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结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的表达及其作为检测抗原的初步应用 被引量:1
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作者 赵海 朱虹 +3 位作者 宋立华 何君 檀华 端青 《生物技术通讯》 CAS 2010年第4期501-504,共4页
目的:探索一种大量表达结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的方法,分析其抗原性,评价其在结核抗体检测中的初步应用。方法:采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中分别扩增esxB和esxA基因,用Linker(G4S)3连接2条目的片段,连接pET-32a(+)载体,构... 目的:探索一种大量表达结核分枝杆菌ESXB-ESXA融合蛋白的方法,分析其抗原性,评价其在结核抗体检测中的初步应用。方法:采用PCR方法从结核分枝杆菌基因组中分别扩增esxB和esxA基因,用Linker(G4S)3连接2条目的片段,连接pET-32a(+)载体,构建ESXB-ESXA融合蛋白表达载体;重组表达载体转化宿主细胞大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达、纯化,Western印迹分析重组蛋白的抗原性;建立以融合重组蛋白为抗原的ELISA和胶体金检测方法,分析其在结核病抗体检测中的应用。结果:构建了ESXB-ESXA融合蛋白的表达载体,重组ESXB-ESXA在大肠杆菌中得以高效表达,表达量占菌体总蛋白的70%以上;Western印迹分析表明该重组蛋白具有较好的抗原性;ELISA和胶体金检测结果显示,用重组ESXB-ESXA抗原检测临床结核病患者有较好的特异性。结论:重组ESXB-ESXA融合蛋白表达量高并具有较好的抗原性,可作为结核病抗体检测的备选抗原。 展开更多
关键词 结核病 结核分枝杆菌 esxb ESXA 融合表达
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牛乳源金黄色葡萄球菌EsxB蛋白的表达及免疫效应分析 被引量:2
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作者 张雪静 易鸳鸯 +2 位作者 杨志荣 马晓慧 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 2019年第1期53-58,共6页
为分析牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)EsxB蛋白的免疫特性,扩增EsxB基因并构建了pET-28a-EsxB重组质粒,转化后的重组菌经诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting检测重组蛋白;以纯化的EsxB蛋白免疫小鼠,检测其抗体水平... 为分析牛乳源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)EsxB蛋白的免疫特性,扩增EsxB基因并构建了pET-28a-EsxB重组质粒,转化后的重组菌经诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting检测重组蛋白;以纯化的EsxB蛋白免疫小鼠,检测其抗体水平、滴度及亚型、测定攻击保护率和观察小鼠肺、肾病理组织学变化。结果显示,成功纯化了EsxB蛋白,且该蛋白具有良好的抗体反应特性。免疫小鼠的血清抗体水平与对照组相比显著升高;抗体滴度可达1∶24 300,抗体亚型以IgG1和IgG2b为主,免疫小鼠的攻击保护率可达75%;且免疫后降低了S.aureus攻击对小鼠肺脏及肾脏的病理损伤。重组EsxB蛋白具有良好的免疫原性和保护效果。 展开更多
关键词 牛源金黄色葡萄球菌 esxb蛋白 表达与纯化 免疫效应
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鞭毛蛋白FliC对牛源金黄色葡萄球菌EsxB的免疫增强作用
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作者 李胜男 张雨薇 +4 位作者 古丽米热·对山巴依 张雪静 易鸳鸯 王汉青 苏艳 《新疆农业大学学报》 CAS 2020年第2期101-107,共7页
为分析马流产沙门氏菌鞭毛蛋白FliC对牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)EsxB免疫增强作用,用表达纯化的FliC与EsxB单独及联合免疫昆明小鼠,并以S.aureus分离株GW20-2攻击,检测免疫小鼠的抗体水平、攻毒保护力、体重变化、主要... 为分析马流产沙门氏菌鞭毛蛋白FliC对牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)EsxB免疫增强作用,用表达纯化的FliC与EsxB单独及联合免疫昆明小鼠,并以S.aureus分离株GW20-2攻击,检测免疫小鼠的抗体水平、攻毒保护力、体重变化、主要内脏器官荷菌数,观察肝、脾、肺及肾组织的病理组织学变化,通过real-time荧光定量PCR对免疫鼠脾细胞TLR2、TLR3、TLR4、MHC-Ⅰ、TCR的表达水平进行检测。结果表明,FliC与EsxB联合免疫后对小鼠攻击保护率可达87.5%,降低肝、脾、肺及肾组织荷菌量,且FliC与EsxB联合免疫组的TLR2、TLR3、TLR4、MHC-Ⅰ、TCR表达水平高于EsxB单独免疫组。FliC可显著增强EsxB的免疫保护效果。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 FLIC esxb 免疫增强
