圆孔多孔板水力空化杀灭大肠杆菌的实验研究

在以圆形孔口多孔板为空化空蚀发生器的水力空化装置中,对含有大肠杆菌的水样进行灭菌处理.通过检测大肠杆菌的灭菌率,研究了水力空化对水中大肠杆菌的灭活效果.分析了大肠杆菌初始浓度,水流空化数,孔口流速,孔口排布,孔口数量,孔口大小,空化空蚀作用时间等参数对灭菌效果的影响.试验结果表明:提高流速,降低空化数,选取适当的初始浓度,延长空化空蚀作用时间,增加孔口数量,减小孔口大小以及改进孔口排布可以进一步提高大肠杆菌的杀灭率.水力空化的空化空蚀作用能够杀灭水中的大肠杆菌,是一种饮用水消毒的新技术.

上转磷光免疫层析检测肠出血性大肠杆菌O157

目的建立一种肠出血性大肠杆菌O157的上转磷光免疫层析快速检测方法。方法利用上转换磷光标记和双抗体夹心免疫层析技术检测大肠杆菌O157,评价了该法的敏感性和特异性,并用于模拟污染食品样品的检测。结果该法能在40min内完成检测,应用于不同的肠杆菌科细菌如其他大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、产气肠杆菌、枸橼酸杆菌、沙雷菌、耶尔森菌以及葡萄球菌、副溶血弧菌、单增李斯特菌等23种28株常见细菌,未发现有交叉反应,检测灵敏度为5×103CFU/ml,每次最低可检测500个细菌,对奶粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、绿豆糕、果冻、燕窝、果汁等样品中的人工染菌均可检测,最低检测浓度为5×103CFU/ml。结论肠出血性大肠杆菌O157上转磷光免疫层析方法简便快速,特异性和灵敏性好,适用于现场的快速检测。

产ESBLs大肠埃希菌氨基糖苷类抗菌药耐药性及修饰酶基因的研究

目的了解本地产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌对氨基糖苷类抗菌药(AGs)的耐药情况,并分析其氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因的检出情况。方法对临床分离的75株大肠埃希菌用表型确证试验检测ESBLs,用KB纸片扩散法对6种AGs做药敏试验以及采用PCR技术检测AMEs基因。结果在临床分离的75株大肠埃希菌中共检出产ESBLs菌37株(49.33%)。产ESBLs菌耐药情况:依次为庆大霉素(78.38%)、链霉素(70.27%)、卡那霉素(62.16%)、妥布霉素(50.05%)、奈替米星(18.92%)、阿米卡星(10.81%)。与非产ESBLs菌株比较,除奈替米星和阿米卡星外差异均有统计学意义,且产ESBLs菌中耐多药模式明显,差异有统计学意义(P<0.05)。产ESBLs菌携带AMEs基因检出情况:共检出5种基因,其中以aac(3)-Ⅱ(64.86%)和aac(6′)-Ⅰ(45.95%)为主,未检出aac(6′)-Ⅱ。除ant(2")-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ外,其余3种基因检出率高于非产ESBLs菌株,且两基因携带率也明显高于非产ESBLs菌株(P<0.05)。结论 ESBLs的产生可使大肠埃希菌对AGs的耐药情况加重。

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药性分析

目的了解深圳地区2011～2013年住院患者产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的感染情况，为临床治疗及预防产ESBLs大肠埃希菌引起的感染提供警示。方法对2011年5月至2013年3月感染大肠埃希菌的住院患者采集临床资料，进行药敏试验，并进行统计学分析。结果深圳市宝安区西乡人民医院在2011年5月至2013年3月住院患者中检出大肠埃希菌328株，ESBLs158株，阳性率为48．17％，产ESBLs大肠埃希菌检出较多的科室为泌尿外科28株，17．72％；标本最多的为尿液71株，占44．94％。ESBLs阳性菌株中，tem基因检出85例，检出率53．80％，其中TEM-1检出63例，占74．12％。产ESBLs大肠埃希菌对各种抗菌药物均产生耐药。结论产ESBLS大肠埃希菌耐药明显，tern基因型以TEM-1为主。

