漏芦通过TLR4/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的小鼠乳腺上皮细胞炎症反应

为探讨漏芦醇提物(RUEE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(HC11细胞)的抗炎作用及机制,试验利用RUEE(80μg/mL)、LPS(1μg/mL)单独处理以及RUEE(80μg/mL)+LPS(1μg/mL)共处理HC11细胞,采用荧光定量PCR检测炎性细胞因子及Toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平,采用Western blotting检测核转录因子κB(NF-κB)通路关键因子的蛋白表达量。结果表明:LPS诱导可明显提高HC11细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、环氧合酶-2(COX-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)的mRNA表达水平(P<0.05);明显上调TLR4 mRNA表达及NF-κB p65和NF-κB抑制蛋白α(IκBα)的磷酸化水平(P<0.05)。RUEE预处理可显著降低LPS诱导的HC11细胞TNF-α、COX-2、IL-6、IL-1β的mRNA表达(P<0.05);显著下调TLR4 mRNA表达及NF-κB p65和IκBα的磷酸化水平(P<0.05)。由此可知漏芦醇提物可通过抑制TLR4/NF-κB通路的激活,下调相关炎性细胞因子的过度表达而缓解LPS诱导的乳腺上皮细胞炎症反应。

祁州漏芦蜕皮甾酮类化学成分的研究

从祁州漏芦[Rhaponticum uniflorum(L.)DC.]的根中,分离出三个蜕皮甾酮类化合物Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,其中Ⅱ根据UV,IR,MS,^(13)CNMR,~1HNMR,~1H-~1HCOSY,~1H-~1HNOESY,~1H-^(13)C COSY,及CD谱确定其结构为(20R,22R,24S)-2β,3β,11α,14α,20,22,24-heptahydroxy-5β-cholest-7-en-6-one,为一新化合物,命名为漏芦甾酮(rhaponfisterone)。化合物Ⅰ和Ⅲ分别鉴定为蜕皮甾酮(ecdysterone)和土克甾酮(turkesterone)。

漏芦对大鼠肝细胞CYP3A1酶活性及其mRNA表达的影响

目的:研究漏芦对大鼠肝细胞细胞色素P4503A1(CYP3A1)酶活性及其mRNA表达水平的影响。方法:以大鼠原代肝细胞为研究对象,漏芦实验组分别加入不同浓度(15.6,31.2,62.4 mg/ml)药物处理48 h,用红霉素N-脱甲基酶(erythromycin N-demethylase,ERD)活性反映CYP3A1酶活性;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定药物作用前后酶基因mRNA表达的相对水平变化。结果:漏芦作用后,CYP3A1酶活性及相应mRNA的表达呈浓度依赖性抑制。药物在15.6,31.2,62.4 mg/ml浓度下对CYP3A1酶活性的抑制率分别为26.4%,44.2%,65.4%;对CYP3A1 mRNA表达水平的抑制率分别为29.4%,49.8%,56.0%。结论:漏芦浓度依赖性抑制CYP3A1酶活性,在转录水平下调大鼠肝细胞CYP3A1的表达。

祁州漏芦乙醇提取物益智作用的实验研究

目的研究漏芦乙醇提取物 (AEL)对正常大鼠及多种记忆障碍模型动物的学习记忆功能的改善作用 ,并初步探讨其作用机制。方法采用多种行为学方法考察AEL的益智作用 ,同时利用氧化震颤素致小鼠震颤及多种动物急性脑缺血实验探讨其作用机制。结果AEL能显著促进正常大鼠主动回避式条件反射的形成 ;明显改善戊巴比妥钠致小鼠记忆获得障碍、NaNO2 致小鼠记忆巩固障碍、东莨菪碱致小鼠空间辨别性障碍 ;增强氧化震颤素所致小鼠震颤的强度 ;剂量依赖性地延长急性脑缺血小鼠存活时间、降低急性脑缺血大鼠脑含水量。结论AEL具有促进学习记忆功能的作用 。

祁州漏芦乙醇提取物对D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响

目的研究漏芦乙醇提取物对D 半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响以及对脑组织中过氧化脂质及脂褐质含量的影响。方法采用一次性被动回避式条件反射的方法 (跳台法及避暗法 )测定动物的学习记忆能力 ,用生化学方法测定脑组织过氧化脂质及脂褐质含量。结果漏芦乙醇提取物剂量依赖性地减少D 半乳糖致衰老小鼠跳台及避暗错误反应次数并延长错误反应潜伏期 ;显著减少衰老小鼠脑组织中过氧化脂质及脂褐质的含量。结论实验结果提示漏芦乙醇提取物具有抗衰益智作用。其改善记忆障碍作用可能与抗自由基过氧化 。