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Diagnosis of Bovine Tuberculosis by Comparative Intradermal Tuberculin Test, Interferon Gamma Assay and <i>esxB</i>(CFP-10) PCR in Blood and Lymph Node Aspirates
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作者 Derhasar Brahma Deepti Narang +3 位作者 Mudit Chandra Gursimran Filia Amarjit Singh Sikh Tejinder Singh 《Open Journal of Veterinary Medicine》 2019年第5期55-65,共11页
Bovine tuberculosis (TB) is a chronic debilitating disease of huge economic importance due to loss in production, morbidity and mortality, and has a potential zoonotic threat. TB is endemic in India and has a worldwid... Bovine tuberculosis (TB) is a chronic debilitating disease of huge economic importance due to loss in production, morbidity and mortality, and has a potential zoonotic threat. TB is endemic in India and has a worldwide prevalence, therefore, needing early diagnostic technique for the eradication of TB globally. Currently, compared to the eradication programme of TB in Medical sector, Veterinary sector is lagging behind though TB is one of the major zoonotic diseases prevalent in dairy animals and wildlife in India. With the “End TB” strategy by WHO in human, parallel measures for early diagnosis and culling has to be followed in case of animals for an overall successful eradication programme. The objective of this study is diagnosis of TB in cattle and buffaloes by using the cell-mediated immune response tests, i.e. Comparative Intradermal Tuberculin Test (CITT) and Interferon gamma (IFN-γ) assay, and Polymerase Chain Reaction (PCR) targeting esxB gene (CFP-10 protein) and to compare their diagnostic capabilities. This study was carried out in 202 dairy cattle and buffaloes from an organized dairy farm, where almost all of the animals appeared clinically healthy. We found that, the combined use of both CITT and IFN-γ assay lead to more accurate diagnosis of TB, although IFN-γ assay was more specific than CITT. However, esxB PCR showed almost similar sensitivity to IFN-γ assay and may be used as a fast alternative method for the diagnosis of bovine TB from blood samples. 展开更多
关键词 BOVINE TB CITT IFN-γ esxb PCR
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金黄色葡萄球菌EsxB蛋白的表达、纯化及应用 被引量:2
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作者 杜鸿 张萍 +2 位作者 沈海英 王敏 戴晓莉 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期364-366,共3页
