余庆花椒精油挥发性成分分析及其对红白血病HEL细胞分化和凋亡的影响

目的研究余庆花椒精油(Yuqing Zanthoxylum bungeanum essential oil,YZBO)的挥发性成分及YZBO对红白血病HEL细胞分化和凋亡的影响。方法采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱法(headspace solid-phase microextraction-gas chromatography-mass spectrometry,HS-SPME-GC-MS)分析YZBO的挥发性成分,并以不同质量浓度YZBO处理HEL细胞24 h后,采用MTT和台酚蓝计数分析细胞存活,流式细胞仪检测HEL细胞CD71、CD235a、CD41的分化情况,流式细胞仪和Hoechst33258染色法检测HEL细胞凋亡情况。结果YZBO含有99种化学成分,包括28种醇类物质、7种酯类物质、1种醛类物质、6种酸类物质、4种酮类物质、37种烯烃类、7种烷烃类物质、2种炔烃类物质、2种酚类物质和5种其他物质。橙花叔醇、榄香醇和τ-杜松醇是主要的醇类物质,乙酸苯乙酯和异乔木萜醇乙酸酯是其主要酯类物质。YZBO对HEL细胞的半抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))值为2.94386μg/mL,可促进CD71(45.6%)和CD235a(38.8%)的分化,而对CD41的分化不明显,可诱导HEL细胞程序性凋亡,凋亡数目呈剂量和时间依赖性,镜下和染色观察发现细胞体积变小,核固缩以及呈高亮蓝色等典型细胞凋亡形态学改变。结论YZBO的主要挥发性成分是烷烃类、醇类、烯烃类化合物,YZBO具有抗红白血病HEL细胞的生物活性,可促进分化未成熟的HEL细胞向成熟细胞方向分化,抑制向巨核细胞方向分化,并诱导其凋亡。

儿童急性红白血病临床特点及预后分析

目的探讨儿童急性红白血病(acute erythroleukemia,AEL)的临床特征和预后。方法回顾性分析2013年1月—2023年12月郑州大学第一附属医院收治的8例AEL患儿的临床资料、治疗和预后。结果可获得完整骨髓细胞形态学分析的7例患儿中,4例病态造血累及三系,其中红系病态造血发生率为100%(7/7),粒系病态造血发生率为71%(5/7),巨核系病态造血发生率为57%(4/7)。免疫分型中髓系抗原主要表达CD13、CD33、CD117、CD38、CD123,分别有4例和2例表达红系抗原CD71和CD235a。染色体核型分析示2例为异常染色体核型,核型异常涉及+81例,+4伴+61例,未见复杂染色体核型。4例检测出基因异常,融合基因涉及dup MLL阳性、EVI1阳性各1例,突变基因涉及KRAS、NRAS、WT1及UBTF突变。7例进行化疗,1个疗程化疗后6例达到缓解,其中2例行造血干细胞移植,目前均无病存活中。随访(中位随访时间6个月)显示,仅有3例存活(2例为造血干细胞移植后,1例治疗中)。结论儿童AEL具有独特的临床及生物学特征,对治疗反应不佳,预后差,造血干细胞移植或可提高其整体生存率。

髓清丸对HEL细胞系作用的血清药理学研究

目的 :研究中药复方髓清丸对白血病细胞的作用。方法 :采用血清药理学方法体外培养观察人红白血病细胞系 (HEL)的增殖、凋亡、细胞周期、细胞形态等细胞学指标。结果 :活细胞百分率各含药血清组均较对照组低 ,MTT法测定髓清丸中剂量组和高剂量组OD值明显低于对照组 (p<0 0 1) ,中剂量组和高剂量组细胞毒活性均大于 2 0 %,高剂量含药血清组G1期DNA含量明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,中剂量组凋亡细胞百分率较高 (P <0 0 5 )。结论 :髓清丸能抑制HEL细胞的增殖 ,并有一定的诱导HEL细胞分化、凋亡的作用。

