Physico-Chemical Attributes of Essential Oil from Zingiber officinale Roscoe and Zingiber zerumbet (L.) Smith Cultivars Grown in Togo

The present study was carried out to evaluate the quality of the rhizomes of Zingiber officinale and Zingiber zerumbet from different areas of Togo on the basis of their essential oil content and composition. The dry rhizomes were pulverised, hydrodistilled and essential oils were analysed using GC and GC/MS techniques. The results revealed that the essential oil yield of Z. zerumbet ranged from 0.75% to 1.00% and was mainly composed by Zerumbone (51.8% - 37.5%) and humulene (21.7% - 28.2%). Z. officinale essential oil yielded from 1.25% to 1.67%, with major components as zingiberene (33% - 39.9%);basibolene (12.7% - 16%), and sesquiphellandrene (13% - 14.7%).

艳山姜挥发油调控CaMKⅡ信号改善糖尿病诱导视网膜Müller细胞自噬障碍

目的探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)对糖尿病诱导视网膜Müller细胞功能障碍的保护作用及机制。方法视网膜Müller细胞使用不同剂量的EOFAZ进行预处理1 h后,采用高糖(30 mmol·L^(-1))孵育48 h,Western blot法检测细胞中自噬信号Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达水平;qRT-PCR分析细胞中P62 mRNA、Beclin1 mRNA的转录水平,免疫荧光实验分析LC3Ⅱ/Ⅰ、P62的表达。并进一步使用钙离子螯合剂BAPTA-AM及CaMKⅡ特异性抑制剂KN93孵育细胞,检测自噬信号LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、P62蛋白表达水平。使用自噬抑制剂氯喹(CQ)孵育细胞,检测细胞中CaMKⅡ及自噬信号LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达。结果与高糖组相比,EOFAZ可明显上调Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62的表达水平;使用BAPTA-AM及KN93孵育细胞与EOFAZ的作用类似。同时观察到EOFAZ与BAPTA-AM或KN93联合应用后,与EOFAZ单独作用的结果无明显差异。当EOFAZ与CQ共同孵育细胞后,EOFAZ对自噬相关蛋白下调的改善作用可被抑制,对CaMKⅡ的磷酸化水平无明显影响。结论EOFAZ对高糖诱导的视网膜Müller细胞自噬障碍具有明显的改善作用,其作用可能是通过抑制CaMKⅡ信号发挥的。

艳山姜挥发油对四氧嘧啶诱导的胰岛细胞损伤保护作用及机制

目的探讨艳山姜挥发油(EOFAZ)对四氧嘧啶诱导大鼠胰岛细胞(NIT-1)损伤的保护作用及机制。方法体外培养NIT-1细胞至对数生长期,测定不同浓度四氧嘧啶(0、1、4、10、20、40、60、80及100 mmol/L)下细胞存活率,取存活率较高的浓度进行后续实验;细胞分为对照组、模型组、EOFAZ低、中、高剂量组(分别为50、100及200μg/L),采用MTT法检测各组细胞存活率,生化法检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量,ELISA法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量和胰岛素分泌量,Western blot法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)以及半胱氨酸-天冬氨酸特异性蛋白酶9(Caspase-9)蛋白的表达;机制研究进一步设置EOFAZ组(200μg/L)、Z-VAD-FMK组(10μmol/L)以及EOFAZ+Z-VAD-FMK组(200μg/L EOFAZ+10μmol/L Z-VAD-FMK),采用Western blot法检测Caspase-9蛋白的表达。结果选择40 mmol/L四氧嘧啶(存活率70.7%)作为诱导细胞最佳损伤浓度,并复制NIT-1细胞损伤模型;与对照组比较,模型组细胞存活率降低、MDA和LDH释放量增加、SOD、GSH-PX释放和胰岛素分泌量减少、Bcl-2蛋白表达下调、Bax和Caspase-9蛋白表达上调(P<0.05);与模型组比较,EOFAZ各剂量组细胞存活率升高、胰岛素分泌增加(P<0.05),EOFAZ中、高剂量组MDA和LDH释放降低、SOD和GSH-PX释放量增加、Bcl-2蛋白表达上调、Bax和Caspase-9蛋白表达下调、Bax/Bcl-2降低(P<0.05);与EOFAZ组、Z-VAD-FMK组比较,EOFAZ+Z-VAD-FMK组Caspase 9蛋白表达均下调(P<0.05)。结论EOFAZ可改善四氧嘧啶诱导的NIT-1胰岛细胞损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关。