邻苯二甲醛消毒剂性能的试验观察

为研究邻苯二甲醛消毒剂的杀菌效果及其有关性能,采用载体定量杀菌试验、模拟现场试验及金属腐蚀性试验进行了观察。结果,以邻苯二甲醛4 800 mg/L水溶液作用1min,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌平均杀灭率为99.90％以上;以含5 969 mg/L邻苯二甲醛对白色念珠菌作用1min,平均杀灭率达99.90％以上,对枯草杆菌黑色变种芽孢作用70 min和120 min,平均杀灭率分别为99.94％和100％。以含5 969 mg/L邻苯二甲醛作用10 min,可有效破坏不锈钢载体上 HBsAg抗原性。有机物对邻苯二甲醛杀菌效果有一定影响。含5 969mg/L邻苯二甲醛消毒液对不锈钢、碳钢、铜、铝浸泡72 h,除对铜有中度腐蚀之外,对其他金属均基本无腐蚀;将其贮存于54℃ 14d,邻苯二甲醛含量下降率为4.98％。该消毒剂对细菌繁殖体、酵母菌和细菌芽孢均有良好的杀灭效果,且性能稳定,腐蚀性小。

大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因改建及其表达产物粘膜免疫佐剂活性的研究(英文)

目的改建大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因序列以提高重组LTB(rLTB)原核表达量,确定重组改建LTB(rrLTB)粘膜免疫佐剂活性。方法按大肠杆菌偏爱密码子合成全长LTB基因的核苷酸序列。构建pET32a-rLTB原核重组表达质粒及pET32a-rLTB-E.coliBL21DE3表达系统,提取重组质粒并测定其插入的rLTB基因序列。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶成像分析系统鉴定rrLTB表达产量,并与未改建的重组LTB(roLTB)比较。采用GM1-ELISA确定rrLTB和roLTB结合牛GM1的能力。分别以幽门螺杆菌重组尿素酶B亚单位(rUreB),检测rrLTB和roLTB对rUreB对幽门螺杆菌SS1株感染BALB/c小鼠保护作用及产生特异性S-IgA的增强效应。结果pET32a-rLTB-E.coliBL21DE3经1 mmol/LIPTG诱导后,rrLTB表达量约占细菌总蛋白的35.4%,为roLTB(2.8%)的12.6倍。GM1-ELISA结果证实rrLTB和roLTB均能与牛GM1结合。单一rUreB对感染小鼠的免疫保护率为66.7%,但与rrLTB或roLTB合用时,保护率可至91.6%,并可提高感染小鼠特异性S-IgA产生量(P<0.01)。结论改建的LTB基因能明显提高表达量,所表达的rrLTB仍保持较强的粘膜免疫佐剂活性。

大肠癌右半结肠切除患者肠道菌群变化及意义

目的探讨大肠癌右半结肠切除患者肠道菌群变化及临床意义。方法选取接受右半结肠切除治疗的大肠癌患者43例(观察组),体检健康者43例(对照组)。对照组体检时、观察组手术前后分别留取清晨第一次排便尾便标本,进行细菌培养及菌株计数;观察组分别于术前、术后24 h取空腹肘静脉血进行细菌培养,统计细菌阳性率及DNA检出率。结果对照组、观察组均检出双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、酵母菌、类杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌。观察组手术前后双歧杆菌、乳酸杆菌数量均低于对照组(P均<0.05),大肠杆菌、酵母菌、粪肠球菌和屎肠球菌数量均高于对照组(P均<0.05),术后较术前上述菌株数量变化更显著(P均<0.05)。观察组术前、术后双歧杆菌/大肠杆菌分别为1.04±0.17、0.76±0.09,均低于对照组的1.64±0.23,且术后低于术前,组间及组内比较P均<0.05。观察组术前血细菌培养阳性率和DNA检出率均为0,术后24 h分别为6.98%(3/43)、41.86%(18/43),术前与术后24 h比较P均<0.01。结论右半结肠切除大肠癌患者肠道菌群明显失衡,双歧杆菌与大肠杆菌比值倒置,患者肠道功能减退,易诱发细菌移位,造成围手术期感染。