氯化汞对K_(562)和HEL细胞株作用的实验研究

为探讨中药水银（Hg）和轻粉（HgCl）的抗肿瘤作用，以三氧化二砷（AS2O3）及阿糖胞苷（Ara－c）为对照，应用细胞形态学、流式细胞术、MTT法和药物反应曲线等方法观察3种药物对K562和HEL细胞株的作用。结果表明，HgCl2和As2O3均能诱导562细胞凋亡，而Ara－c无此作用.HgCl2可使K(562)的G0／G1增高，提示激活P53基因可能是氯化汞诱导凋亡机制之一；HgCl2和AS2O3均可显著抑制K(562)增殖；Ara－c抑制HEL增殖作用明显强于HgCl2和As2O3三者对HEL均无诱导凋亡作用，但对K(562)和HEL均有不同程度杀伤和致死作用。HgCl2和As2O3作用相似，其主要机制可能是与Hg(2+)和AS(3+)与巯基（－SH）有极高亲和力，继而与含巯基的活性基结合、降低诸多酶的活性、损害细胞膜有关。HgCl2具有抗肿瘤作用，是一种新的诱导细胞凋亡药物。

血小板生成素是人红白血病HEL细胞自分泌因子的证据

为了研究人红白血病HEL细胞有自分泌血小板生成素(Tpo)的能力,采用细胞原位杂交检测mRNA,采用免疫荧光方法、生物素亲和素系统检测蛋白质,采用细胞传感器检测细胞电化学行为。结果表明:Mpl是细胞膜受体;HEL细胞内存在Tpo蛋白质;在培养基中加入rhTpo后HEL细胞增殖;可溶性受体融合蛋白可以阻断HEL细胞增殖,阻断后HEL细胞的电子传递数减少,但细胞数高于接种细胞数。实验结论提示Tpo可能是HEL细胞的自分泌因子。

基于改进HELS方法的局部近场声全息技术研究

为实现复杂声源局部声场精确重建,提出基于改进的HELS法的局部近场声全息(PNAH)技术。将实际声场视为声源各部分产生相干声场的叠加,利用小全息孔径测量声压求解正交基函数的线性组合系数,实现全息声压近场外推;用外推所得数据进行声场重建。仿真及实验结果表明,该方法能有效重建复杂声源声场,且重建精度较高。

青黛提取物对HEL细胞增殖、凋亡和分化的影响

目的研究青黛有效成分在体外对HEL细胞的增殖、凋亡和分化作用。方法应用MTT法检测青黛有效成分对HEL细胞的增殖抑制效应;流式细胞术检测CD14和CD11B,观察HEL细胞单核系分化趋势;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双标记法检测青黛有效成分对HEL细胞的早期凋亡诱导作用。结果与阴性对照组相比25,50,75和100μg/mL青黛有效成分作用下HEL细胞均出现单核系分化趋势,其中100μg/mL的分化趋势最明显;MTT结果显示25,50,75及100μg/mL药物对HEL细胞的生长抑制率分别为16.01%,39.12%,50.06%和59.28%;青黛有效成分可诱导HEL细胞凋亡:25,50,75及100μg/mL药物对HEL的早期凋亡率分别是5.60%,13.7%,17.8%和18.4%,明显高于对照细胞的自发凋亡率(2.70%)(P<0.05)。结论青黛有效成分对体外培养的HEL细胞具有显著抑制增殖作用,且可诱导细胞早期凋亡和单核系分化。

吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞增殖的抑制作用

本研究探讨两种分子靶向治疗药物酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼和拉帕替尼对JAK2 V617F阳性的骨髓增殖性疾病(MPD)的潜在治疗作用。吉非替尼(0.5、1、5、10、25μmol/L)和拉帕替尼(0.5、1、2、4、8、16μmol/L)分别作用于携带JAK2 V617F突变的人红白血病细胞株(HEL细胞系)。用MTT法检测2种药物对HEL细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对细胞凋亡和细胞周期的影响。结果表明,吉非替尼可明显抑制HEL细胞的增殖,呈浓度依赖性(24和48 h的相关系数为0.991和0.895),48 h的IC50为5.4μmol/L。拉帕替尼作用48 h抑制细胞增殖的IC50为19.6μmol/L。吉非替尼对HEL细胞有显著的诱导凋亡作用,呈浓度依赖性(相关系数为0.896),随药物浓度的增加,凋亡细胞比例的增加。此外,吉非替尼明显地影响细胞周期,将细胞周期阻滞于G0/G1期。结论:吉非替尼和拉帕替尼对HEL细胞有显著的抑制增殖作用,可进一步用于JAK2 V617F阳性的MPD靶向治疗的研究。