艳山姜挥发油对高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞VEGF表达的调控作用

目的:研究艳山姜挥发油对高糖诱导大鼠视网膜Müller细胞(RMCs)增殖的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法:将培养的RMCs分为正常对照组、甘露醇对照组、模型组、罗格列酮阳性对照组及艳山姜挥发油高(1μg/L)、中(0.5μg/L)、低(0.25μg/L)浓度组。给药48 h后,MTT法检测艳山姜挥发油对高糖诱导RMCs增殖的影响,苏木素-伊红染色(HE)进行形态学观察,划痕修复实验及transwell实验分别分析RMCs迁移能力和侵袭能力。免疫印迹法(Western blot)分析血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。结果:高糖作用后,RMCs增殖率、迁移及侵袭能力显著升高(P<0.01);VEGF蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,给予艳山姜挥发油及罗格列酮预保护能显著抑制RMCs的异常增殖(P<0.05),RMCs形态和数量趋近正常对照组,RMCs迁移和侵袭能力显著降低,同时显著下调了VEGF蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。结论:艳山姜挥发油对高糖诱导下RMCs的增殖及VEGF蛋白的表达具有调控作用。

花叶艳山姜叶片精油提取工艺优化

以花叶艳山姜叶片为材料,采用水蒸气蒸馏法,对其精油提取工艺进行优化。通过对蒸馏时间、浸泡时间、料液比和氯化钠浓度4个因素进行单因素试验和正交试验。结果表明,各因素对精油得率都有影响,影响大小顺序为:蒸馏时间>料液比>氯化钠浓度>浸泡时间。同时确定了最优提取工艺条件为蒸馏时间1.5 h、料液比1∶6、浸泡时间30 min和氯化钠浓度1.5%,在此条件下精油得率为0.216%。

艳山姜全果及不同部位挥发油化学成分GC-MS分析

目的:研究艳山姜全果及不同部位挥发油化学成分。方法:以水蒸气蒸馏法提取挥发油,分别得到不同样品的挥发油,以气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对其化学成分进行分离和鉴定。通过标准图谱对照确定化合物成分,经色谱峰面积归一化法测定其百分含量。结果:从艳山姜全果、果皮、种子团挥发油分别鉴定了66、67和55个化合物,占其各自总量的95.52%、95.83%、99.86%。结论:艳山姜全果及不同部位挥发油化学成分存在一定程度的差异,在资源的研究开发中值得重视。

艳山姜挥发油对TGF-β_1诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用研究

通过体外离体培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),建立转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导的血管内皮细胞氧化应激损伤模型,观察艳山姜挥发油(EOFAZ)对TGF-β_1诱导的HUVECs氧化应激损伤的保护作用,并初步分析其机制.实验结果显示TGF-β_1显著引起内皮细胞氧化应激损伤,艳山姜挥发油能够明显抑制内皮细胞存活率降低、细胞内ROS水平升高及细胞迁移能力增强,并上调Nrf2蛋白的表达.上述结果表明,艳山姜挥发油对TGF-β_1诱导的HUVECs氧化应激损伤具有保护作用,其机制可能与其调控Nrf2蛋白的表达相关.

超临界CO_2萃取花叶艳山姜叶片精油工艺优化

花叶艳山姜是优良的芳香及观赏植物,其叶片具有独特香气,可用于萃取植物精油。采用超临界CO_2法萃取花叶艳山姜叶片精油,并以精油得率为指标优化萃取工艺。通过单因素试验,分别考察萃取时间、萃取温度、萃取压力和CO_2流量4个因素对花叶艳山姜叶片精油得率的影响,结果表明这4个因素对精油得率均有显著影响。在单因素试验基础上,进行4因素3水平的正交试验,试验结果表明,超临界CO_2法萃取花叶艳山姜叶片精油的最优萃取工艺条件为:萃取时间2 h、萃取压力20 MPa、萃取温度30℃和CO_2流量30 L·h^(-1);在此条件下精油得率为5.07%。通过正交试验极差分析表明这4个因素对花叶艳山姜叶片精油得率的影响程度不同,其影响程度大小顺序为:萃取时间>CO_2流量>萃取压力>萃取温度。