临床多重耐药大肠埃希菌磷霉素体外敏感性研究

目的评价磷霉素对多重耐药大肠埃希菌的体外药敏效应。方法应用K-B法对临床分离出的24株多重耐药菌进行磷霉素和亚胺培南(泰能)、头孢哌酮/舒巴坦(舒普深)体外药敏实验。结果多重耐药大肠杆菌对磷霉素、亚胺培南和舒谱深的敏感率分别为91.7%、95.8%、95.8%。结论磷霉素可以成为治疗临床多重耐药大肠杆菌感染的一种选择。

荧光法快速鉴定大肠杆菌的初步研究

以４甲基伞形酮酰βＤ葡糖醛酸苷（４ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｉｆｅｒｙｌβＤｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ，４ＭＵＧ）为底物，将其结合于选择性固体培养基中，采用荧光法检测细菌是否产生特异性的β葡糖苷酸酶作为鉴别细菌的依据。结果表明：大肠杆菌在脱氧胆酸钠培养基（ＤＯＣ培养基）中经３７℃培养９～１１ｈ，其菌落在３６５ｎｍ波长紫外光激发下可产生明显的荧光，而其它几种常见的革兰氏阴性肠杆菌（志贺氏菌、克雷伯氏菌、沙门氏菌、柠檬杆菌和弧菌）和铜绿假单胞菌虽能在其中生长，但不产生荧光；在麦康凯培养基中，大肠杆菌菌落出现荧光的时间明显延迟，其它革兰氏阴性菌也仍然不产生荧光。上述两种培养基对耶尔森氏菌和金黄色葡萄球菌的生长具有抑制作用。本试验结果提示，ＤＯＣ培养基可试用于大肠杆菌的鉴定，具有快速、简便和特异性强的特点。

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检测及耐药性分析

目的研究产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检测及耐药性,指导临床合理应用抗菌药物。方法采用初筛试验和确证试验对临床分离的大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌进行检测,以确定产ESBLs菌株,并进行抗生素耐药性分析。结果产ESBLs菌在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中的检出率分别为44.8%和23.6%,对亚胺培南最为敏感,对头孢唑啉和氨苄西林耐药。结论临床对产ESBLs细菌治疗以碳青霉烯类药物为首选,含酶抑制剂复合药物部分有效。

产超广谱β内酰胺酶的大肠杆菌同源性分析及护理防控建议

目的调查产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的大肠杆菌的流行情况及是否存在交叉感染,为进一步采取有效的护理防控提供参考。方法将210例患者临床分离的大肠杆菌运用ESBLs表型确证试验确定产ESBLs的大肠杆菌的流行率和科室分布;运用基因外重复回文序列聚合酶链反应对产ESBLs大肠杆菌分布最广泛的科室(泌尿外科)的临床分离株进行同源性分析。结果产ESBLs的大肠杆菌共122株(流行率58.1%)、泌尿外科24株(流行率68.6%);产ESBLs的大肠杆菌主要分布在泌尿外科(19.7%)、胰腺外科(7.4%)、神经外科(6.6%);泌尿外科检出24株产ESBLs的大肠杆菌标本22例来自于尿液、1例来自于血液、1例来自于咽喉分泌物;24株产ESBLs的大肠杆菌同源性分析结果显示,在泌尿外科共有10个亚型的流行株,以E2(6株克隆株)、E5(4株克隆株)亚型最为流行。结论产ESBLs的大肠杆菌的流行率较高,泌尿外科感染较为严重。应关注与留取尿标本密切相关的护理操作各环节及留置尿管护理等操作,制定有效的护理防控措施,预防产ESBLs大肠杆菌的暴发流行。

声频刺激对大肠杆菌生物学特性的影响

[目的]初步研究复合声频刺激对大肠杆菌生物学特性的影响作用。[方法]采用自行研制的声频发生装置,以大肠杆菌为研究对象,进行声波刺激试验。[结果]结果表明,在固定声频的情况下,随着刺激强度的增加,大肠杆菌的繁殖速率、代谢活性显著增强,并最终呈现出一种"饱和"现象;但随着刺激强度的进一步增加,大肠杆菌的生长却表现为明显的抑制效应。在声频、刺激强度一定的情况下,大肠杆菌在不同培养底物上的生长特性也表现出明显差异,其中在LB液体培养基中被明显促进,而在BPY液体培养基中则表现为抑制效应。[结论]声波刺激对大肠杆菌的生长及代谢具有显著影响。