COX-2抑制剂对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的 :探讨环氧化酶(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对人红白血病HEL细胞增殖、凋亡及迁移的影响及其作用机制。方法:不同浓度的塞来昔布处理HEL细胞,CCK-8法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33342荧光染色检测细胞凋亡;Transwell小室检测细胞迁移率;RT-PCR检测COX-2及JAK2 mRNA水平;Western blot检测COX-2及p-JAK2蛋白表达。结果:塞来昔布能够时间和剂量依赖性抑制HEL细胞增殖,不同浓度(25、75、125μmol/L)的塞来昔布在48 h时对细胞生长抑制率分别为(9.96±0.82)%、(18.46±2.01)%、(21.36±2.48)%(P<0.05);Hoechst33342凋亡细胞染色显示125μmol/L塞来昔布处理HEL细胞后,凋亡细胞明显增多;细胞迁移实验结果显示75μmol/L塞来昔布处理细胞24 h后漏出细胞为(22.13±7.51)个,明显低于对照组(77.89±6.94)个,P<0.05;RT-PCR结果显示不同浓度塞来昔布处理HEL细胞48 h后COX-2 mRNA呈剂量依赖性减低,而对JAK2 m RNA无明显影响;Western blot结果显示塞来昔布处理HEL细胞COX-2蛋白表达明显减低(P<0.05),而对p-JAK2无明显影响。结论:塞来昔布能够抑制HEL细胞增殖,可能与抑制COX-2表达有关,而对JAK2信号通路无明显影响。

高三尖杉酯碱联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5相关信号通路的影响

本研究旨在探讨高三尖杉酯碱(homoharringtonine,HHT)联合AG490对HEL细胞JAK2-STAT5信号通路的影响及其机制,为临床应用新方案治疗慢性骨髓增殖性肿瘤(MPN)提供理论依据。以20 ng/ml的HHT,100μmol/L AG490,20 ng/ml HHT+100μmol/L AG490处理HEL细胞24、48、72小时以后,用MTT法和流式细胞术检测细胞生长抑制率和凋亡率,药物处理细胞24小时后用WB法检测JAK2突变激活的信号蛋白P-JAK2,P-STAT5以及BCL-xL表达的变化。结果表明,HHT以及AG490作用HEL 24小时均能抑制其增长,Annexin V-PI双染流式细胞图显示均能明显诱导HEL早期凋亡,HHT更为明显;免疫电泳分析显示,P-JAK2和P-STAT5表达下调,而JAK2和STAT5总蛋白水平稳定。结论:HHT联合AG490能明显抑制HEL细胞增殖并诱导凋亡,两者具有协同作用,其作用机制是HHT作为一种广谱的蛋白酪氨酸激酶抑制剂,协同AG490抑制JAK2突变引起的信号蛋白的酪氨酸位点的磷酸化,从而下调STAT5反应性基因的转录。

重组人血小板生成素对人红白血病HEL细胞增殖的影响

为了进一步阐明血小板生成素(thrombopoietin,Tpo)的生物学作用,我们研究了rhTpo(recombinant human Tpo)对人红白血病(human erythroleukemia,HEL)细胞增殖的影响。采用血浆凝块集落培养法和5-溴-2’-脱氧尿核苷(5-BrdU)掺入HEL细胞DNA-ELISA法。培养基中加入rhTpo,HEL细胞集落数量和吸光度值明显高于未加rhTPo对照组。当rhTPo浓度为10,50,100,200ng/ml时,实验组集落数分别是对照组集落数的1.5,2.07,2.34,2.46倍;实验组A值分别是对照组A值的1.28,1.84,2.25,2.31倍。研究结果表明,rhTpo促进HEL细胞增殖和DNA合成。

