患者的临床特征、实验室检查特点、治疗方法。方法:回顾性分析9例P5’N缺乏症患者的临床资料和实验室检查特点并复习相关文献。结果:9例患者均有不同程度贫血,其他症状包括:脾大7例,黄疸6例,胆石症2例,肝大1例。2例患者并发β-地中海贫血,1例并发丙酮酸激酶(PK)缺乏。4例可分析病例中2例患者的母亲同时存在P5’N缺乏。4例患者需要输血治疗。结论:遗传性P5’N缺乏症特点是红细胞P5’N活性下降,外周血可见嗜碱性点彩红细胞。获得性P5’N缺乏症可见于β-地中海贫血等疾病。