重组人红细胞生成素质量控制体系研究

目的研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)质量控制体系。方法用网织红细胞分析仪测活法测定rHuEPO体内生物学活性。比较不同的等电聚焦电泳条件、蛋白含量测定方法和牛血清白蛋白检测方法。按rHuEPO特点进行其他项目的检测。结果采用全自动网织红细胞计数仪检测rHuEPO体内生物学活性方法简便可靠;电泳时添加尿素可增加区带清晰度和条带清晰度;采用BSAELISA检测牛血清白蛋白含量可准确定量;免疫印迹试验可有效地检测rHuEPO成品质量。结论本研究建立了一套完善的rHuEPO质量控制体系。

促红细胞生成素对脑缺血再灌注模型大鼠脑能量代谢影响的研究

目的研究促红细胞生成素(EPO)对缺血再灌注大鼠脑能量代谢的影响。方法将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组以及EPO治疗组,构建脑缺血再灌注模型。观测再灌注24 h后3组大鼠脑内乳酸含量以及Na+、K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶活性,并用HPLC检测各组脑内三磷酸腺苷(ATP)与总腺苷酸(TAN)含量,Western-blotting检测脑内单羧酸转运蛋白MCT1基因水平的表达。结果与模型组比较,EPO治疗组脑内ATP酶活性显著升高,乳酸含量降低,ATP与TAN含量显著增高,MCT1表达水平显著提高;与假手术组比较,EPO治疗组的脑内乳酸含量和ATP酶活性差异无统计学意义,ATP与TAN含量下降,MCT1蛋白表达水平明显提高。结论 EPO可通过改善能量代谢对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用。

促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用

目的探讨促红细胞生成素对大鼠视网膜Müller细胞低氧损伤的保护作用。方法传代培养大鼠视网膜Müller细胞,分为N组(正常对照)、C50、C100、C150、C200、C300组(氯化钴浓度50,100,150,200,300μmol/L),MTT检测不同浓度氯化钴对Müller细胞活力的影响,确定制作低氧损伤的氯化钴浓度。然后再分组为N组(正常对照),C组(200μmol/L氯化钴),E1C组(1×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),E2C组(2×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),E4C组(4×104 IU/L rh EPO+200μmol/L氯化钴),MTT比色法比较五组视网膜Müller细胞活力的改变。Western blot检测各组细胞谷氨酰胺合成酶蛋白表达的情况。结果氯化钴浓度低于200μmol/L时,细胞活力不受氯化钴浓度的影响。从200μmol/L开始,细胞活力随氯化钴浓度增高而下降。E1C、E2C、E4C组细胞活力均高于C组,E4C组高于E2C组和E1C组,C组低于N组。Western blot检测谷氨酰胺合成酶表达结果显示,C组低于N组,EPO干预各组蛋白表达均高于C组,并随EPO浓度增高表达增高,但均低于N组。结论 EPO对视网膜Müller细胞低氧损伤有保护作用。