漏芦乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路的影响

为了探讨漏芦乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路的影响,试验以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,先利用CASY细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(质量浓度分别为25,50,100,200,400μg/mL)作用于奶牛乳腺上皮细胞后乳腺上皮细胞的活力和增殖能力,选择添加对细胞生长增殖不受抑制即对细胞无毒性的漏芦乙醇提取物浓度来研究其对奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路信号分子表达的影响。采用确定浓度的漏芦乙醇提取物处理细胞,然后用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路关键信号分子信号转导与转录激活因子5(STAT5)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、过氧化物酶增殖体激活受体γ(PPARγ)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)和葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因的mRNA表达水平,以及采用Western-blot技术检测奶牛乳腺上皮细胞泌乳信号通路关键信号分子的蛋白质表达水平。结果表明:较高剂量(200,400μg/mL)的漏芦乙醇提取物显著抑制了奶牛乳腺上皮细胞活力及增殖能力(P<0.05),因此选择25,50,100μg/mL的漏芦乙醇提取物来研究其对乳腺上皮细胞泌乳信号通路信号分子表达的影响;25,50,100μg/mL的漏芦乙醇提取物可显著提高细胞泌乳信号通路信号分子STAT5、mTOR、SREBP1、AKT1、GLUT1基因的mRNA表达水平(P<0.05)及p-STAT5、p-mTOR、SREBP1、p-AKT1、GLUT1蛋白质表达水平(P<0.05),但对PPARγ基因的mRNA表达及蛋白质的表达无显著影响(P>0.05)。说明漏芦乙醇提取物能通过调节泌乳信号通路关键信号分子的表达,进而促进奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖的合成。

中药漏芦提取工艺的优化

目的优化中药祁州漏芦的提取工艺。方法采用正交实验法,考察提取溶媒、提取次数和提取时间对提取效率的影响。以β-蜕皮甾酮含量为指标,采用HPLC法测定提取物含量。结果祁州漏芦的最佳提取工艺条件为用质量分数为70%的乙醇提取3次,第1次8倍量乙醇,提取1.5 h,第2次6倍量乙醇,提取1.0 h时,第3次4倍量乙醇,提取1.0 h。按照筛选出的最佳工艺条件进行了3次重复性实验,测得总β-蜕皮甾酮含量质量分数为0.84%,与预测值基本一致。结论所确定的最佳提取工艺可合理提取漏芦中的活性成分。

漏芦与漏芦花研究进展

中药漏芦与蒙药漏芦花为同一植物不同药用部位,但其功效不同,本文对其化学成分及药理作用进行综述,同时也为开发利用提供了一定参考。

漏芦对大鼠原代肝细胞细胞色素P4501A1酶活性及其mRNA表达的影响

目的研究漏芦对细胞色素P450A1酶活性及其mRNA水平的影响。方法以大鼠原代肝细胞为研究对象,实验组分别加入不同浓度(15.6,31.2,62.4 mg/ml)药物处理48小时,用氨基比林N-脱甲基酶(aminopyrence N-demethylase,ADM)活性反映CYP1A1酶活性;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定药物作用前后酶基因mRNA表达的相对水平变化。结果漏芦作用后,CYP1A1酶活性及相应mRNA的表达呈浓度依赖性抑制。药物在15.6,31.2,62.4 mg/ml对CYP1A1酶活性的抑制率分别为18.1%,46.9%,55.1%;对CYP1A1mRNA表达水平的抑制率分别为14.8%,18.1%,31.0%。结论漏芦浓度依赖性抑制CYP1A1酶活性,在转录水平下调大鼠肝细胞CYP1A1的表达。

祁州漏芦中的植物甾酮类成分

自祁州漏芦 (Rhaponticumuniflorum (L .)DC .)的根中分离得到 4种植物甾酮类成分 ,根据理化常数和波谱数据鉴定为蜕皮甾酮 (ecdysterone) (1) ,筋骨草甾酮C(ajugasteroneC) (2 ) ,蜕皮甾酮 3 O β D 葡萄糖苷 (ecdysterone 3 O β D glucopyranoside) (3) ,蜕皮甾酮 2 5 O β D 葡萄糖苷(ecdysterone 2 5 O β D glucopyranoside) (4) ,其中化合物 3,4。