目的建立EsxB蛋白的表达、纯化方法,了解金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)感染者血清EsxB抗体阳性比例及其耐药特征。方法同源重组构建EsxB蛋白原核表达体系,诱导表达后果用超小波法破碎细菌,以镍离子螯合层析柱纯化EsxB蛋白;以EsxB为... 目的建立EsxB蛋白的表达、纯化方法,了解金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)感染者血清EsxB抗体阳性比例及其耐药特征。方法同源重组构建EsxB蛋白原核表达体系,诱导表达后果用超小波法破碎细菌,以镍离子螯合层析柱纯化EsxB蛋白;以EsxB为抗原,应用间接ELISA法检测78例临床金葡菌感染患者血清EsxB抗体;应用全自动细菌鉴定分析仪检测相应的78株金葡菌分离菌株的耐药情况。结果成功构建EsxB原核表达体系并纯化得剑EsxB蛋白;28.2%(22/78)的金葡菌感染患者血清EsxB抗体阳性,来自EsxB抗体阳性患着金葡菌分离株,其多重耐约菌株的的比例(100.0%,22/22)和耐甲氧两林菌株的比例(77.3%,17/22)均高于来自EsxB机体阴性患者的金葡菌分离株洲[分别为35.7%(20/56)和21.4%(12/56)](P值均〈0.01)结论建立了EsxB蛋白的表达、纯化疗法;分离自EsxB抗体阳性者的金葡菌均为耐药菌株,且大多数对甲氧西林耐药。 展开更多
关键词 葡萄球菌 金黄色 多重耐药 蛋白纯化 esxb抗体
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金黄色葡萄球菌亚单位疫苗EsxA-EsxB-Flic载体构建及蛋白表达纯化 被引量:2
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作者 李飞达 潘伟荣 +5 位作者 肖晶 刘海京 袁玉梅 刘欢 魏强 张兴举 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期43-46,共4页
为了预防金黄色葡萄球菌感染,减少畜牧业的经济损失,试验采用鞭毛蛋白Flic与金黄色葡萄球菌毒力因子EsxA、EsxB组成2 133 bp的融合基因Esx A-Esx B-Flic,在大肠杆菌内扩增表达质粒,裂解细菌后提取总蛋白,再通过His标签纯化出Esx A-Esx B... 为了预防金黄色葡萄球菌感染,减少畜牧业的经济损失,试验采用鞭毛蛋白Flic与金黄色葡萄球菌毒力因子EsxA、EsxB组成2 133 bp的融合基因Esx A-Esx B-Flic,在大肠杆菌内扩增表达质粒,裂解细菌后提取总蛋白,再通过His标签纯化出Esx A-Esx B-Flic融合蛋白。结果表明:该方法简单高效,能快速获得大量纯化的目的蛋白,可用于新型抗金黄色葡萄球菌融合蛋白亚单位疫苗研究。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 融合蛋白 EsxA esxb FLIC
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三种非结核分枝杆菌esxB基因的克隆与序列分析
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作者 管清华 朱世馨 钱爱东 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第3期19-23,289,290,共7页
为了探讨非结核分枝杆菌中EsxB蛋白的生物学功能,试验以实验室分离的母牛分枝杆菌、新金分枝杆菌和耻垢分枝杆菌为对象,克隆了esxB基因,应用生物信息学方法进行系统发生分析,对EsxB蛋白进行生物学特性、保守区分析以及抗原表位、可能的... 为了探讨非结核分枝杆菌中EsxB蛋白的生物学功能,试验以实验室分离的母牛分枝杆菌、新金分枝杆菌和耻垢分枝杆菌为对象,克隆了esxB基因,应用生物信息学方法进行系统发生分析,对EsxB蛋白进行生物学特性、保守区分析以及抗原表位、可能的三级结构预测。结果表明:克隆的3种非结核分枝杆菌的esxB基因大小分别为309 bp、303 bp、294 bp,推导的氨基酸序列与Gen Bank中登录的相应菌种的氨基酸序列同源性分别为95%或97%、100%、100%;属于WXG100蛋白超家族中CFP-10亚家族成员,具有该亚家族保守的α-螺旋和Yxxx D/E序列;预测到3条肽链线性B细胞表位各1个,T细胞表位各4个、9个、5个,部分T细胞表位与结核杆菌CFP10的CD8+T细胞表位有5~6个共同氨基酸。 展开更多
关键词 新金分枝杆菌 母牛分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 esxb 表位
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融合蛋白ABF对金葡菌感染版纳微型猪近交系皮肤创伤的修复作用
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作者 潘伟荣 李俊虹 +5 位作者 肖晶 刘海京 刘欢 曾养志 查星琴 张兴举 《中国农学通报》 2015年第35期27-33,共7页
随着金葡菌对畜牧业破坏性增加和耐药性增强,人们对研发靶向金葡菌的有效保护性疫苗日趋迫切。为开发出更具免疫保护效力的抗菌疫苗,本研究首次利用Esx A、Esx B联合细菌鞭毛蛋白Flic,即制备出融合蛋白ABF,并在版纳微型猪近交系皮肤创... 随着金葡菌对畜牧业破坏性增加和耐药性增强,人们对研发靶向金葡菌的有效保护性疫苗日趋迫切。为开发出更具免疫保护效力的抗菌疫苗,本研究首次利用Esx A、Esx B联合细菌鞭毛蛋白Flic,即制备出融合蛋白ABF,并在版纳微型猪近交系皮肤创伤模型上做实验验证。实验用版纳微型猪分为4组:对照组、模型组、实验组Ⅰ和实验组Ⅱ。结果发现单独使用Esx B蛋白与对照组微型猪的免疫指标之间差距并不显著,而预先经融合蛋白ABF免疫的微型猪,检测到其外周血免疫因子Ig G总量表达显著上升,即机体体液免疫水平提高,同时融合蛋白ABF可以激活T细胞。此外其脾脏淋巴细胞CD8a、CD3e和IFN-γ阳性率均显著增高,皮肤创伤修复速度加快。总之,本实验研究成果证实融合蛋白ABF可作为潜在有效的金葡菌亚单位疫苗,为防治金葡菌提供新的研究途径。 展开更多
关键词 金葡菌 疫苗 EsxA esxb FLIC
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