艳山姜挥发油调控Keap1-Nrf2信号改善高糖诱导的胰岛β细胞凋亡

目的:探讨艳山姜挥发油对高糖诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用及其可能的作用机制。方法:将对数生长期的β细胞分为正常对照组、甘露醇组、高糖模型组、维生素E(V_(E),1×10^(-7)mmol/L)阳性对照组及艳山姜挥发油低(1μg/L)、高(4μg/L)剂量组。高糖作用72 h后,运用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Giemsa染色进行形态学观察,Hoechst 33342染色法观察细胞核的形态学变化,免疫印迹法分析Keap1、Nrf2、NQO-1、Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达。Nrf2抑制剂(ML385)及激动剂(Bardoxolone)作用后,免疫印迹法分析Bax、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9的蛋白表达情况。结果:与正常对照组比较,高糖作用后,β细胞的存活率显著降低,Giemsa染色显示细胞胞体呈现不规则变化,Hoechst 33342染色后荧光下可见细胞核皱缩,碎裂,染色质凝集,Western blot结果显示Keap-1、Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著上调,Nrf2、NQO-1及Bcl-2蛋白表达下调。给予艳山姜挥发油及V_(E)预处理后,可明显减轻高糖诱导的细胞损伤,并改善上述蛋白的异常表达。艳山姜挥发油联用Nrf2抑制剂ML385作用细胞后,艳山姜挥发油对上述蛋白异常表达的改善作用可被减弱。与单独艳山姜挥发油组比较,Nrf2的激动剂Bardoxolone与艳山姜挥发油联用后,对Bcl-2蛋白表达的低水平及Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达高水平的改善作用均无明显改变。结论:艳山姜挥发油可改善高糖诱导的β细胞的凋亡,其作用可能与活化Nrf2信号有关。

艳山姜精油挥发成分分析及其抑制肿瘤细胞增殖作用研究

通过GC-MS分析艳山姜精油挥发性组分,并利用人体肝癌细胞HepG2系及CCK法、流式细胞法、细胞增殖相关基因表达分析法,研究艳山姜精油抑制肿瘤细胞增殖的作用。结果表明:艳山姜精油挥发组分主要包含烯烃类和醇类物质,分别占挥发组分的63.88%、19.52%;在精油浓度为200μg/mL时,处理48h后对细胞增殖的抑制率达到56.8%;采用200μg/mL的艳山姜精油处理HepG2细胞24h,细胞凋亡率提高了2.5倍,同时,促进细胞凋亡的基因Caspase-3、Caspase-9、p53表达量提升至对照的2.57、1.74、1.50倍,而促进细胞增殖的PCNA基因表达量降低到0.45倍。艳山姜精油能较好地抑制癌细胞HepG2的增殖,为利用艳山姜开发功能食品提供了支撑。

EOFAZ抑制TNF-α诱导的血管新生和炎症损伤

目的研究艳山姜挥发油(essential oil of Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导内皮细胞血管新生及炎性损伤的作用,以及作用机制。方法分别建立TNF-α诱导的体外内皮细胞血管新生及体内小鼠胸主动脉炎性损伤模型。采用体外血管新生小管成环实验,分析TNF-α诱导HUVECs的血管新生;Western blot和qRT-PCR实验法分别检测HUVECs中VEGFR-2蛋白和mRNA的表达;ELISA法检测小鼠血清中VEGFR-2的分泌水平;采用HE染色分析小鼠胸主动脉炎性损伤。结果 EOFAZ和ERK抑制剂U0126明显抑制TNF-α诱导的HUVECs血管新生小管成环数量(P<0.01);EOFAZ能够下调TNF-α诱导小鼠血清中VEGFR-2的分泌(P<0.01);EOFAZ和U0126对TNF-α诱导的HUVECs中VEGFR-2的蛋白和mRNA表达有抑制作用(P<0.01);EOFAZ能够抑制TNF-α诱导小鼠胸主动脉炎性细胞的浸润。结论 EOFAZ能抑制TNF-α诱导血管新生和炎性损伤,其机制与通过ERK信号通路下调VEGFR-2的表达有关。