漏芦对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因表达的影响

为探讨漏芦对泌乳动物乳腺酪蛋白合成的调节机制,利用细胞活力分析仪检测漏芦乙醇提取物(25、50、100、200、400、600、800μg/mL)对奶山羊乳腺上皮细胞活力和增殖能力的影响,并选择不抑制细胞生长增殖的乙醇提取物剂量,研究其对奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因mRNA表达的影响;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测乳腺上皮细胞αs1-酪蛋白(CSN1S1)、αs2-酪蛋白(CSN1S2)、β-酪蛋白(CSN2)、κ-酪蛋白(CSN3)、信号转导与转录激活因子5(STAT5)、蛋白质酪氨酸激酶2(JAK2)、哺乳动物雷帕霉素蛋白(mTOR)、真核细胞翻译启动因子4E结合蛋白1(4EBP1)及核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)基因的mRNA表达水平。结果表明,较高剂量(200~800μg/mL)的漏芦乙醇提取物明显抑制了奶山羊乳腺上皮细胞的活力和增殖能力(P<0.05),故后续试验添加25、50、100μg/mL的漏芦乙醇提取物处理乳腺上皮细胞;漏芦乙醇提取物可明显上调细胞酪蛋白基因CSN1S1、CSN1S2、CSN2、CSN3及酪蛋白合成相关基因STAT5、JAK2、mTOR、S6K1的mRNA表达水平(P<0.05),但显著下调了4EBP1基因的mRNA表达水平(P<0.05)。由此可见,漏芦乙醇提取物能通过调节奶山羊乳腺上皮细胞酪蛋白合成相关基因的表达,进而促进乳腺细胞酪蛋白的合成。

漏芦乙醇提取物对奶山羊乳腺上皮细胞乳成分合成的影响

以体外培养的奶山羊乳腺上皮细胞为模型,利用β-酪蛋白、甘油三酯及乳糖/半乳糖检测试剂盒测定漏芦乙醇提取物处理的乳腺上皮细胞培养液中β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖含量;采用荧光定量RT-PCR检测β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖合成代谢相关酶和蛋白因子mRNA表达的变化。结果显示,25、50、100μg/ml的漏芦乙醇提取物以浓度依赖的方式显著提高乳腺上皮细胞合成分泌β-酪蛋白、甘油三酯及乳糖含量(P<0.05)及乳腺上皮细胞中乳成分合成代谢相关酶和蛋白因子的mRNA表达水平(P<0.05)。实验结果表明漏芦乙醇提取物能促进奶山羊乳腺上皮细胞合成分泌β-酪蛋白、甘油三酯和乳糖,并能提高乳腺上皮细胞乳成分合成代谢相关酶和蛋白因子的基因表达,进而影响奶山羊乳腺上皮细胞乳蛋白、乳脂和乳糖的合成。

漏芦抗肺癌活性部位的筛选

目的筛选漏芦Rhaponticum uniflorum(L.)DC.体内外抗肺腺癌的活性部位,并对其化学成分进行解析。方法漏芦经有机溶媒提取,其残渣再经水提,共5个活性部位与人肺腺癌细胞A549和H1299共孵育,从中筛选抗肺癌活性最强的部位;并观察它们对Lewis接种C57BL/6J荷瘤小鼠抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数的影响,验证其体内抗肺癌作用。采用UPLC-Q-TOF-MS-MS对该活性部位进行解析。结果漏芦抑制A549细胞增殖作用的提取物依次为正丁醇(半数抑制浓度IC_(50)为205.43μg/m L)>乙酸乙酯(IC_(50)为244.22μg/m L)>二氯甲烷(IC_(50)为350.40μg/m L);漏芦抑制H1299细胞增殖作用的提取物依次为正丁醇(IC_(50)为315.87μg/m L)>乙酸乙酯(IC_(50)为356.13μg/m L)>二氯甲烷(IC_(50)为416.13μg/m L)。漏芦提取物抑制Lewis荷瘤小鼠肿瘤增长的作用排序为正丁醇高剂量组(37.43%)>正丁醇低剂量组(32.91%)>乙酸乙酯高剂量组(25.87%)>乙酸乙酯低剂量组(21.15%)。漏芦抗肺癌活性部位的主要成分为三萜类、甾醇类和植物激素类等。结论漏芦体内外抗肺癌作用最强的部位为正丁醇部位,该部位主要的成分为以齐墩果酸和熊果酸为代表的三萜类,以β-谷甾醇和豆甾醇为代表的甾醇类,以β-蜕皮甾酮、漏芦素甲为代表的植物激素类。

漏芦挥发油成分分析

通过对漏芦挥发油中化学成分分析比较研究,为漏芦的开发利用提供依据.采用同时蒸馏-萃取法提取漏芦中的挥发油,并以气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对挥发油中的化合物进行分析鉴定.共鉴定出30个化合物,占其化学成分总含量的80.57%.漏芦挥发油中主要化学成分为萜类化合物.