siRNA特异性抑制HEL细胞evi1基因的实验研究

本研究探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默人红白细胞白血病细胞(HEL)的evi1基因后对细胞evi1基因表达的抑制作用及细胞生物学特征变化及其作用机制。体外合成3条evi1基因特异性的siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3)并转染HEL细胞,并设对照。用四甲基偶氮唑蓝法评价细胞增殖抑制情况,半定量逆转录聚合酶链反应(semiquantitative RT-PCR)检测evi1基因mRNA的表达,台盼蓝染色试验测定细胞活性的变化,流式细胞术检测细胞周期变化和凋亡率。结果显示,细胞转染24、48、72小时后,以siRNA-1作用最强,转染后48小时抑制作用最明显。siRNA浓度为120nmol/L时,抑制率达到最大。转染48小时后siRNA-1对HEL细胞的增殖抑制率为(72.22±2.80)%,evi1-mRNA相对表达率为(27.31±1.11)%,HEL细胞活率为(26.05±2.49)%,与其他各组相比有显著性差异(p<0.001)。siRNA可使细胞周期阻滞在G0/G1期,S期细胞明显减少,凋亡率明显增高(p<0.01)。结论:evi1基因特异性siRNA可抑制HEL细胞增殖,使evi1-mRNA表达水平降低,细胞活性下降,HEL细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制细胞的有丝分裂,促进细胞凋亡。

Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562的抗肿瘤作用及机制研究

目的:探讨Rigosertib对白血病细胞系HEL和K562细胞的凋亡、增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:Rigosertib梯度浓度作用于HEL和K562细胞,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,WST-1法绘制细胞增殖曲线,PI染色流式细胞术检测细胞周期,流式细胞术胞内染色检测胞内信号通路蛋白表达。结果:Rigosertib明显诱导HEL和K562细胞凋亡且呈现时间依赖性(r=0.997)和剂量依赖性(r=0.987);以低剂量Rigosertib浓度(0.5μmol/L)分别作用于HEL和K562细胞6-54 h,明显抑制HEL和K562细胞增殖,诱导HEL和K562细胞阻滞于 G_0/M期, G_1期细胞比例明显降低。流式细胞术分析显示,Rigosertib激活胞内凋亡蛋白cleaved caspase 3和cleaved PARP蛋白的表达,同时抑制增殖蛋白BCL-2和Cyclin D1蛋白的表达。此外Rigosertib明显抑制AKT、磷酸化AKT(S473)和磷酸化GSK-3α/β(S21/9)的表达。结论:Rigosertib诱导白血病细胞系HEL和K562细胞凋亡,增殖抑制和细胞周期阻滞,其抗肿瘤作用可能通过抑制AKT-GSK信号通路而实现的。本研究为rigosertib进一步应用于临床前研究提供了实验依据。

人巨细胞病毒蛋白IE1及pp65在HEL细胞中表达的时空特性

目的 研究HCMV感染HEL细胞后，病毒蛋白IE1及pp65在不同时间点的亚细胞分布及其表达量-时效变化相关性。方法 HCMV感染HEL细胞后，吸附2h，维持培养0、2、4、6、10、22及46h后，用病毒蛋白IE1的单克隆抗体及蛋白pp65的单克隆抗体做免疫细胞化学染色，检测此两种蛋白的胞内分布；同时运用图像分析系统对此检测结果进行灰度值测定，并利用方差分析分析此测定结果。结果 IE1蛋白仅在核内检测到；表达趋势是：4～6hp．i．呈表达上升趋势，6～8hp．i．又下降。pp65首先于仅在核内被检测到，之后也分布于胞浆中。pp65表达于2～8hp．i．表达增多，8～24hp．i．呈胞内稳定表达，24-48hp．i．表达降低。结论 IE1蛋白及pp65表达的亚细胞分布具有时空特异性；两种蛋白的表达量上都表现为量-时效相关性；本研究间接反映了病毒复制增殖的连续过程。