猪源大肠杆菌耐药性与毒力的研究

为了有效预防猪肠道疾病的大面积感染,本试验针对猪源大肠杆菌耐药性与毒力开展研究。结果表明,被测大肠杆菌菌株对卡那霉素、阿莫西林、青霉素等抗生素具有耐药性,对链霉素、磷霉素等抗生素具有敏感性,其对卡那霉素与青霉素的最小抑菌浓度较高,但对于氟苯尼考、庆大霉素、强力霉素与四环素,大肠杆菌菌株的最小抑菌浓度差异较明显。EDL933大肠杆菌菌株中Stx2基因成功转移到PS1、PS2、PS3大肠杆菌菌株的基因组中,并在相应菌株中得到表达,产生毒力蛋白,表明EDL933大肠杆菌菌株的Stx2毒力基因会发生基因水平转移,以期为猪肠道疾病的防控提供科学依据。

禽大肠杆菌的分离与耐药性的检测

为了对甘肃省河西地区禽大肠杆菌进行耐药性检测及分析,试验采用纸片扩散法测定了各分离株对12种抗生素的敏感性。结果表明该地区大肠杆菌分离菌株对氧氟沙星、卡那霉素、庆大霉素、青霉素都存在较高的敏感性,对甲氧苄啶、氯霉素已经产生了耐药性。

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的分布和耐药分析

目的对大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产生的ESBLs分布、耐药情况进行研究，为临床准确用药提供依据。方法选取2014年7月～2015年9月期间各科室送实验室进行检验的菌株，对ESBLs菌耐药性以及分布情况进行研究与分析。结果由大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产生的ESBLs菌对亚胺培南、美罗培南敏感性高，对头孢类抗菌药以及哌拉西林耐药性较高，均在90％以上；170株菌种中有30例检测出ESBLs菌（17．6％）。其中，大肠埃希菌检出21株（70．0％）、肺炎克雷伯菌检出9株（30．0％），同时病菌主要从痰液、伤口分泌物中分离，所占比例分别为60．0％、13．3％，最常出现的科室为内科、外科、放疗科，其所占比例依次为36．7％、33．3％、20．0％。结论ESBLs菌多出现在内科、外科、放疗科，痰液、伤口分泌物为此菌最常分布所在，此细菌对多数头孢类抗菌药有高耐药性，治疗时选择敏感性高的药物进行治疗。

环介导等温扩增法应用于肠出血性大肠埃希菌O157：H7的检测

目的建立一种适合基层检验部门及小型实验室使用的快速鉴定检测肠出血性大肠埃希菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）0157：H7的方法。方法应用环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，LAMP），针对EHEC0157：H7的0157抗原编码rfbE、志贺样毒素stx2、H7鞭毛抗原编码fliC基因分别设计引物，并对LAMP反应条件和反应体系进行优化。对2株种系背景明确的实验对照菌EHEC0157：H7标准菌株、17株0157地方分离菌株、33株非0157其他肠道菌株进行检测，并与PCR结果比较，验证该方法的特异性、敏感性。结果具有相应靶基因的O157菌株经LAMP检测，其结果均与PCR法相同，呈绿色且电泳有相应条带为阳性，非O157其他肠道菌株均检测呈橙色并电泳无相应条带为阴性。该方法从菌株核酸的提取至检测完成仅需1．5h左右，该体系检测限均为26CFU／反应，而且其检测结果在白光下通过肉眼即可判断。结论本次建立的LAMP方法能够快速、灵敏、特异地检测鉴定EHECO157：H7，无需昂贵的仪器，非常适合基层检验部门及小型实验室与流行病学人员现场监测使用，具有较为广泛地应用前景。