高效液相色谱法测定蒙药漏芦花中绿原酸的含量研究

目的采用反相高效液相色谱法对蒙药漏芦花中的绿原酸含量进行测定。方法流动相为乙腈/0.4%磷酸（11：89）;检测波长327nm;流速1mL/min;柱温28℃。结果绿原酸在1.417~15.26 g/mL范围内与峰面积呈良好线性关系（r=0.9998）,平均回收率为100.93%,RSD=1.17%。结论该方法精密度、重复性、稳定性良好。可为蒙药漏芦花药材质量检控与评价提供实验依据。

祁州漏芦研究与应用概况

漏芦为传统中药,具有清热解毒、消痈下乳、舒筋通脉等功效,现代研究表明该药具有广泛抗肿瘤、抗癌、抗炎、镇痛、抗缺氧及抗疲劳作用。因其运用广泛且药效独特,相关制剂运用于临床,可发挥重要作用。本文对近几年漏芦的提取、分离、分析、应用等方面进行综述,旨在为重新认识和利用该药提供理论依据。

蒙药漏芦花质量标准研究

【目的】研究蒙药漏芦花的质量控制方法,为建立其药材质量标准奠定基础。【方法】采用薄层色谱方法鉴别漏芦花绿原酸、芹菜素;采用高效液相色谱（HPLC）分析方法,测定漏芦花中绿原酸成分的含量,其色谱柱：Kromat Universil C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相：甲醇—水—冰醋酸（体积比为15∶85∶0.85）,检测波长：326 nm,流速：1.0 m L/min,柱温：20℃。【结果】漏芦花薄层色谱供试品与对照品在相同的位置上显相同颜色斑点。绿原酸在0.044 66~0.446 6μg范围内呈良好的线性关系（r=0.999 8）,平均回收率为99.84%。【结论】所建立的方法简单、准确、重复性好,可用于蒙药漏芦花药材的质量控制。

乳核内消颗粒薄层鉴别方法的研究

[目的]建立乳核内消颗粒的薄层鉴别方法,为其质量标准的制定提供依据。[方法]采用薄层鉴别方法分别对乳核内消颗粒中的浙贝母、漏芦、柴胡进行定性鉴别。[结果]在薄层色谱中,各供试品溶液与其对照药材溶液在相对应的位置上显相同的斑点,且斑点清晰明显,阴性对照相应位置上没有相同的斑点。[结论]该方法方便可行,专属性强、重现性好,可用于乳核内消颗粒质量标准的控制。

蒙药漏芦花的化学成分研究

目的:研究蒙药漏芦花的化学成分。方法:采用系统溶剂提取法,结合各种色谱分离技术,理化性质和光谱数据鉴定结构。结果:从祁州漏芦花里分离的到3个单体成分,1个为酚酸类化合物,2个为黄酮类化合物。结构鉴定为:①原儿茶酸,②[5,-羟基-7,,8,-(并2,,-甲基-4,,-二甲基-2'''6,,二四氢呋喃-5''-O-6,,)]-3-(1''3,-戊二炔)-4-羟基-7-O-14,,8-O-13'-9-羟基-黄酮木脂素,③槲皮素。结论:所得3种化合物均为首次从祁州漏芦花中分离得到。

祁州漏芦根的化学成分研究

目的研究菊科植物祁州漏芦Rhaponticum uniflorum根的化学成分。方法采用系统溶剂提取法结合各种色谱分离技术、理化性质和光谱数据鉴定结构。结果从祁州漏芦根里分离得到11个单体成分,其中6个噻吩类,2个甾醇类,1个五环三萜类,2个长链脂肪酸类。结构鉴定为牛蒡子醛（arctinal,1）、牛蒡子酮-b（arctinone-b,2）、7-chloroarctinone b（3）、5-methoxyl-5′-（1-propinyl）-2,2′-dithiophene（4）、β-谷甾醇（β-sitosterol,5）、豆甾醇（stig-masterol,6）、齐墩果酸（oleanolic acid,7）、棕榈酸（pal mitic acid,8）、E-7,9-diene-11-methenyl pal mitic acid（9）、5-me-thoxyl-2,2′-dithiophene（10）和5-（4-acetoxyl-1-butynyl）-2,2′-dithiophene（11）。结论化合物4和8-11是首次从该属植物中分离得到。