艳山姜挥发油对小鼠高尿酸血症的保护作用

目的研究艳山姜挥发油对小鼠高尿酸血症的治疗保护作用。方法采用水蒸气蒸馏法提取艳山姜挥发油;取50只健康昆明雄性小鼠均分为空白对照组、阳性对照组(别嘌呤醇,35 mg/kg)、模型组(氧嗪酸钾,250 mg/kg)和艳山姜挥发油高、低剂量组(按生药量计为160、100 mg/kg),每组10只;每日给予后4组小鼠腹腔注射氧嗪酸钾(250 mg/kg),空白组腹腔注射生理盐水;1 h后,空白对照组和模型组小鼠灌胃生理盐水,另3组按剂量灌胃相应药物,每日1次,连续7 d;之后各组小鼠眼球后静脉丛取血,试剂盒测定血清尿酸、肌酐,肾组织HE染色观察。结果与空白组相比,模型组小鼠血清尿酸水平显著升高(P<0.01),提示氧嗪酸钾造模成功;与模型组相比,艳山姜挥发油高、低剂量组可以显著改善氧嗪酸钾盐诱导的高尿酸小鼠血清尿酸、肌酐指标的异常变化(P<0.05),且小鼠肾组织病变有不同程度减轻(P<0.05)。结论艳山姜挥发油能够显著降低高尿酸血症模型小鼠血清中尿酸、肌酐水平,以及对肾损伤具有一定保护作用。

大鼠口服艳山姜挥发油后的入血成分分析

目的:检测艳山姜挥发油(EOFAZ)进入大鼠血浆的成分。方法:采用GC-MS技术和血清药物化学研究方法,分析大鼠经EOFAZ灌胃1h后的入血成分。结果:建立了大鼠给药后血浆样品的分析测定方法,并与空白血浆样品及EOFAZ对比,检测并鉴定出37个入血成分,且均为挥发油原型成分,主要活性成分β-蒎烯、α-蒎烯、莰烯、1,8-桉叶油醇在EOFAZ及大鼠血浆中所占百分含量均较高。结论:艳山姜活性部位37种挥发油进入大鼠血浆,为艳山姜作用的药效基础。

艳山姜挥发油纳米乳的制备及其体内分布情况考察

目的:制备包载艳山姜挥发油(EOFAZ)的口服纳米乳,考察其体外促吸收效果和体内分布情况。方法:将醋柴胡多糖(VBCP)和牛血清白蛋白(BSA)通过Maillard反应进行偶联,制备多糖-蛋白偶联物VBCP-BSA。以VBCP-BSA为乳化剂,维生素B12(VB_(12))为吸收促进剂,中链甘油三酯与EOFAZ混合作为油相,通过高能外力乳化法制备负载EOFAZ的纳米乳,对该纳米乳的粒径及粒径分布、表面Zeta电位、EOFAZ含量、外观形态等进行表征,并利用荧光素示踪法考察荧光素标记的EOFAZ纳米乳在体外的吸收效果及体内的分布情况。结果:VBCP与BSA通过Maillard反应48 h后形成偶联物VBCP-BSA,并具有较高的接枝度。以VBCP-BSA为乳化剂,制备得到均一的粉色纳米乳液EOFAZ@VBCP-BSA/VB_(12)。该纳米乳的粒径<100 nm,粒径分布均匀,表面弱负电荷,呈圆球形,对EOFAZ的包封率>80%,其具有良好的体外吸收效果,口服后能增强肝脏蓄积。结论:设计的蛋白多糖纳米乳能够有效负载EOFAZ,促进口服吸收,增强肝脏分布,可为口服EOFAZ保肝制剂的开发提供实验依据。

艳山姜挥发油对L-NAME诱导高血压大鼠心脏损伤的保护作用

目的:研究艳山姜挥发油(essential oils from Fructus Alpiniae zerumbet,EOFAZ)对Nω-硝基-L-精氨酸甲酯盐酸盐(Nω-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride,L-NAME)诱导高血压大鼠心脏损伤的保护作用。方法:L-NAME溶液口服灌胃4周建立高血压大鼠模型,模型成功的大鼠分别给予EOFAZ和卡托普利治疗4周。每周采用无创血压测量系统监测大鼠动脉血压;小动物B超成像系统检测大鼠心脏功能;HE染色观察大鼠心脏组织病理变化;比色法检测大鼠心脏中MDA、SOD、NO水平;免疫组化法检测大鼠心脏中eNOS、iNOS表达;Western blot法检测大鼠心脏中炎症相关蛋白TNF-α、IL-1β,氧化应激相关蛋白Nrf2、HO-1、Prdx-1,心脏肥厚相关蛋白ANP、BNP,以及eNOS、iNOS蛋白表达。结果:EOFAZ显著降低高血压大鼠血压,改善大鼠心脏结构异常和功能障碍,降低MDA和NO水平,增加SOD活性,下调ANP、BNP、TNF-α、IL-1β、iNOS表达,以及上调Nrf2、HO-1、Prdx-1、eNOS表达(P<0.05,P<0.01)。结论:EOFAZ对L-NAME诱导的高血压大鼠心脏损伤具有明显保护作用,其作用与抑制炎症、改善氧化应激、提高NO生物利用度有关。