17株产H_2S致泻大肠埃希菌的微生物学研究

目的对水源水和腹泻病人标本中检测到的17株产H2S致泻大肠埃希菌进行一系列微生物学实验研究,为进一步了解该菌的流行病学特点以及临床诊断提供实验依据。方法自1999年10月～2005年8月,从腹泻病人标本和水源水中分离的产H2S致泻大肠埃希菌,经形态学、培养特性、生化学、血清学等微生物学鉴定,并且对菌株进一步进行了药敏试验和噬菌体裂解试验。结果在腹泻、食物中毒病人标本和水源水中分离到17株产H2S致泻大肠埃希菌,经血清学分型后,其中4株是EPEC O128:K67,ETEC O25:K19和ETEC O16:K15分别为3株,占58.8%。结论产H2S致泻大肠埃希菌与大肠埃希菌有密切的亲缘关系,是变异的致泻大肠埃希菌,在致泻大肠埃菌中占有较高的比例。致泻大肠埃希菌产H2S生化变异提示我们在注意生化反应典型的致病菌分离与鉴定时,还应注意生化变异菌株的检测和鉴定,防止该菌造成新的腹泻病的传播和蔓延。

微泡超声增强庆大霉素对大肠杆菌抗菌作用的机制研究

【摘要】目的观察微泡超声对庆大霉素抑制大肠杆菌的增强效果，并探讨其可能机制。方法配制1×10CFU／ml大肠杆菌（ATCC25922）悬液，分为空白对照组、微泡（Sonovue）组、超声组和微泡超声组，每组按照庆大霉素浓度进一步分为0、1、2μgCml三个浓度组（n=8）。微泡浓度为体积分数10％。超声辐照强度为300mW／cm2，频率为46．5kHz，占空比为33％，辐照时间为12h。平板计数法比较各组残留活菌密度，取对数（10g10CFU／m1）行统计学分析。每组另取少量菌液行透射电镜扫描，观察残留菌的微观形态。结果未添加庆大霉素时，四组残留菌量的差异无统计学意义；庆大霉素1Ixg／ml时，微泡超声组（5．44±0．49logl0CFU／m1）与空白对照组（7．44±0．64logl0CFU／m1）、微泡组（7．19±0．38logl0CFU／m1）、超声组（6．86±0．29logl0CFU／m1）的差异均有统计学意义；庆大霉素浓度为2μg／ml时，微泡超声组（2．87±0．28logl0CFU／m1）与空白对照组（4．45±0．43loglOCFU／m1）、微泡组（4．33±0．40logl0CFU／m1）、超声组（3．89±0．37log10CFU／m1）的差异仍均有统计学意义。上述药物浓度下超声组与空白对照组菌量的差异均无统计学意义。透射电镜扫描提示，与单纯超声辐照相比，微泡超声辐照可进一步改变细菌胞膜的形态，胞膜皱褶更明显，存在较多不连续。结论与单纯超声辐照相比，微泡超声可以进一步提高庆大霉素对大肠杆菌的抗菌效果，可能与微泡增强超声的“声孔效应”有关。

大肠埃希菌系统发育群基因检测与耐药率的研究

目的通过检测大肠埃希菌系统发育群基因及细菌耐药率,探讨两者间的关系。方法筛选ESBLs阳性菌株88例,通过多重PCR方法检测ChuA,YjaA和TspE4.C2基因;应用Vitek2 compact细菌自动鉴定及药敏分析仪检测细菌耐药率。结果大肠埃希菌系统发育群以D群57.95%为主,其余依次为A群20.45%、B2群14.78%、B1群6.82%。其中在痰标本中检出率A群、D群比例基本相当,但在其他标本中均以D群为主。B2群耐药率显著高于A群、D群(除外LEV)分离的菌株(P<0.05)。结论根据系统发育群基因检测,大肠埃希菌主要为D群为主,其次分别为A、B2、B1群。不同的系统发育群所表现的耐药性不同,其中毒力最强的B2群耐药率最高。

合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布与耐药性分析

目的了解安徽省合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布和耐药状况,以期筛选出菌苗株和指导临床合理用药。方法对46份疑似大肠埃希菌病病料进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。采用玻片凝集试验对分离到的46株致病性大肠埃希菌进行血清型鉴定。同时分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测致病性大肠埃希菌的耐药性和ESBLs阳性菌株。结果46株致病性大肠埃希菌中,除7株细菌未能定型外,其余39株细菌分布于10个血清型,O127∶K63血清型为优势血清型,占定型菌株的33.33%。46株致病性大肠埃希菌对21种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,15个ESBLs阳性菌株表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率均高于ESBLs阴性菌株。结论O127∶K63血清型为优势血清型,可作为菌苗株。合肥地区动物源性大肠埃希菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠埃希菌多重耐药更为突出。