HCMV感染对HEL细胞HOXB2,HOXB3,HOXB4及HOX8基因表达的影响

目的 :研究人胚肺 (HEL)细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因的表达状态及人类巨细胞病毒(HCMV)感染对HEL细胞HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8基因表达的影响。方法 :采用半定量逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)技术。结果 :HEL细胞表达HOXB2 ,HOXB3,HOXB4及HOXB8;HOXB2基因于HCMV感染后 15h表达增加 ,4 8h达高峰 ,随后回落 ,至 12 0h再达高峰。HEL细胞HOXB3和HOXB4基因的表达在HCMV感染后不同时间无明显变化。HOXB8基因于HCMV感染后 15～ 4 8h表达轻微下调 ,72h回升 ,96h表达增加 ,12 0h达高峰 ;ATRA能轻微上调HCMV感染晚期HEL细胞HOXB8基因的表达 ,但对HCMV感染后HOXB2和HOXB4基因的表达无明显调节作用。结论 :HCMV能诱导HOXB2及HOXB8基因表达异常 ,这可能在先天性HCMV感染导致胚胎发育畸形中起重要作用。

白菊花抗CMV诱导的HEL细胞凋亡作用及其机制研究

目的:探讨白菊花抗巨细胞病毒(CMV)诱导的HEL细胞凋亡作用及其可能的分子机制。方法:将HEL细胞分为正常对照组、CMV对照组和药物预处理+CMV作用组,选用三种不同浓度(10μM,20μM and 50μM)的药物预处理三种细胞4h,再以病毒感染各组细胞诱导其凋亡,通过MTT法测定各组细胞的存活率,并用流式细胞仪通过Annexin V/PI双染法检测各组细胞的凋亡百分比,用Western blot检测各组细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB的表达。结果:不同浓度的白菊花能够提高CMV诱导的HEL细胞的存活率,而且白菊花可降低CMV诱导的HEL细胞的凋亡百分比,其中尤以两种药物的高浓度组作用最为显著,呈现出明显的剂量依赖关系;Western blot检测显示白菊花降低Caspase-3、6、7、9和NF-κB的蛋白表达,且随着浓度的升高,蛋白的表达量表现出逐渐减少的趋势,其中以两种药物的高浓度作用组最为明显。结论:白菊花对CMV诱导的HEL细胞凋亡有不同程度的抑制作用,其机制可能与抑制细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3、6、7、9和NF-κB信号传导通路的激活有关。

基因重组毒素HELβ1-PE38KDEL与顺铂杀伤乳腺癌细胞系的协同作用

目的 :研究HELβ1 PE38KDEL与常规化疗药物顺铂杀伤乳腺癌细胞系的协同作用。 方法 :采用细胞增殖、软琼脂集落形成等实验 ,测定HELβ1 PE38KDEL和顺铂对高表达erbB2、3、4的乳腺癌细胞MDA MB 4 5 3,胃癌细胞N87的协同作用 ,并以低表达erbB2、3、4的乳腺癌细胞 2LMP为对照。结果 :HELβ1 PE38KDEL和顺铂联用对MDA MB 4 5 3和N87具有协同杀伤作用 (CI <1)。对 2LMP无协同作用 (CI >1)。结论 :对高表达erbB 2、3、4的乳腺癌细胞 ,基因重组毒素HELβ1 PE38KDEL与顺铂联用具有协同杀伤作用。

基于Helmholtz方程最小二乘法的声场重构

对Helmholtz方程最小二乘(HELS)方法的理论进行了研究,提出了一种改进的HELS方法,其基本思想是将辐射声场描述成一系列由球面波函数构成的正交函数的线性组合形式,组合系数通过配置场点的声压来确定.针对HELS方法重建声场过程中矩阵病态和奇异的问题,提出了采用奇异值分解的方法求解组合系数.此外,提出了采用循环迭代的优化方法确定线性组合的项数.这两点改进使得HELS方法更具有普适性、更为稳健.以一脉动球声源为实例,应用改进的HELS方法对其声场进行仿真研究.结果表明,改进的HELS方法是一种非常有效的声场重建算法.

HeLa细胞中端区与端粒酶的实验研究

目的：测定ＨｅＬａ细胞中端粒酶活性。方法：采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交方法。结果：人外周血白细胞无端粒酶活性，ＨｅＬａ细胞中有端粒酶的活性。结论：ＨｅＬａ细胞中因有端粒酶活性，故其端区长度不随细胞增殖而缩短，这有别于体细胞。