艳山姜挥发油自乳化释药系统的毒性及对Caco-2细胞单层细胞旁转运与P-糖蛋白的影响

目的 考察艳山姜挥发油自乳化释药系统(essential oil of Fructus Alpinia zerumbet-self-emulsifying drug delivery system,EOFAZ-SEDDS)的毒性及其对人结直肠腺癌Caco-2细胞单层通透性和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的影响。方法 采用MTT法和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法测定EOFAZ-SEDDS的细胞毒性;荧光黄渗透率实验考察EOFAZ-SEDDS对Caco-2单层通透性的影响;Western blotting考察EOFAZ-SEDDS对P-gp蛋白表达的影响;流式细胞仪检测EOFAZ-SEDDS对P-gp功能的影响。小鼠ig不同剂量EOFAZ-SEDDS,连续观察14 d,考察EOFAZ-SEDDS对小鼠的急性毒性作用。结果 与EOFAZ组比较,EOFAZ-SEDDS处理培养1、3、5 d的Caco-2细胞24 h后细胞存活率均显著升高(P<0.05、0.01),LDH外漏率显著降低(P<0.05、0.01)。与对照组比较,EOFAZ-SEDDS、单独的EOFAZ均能够显著增加荧光黄透过率(P<0.01);EOFAZ处理Caco-2细胞24 h后,P-gp蛋白表达显著降低(P<0.05),EOFAZ-SEDDS处理后P-gp蛋白表达水平显著升高(P<0.05、0.01);10、20μg/mL的EOFAZ-SEDDS对P-gp外排功能没有影响,40μg/mL EOFAZSEDDS显著增加细胞内罗丹明的荧光强度(P<0.05)。小鼠口服制剂的半数致死剂量(median lethal dose,LD_(50))为5.291 5g/kg,95%置信限为4.927 8~5.682 1 g/kg。根据急性毒性分级标准,EOFAZ-SEDDS对小鼠实际无毒。结论 EOFAZ-SEDDS可以降低EOFAZ的细胞毒性,对小鼠实际无毒,但改变了Caco-2细胞单层屏障功能,同时诱导P-gp表达,在一定浓度范围内对其功能没有影响,为EOFAZ新剂型的研究提供了一定的实验基础。

GC-MS法分析艳山姜根茎、茎、叶及果实等部位挥发油化学成分

目的:研究艳山姜果实、根茎、茎及叶等部位挥发油化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取挥发油;以气相色谱-质谱(GC-MS)联用技术对不同部位挥发油的化学成分进行分离分析。通过Nist98和Wiley275.L谱库检索分别鉴定各化学成分;经面积归一化法测定各样品中的各化学成分的相对百分含量。结果:分别从艳山姜果实、根茎、茎、叶挥发油中分离出了62,61,67,58个化合物,分别鉴定了其中的58,54,50,53个化合物,所鉴定化合物的相对含量分别占各自挥发油总量的99.0%,97.5%,92.8%,96.5%。结论:艳山姜不同部位挥发油化学成分存在一定程度的差异,但主要组分基本相同。该实验结果为艳山姜资源的全面开发与应用提供了科学依据。

艳山姜挥发油抑制JNK1/2/3磷酸化对ox-LDL诱导的HAECs损伤的影响

目的:研究艳山姜挥发油对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用,并分析可能的作用机制。方法:实验分为空白组(无血清内皮细胞培养基),模型组(200 mg·L-1ox-LDL),艳山姜挥发油高剂量组(200mg·L-1ox-LDL+100μg·L-1艳山姜挥发油)和低剂量组(200 mg·L-1ox-LDL+10μg·L-1艳山姜挥发油)共4组。艳山姜挥发油预保护1 h,继续加入ox-LDL共同作用24 h,采用噻唑盐(MTT)法分析细胞存活率,苏木精-伊红(HE)染色法进行形态学观察;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)外漏量,Western blot分析c-Jun氨基末端激酶(JNK)1/2/3,p-JNK1/2/3蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应分析JNK1/2/3 mRNA表达水平。结果:艳山姜挥发油能显著提高HAECs的存活率,改善细胞的病理损伤,减少LDH外漏量,抑制JNK1/2/3蛋白磷酸化,但对JNK1/2/3蛋白和mRNA水平无显著影响。结论:艳山姜挥发油改善ox-LDL诱导的HAECs损伤,其作用机制与抑制JNK1/2/3蛋白磷酸化相关。

基于NOS信号的艳山姜挥发油对ox-LDL诱导HAECs损伤的保护作用

目的:研究艳山姜挥发油(EOFAZ)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人主动脉内皮细胞(HAECs)损伤的保护作用。方法:体外传代培养HAECs,EOFAZ保护作用研究分为7组,分别为空白组(无血清ECM),模型组(200 mg·L^(-1)oxLDL),EOFAZ高质量浓度组(200 mg·L^(-1)ox-LDL+100μg·L^(-1)EOFAZ),EOFAZ低质量浓度组(200 mg·L^(-1)ox-LDL+10μg·L^(-1)EOFAZ),阿司匹林组(Asp,200 mg·L^(-1)ox-LDL+2.5×10^(-4)mol·L^(-1)Asp),卡维地洛组(Car,200 mg·L^(-1)ox-LDL+1×10-6mol·L^(-1)Car),阿托伐他汀钙组(Atorv,200 mg·L^(-1)ox-LDL+1×10-6mol·L^(-1)Atorv);一氧化氮合酶(NOS)信号研究分为5组,分别为空白组(无血清ECM),模型组(200 mg·L^(-1)ox-LDL),EOFAZ组(200 mg·L^(-1)ox-LDL+100μg·L^(-1)EOFAZ),NOS抑制剂组(200 mg·L^(-1)ox-LDL+100μmol·L^(-1)L-NAME或300μmol·L^(-1)L-NMMA),EOFAZ加NOS抑制剂组(200 mg·L^(-1)ox-LDL+100μg·L^(-1)EOFAZ+100μmol·L^(-1)L-NAME或300μmol·L^(-1)L-NMMA)。噻唑蓝(MTT)法分析细胞存活率,酶标仪法及Griess试剂法分别检测培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和一氧化氮(NO)含量。化学法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测iNOS及eNOS mRNA表达水平。结果:与模型组比较,EOFAZ明显提高ox-LDL诱导损伤的HAECs的细胞存活率,抑制LDH外漏及iNOS活力(P<0.05,P<0.01),促进NO及eNOS的产生(P<0.05,P<0.01)。Real-time PCR分析表明,EOFAZ以及相关抑制剂显著下调iNOS mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),上调eNOS mRNA表达水平(P<0.05)。结论:EOFAZ对ox-LDL诱导损伤的HAECs具有保护作用,其作用机制与调控eNOS和iNOS的表达水平有关。

正交试验法研究艳山姜挥发油保护脂多糖诱导HUVEC损伤的活性组分

目的:分析艳山姜挥发油(EOFAZ)保护脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的主要活性组分。方法:将EOFAZ中含量较高的4个成分(α-蒎烯,β-蒎烯,1,8-桉叶油醇,莰烯)作为考察因素,每个因素选取有或无共2个水平,按L8(27)正交表设计分组与给药。运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和NO检测法,以细胞活力和细胞分泌NO为指标分析EOFAZ的主要药效物质基础。采用单成分分析法测定各成分不同浓度给药保护后细胞活力及培养上清液NO含量,观察4个成分对LPS诱导损伤的HUVECs的保护作用。结果:挥发油中4个成分均能明显提高细胞存活率,保护作用主次顺序为莰烯>α-蒎烯>1,8-桉叶油醇>β-蒎烯,4个成分间均存在明显差异。单成分分析表明4个成分作用于HUVECs后,可提高细胞活力及培养上清液NO含量,且呈一定剂量相关性。结论:EOFAZ对LPS诱导损伤的HUVECs具有保护作用,其中莰烯,α-蒎烯,1,8-桉叶油醇和β-蒎烯为主要药效组分。