Fecal metabolomics reveals the positive effect of ethanol extract of propolis on T2DM mice

A large number of studies have shown that propolis has positive effects in the treatment of type 2 diabetes mellitus(T2DM).However,there are have only been a few reports that are based on an ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole-time-of-flight-mass spectrometry(UPLC-Q-TOF-MS)analysis of the fecal metabolomics of ethanol extract of propolis(EEP)in the treatment of T2DM.The present investigation was designed to screen potential biomarkers of T2DM by the metabonomic method and to explain the possible anti-diabetes mechanism of EEP according to the changes in the biomarkers.The results showed that EEP improved the body weight(BW)of T2DM mice,lowered blood sugar levels,and significantly restored blood biochemical indicators related to T2DM,such as fasting insulin(FINS),homeostasis model assessment of insulin resistance(HOMA-IR),aspartate transaminase(AST),and alanine aminotransferase(ALT).Liver pathology showed that EEP reversed liver damage caused by T2DM.Metabolomics data identified 27 potential biomarkers in fecal samples.EEP effectively regulated the dysfunction in the metabolic pathways of glycerophospholipids,sphingolipids,riboflavins,and sterol lipids caused by T2DM.In summary,our research results revealed positive effects of EEP in the treatment of T2DM and provided potential candidate markers for further research and in the clinical treatment of T2DM.

蜂胶乙醇提取物(EEP)对豚鼠胸主动脉的舒张作用

目的:探讨蜂胶水提物(WEP)和乙醇提物(EEP)的血管舒张作用。方法:以离体豚鼠胸主动脉环为材料,采用离体实验方法记录血管收缩张力。结果:对于PE(PE,1μM)和KC1(60mM)预收缩的主动脉环,EEP可以剂量依赖地使其舒张。去除内皮后舒张作用减弱,所以这种作用是内皮依赖性的;使用NO合酶抑制剂N-硝基-L-精氨酸(L-NNA,10μM)、鸟苷酸环化酶抑制剂(methylene blue,10μM)或者前列腺素合成酶抑制剂(indomethacin,10μM)预处理,血管舒张作用也减弱。这提示EEP的作用可能与血管内皮释放的一氧化氮和前列腺素有关;K^+通道通用抑制剂TEA(tetraethylammonium chloride,1 mM)的处理对EEP的舒血管作用没有影响,显示EEP对豚鼠动脉环的舒张作用与K^+通道无关;另外,EEP能使CaCl_2的量效曲线下移,说明EEP可以抑制细胞外Ca^(2+)的内流,同时EEP还可以抑制细胞内Ca^(2+)的释放。结论:蜂胶乙醇提取物EEP能剂量依赖地引起离体豚鼠动脉环舒张。这种舒张作用与K^+通道无关,但受内皮NO-鸟苷酸环化酶途径和前列腺素调控,最终通过降低细胞内Ca^(2+)的浓度舒张血管。

不同季节中国蜂胶醇提物的化学成分及生物活性

季节是影响蜂胶化学组成和生物活性的生态因子之一。为了解季节对蜂胶品质的影响,以分别来自温带、亚热带和热带地区的不同季节中国蜂胶为材料,采用分光光度法测定其色度、特定吸收率(E1cm)以及总酚、总黄酮、黄酮-黄酮醇和黄烷酮的含量;并测定蜂胶醇提物的抗氧化及抑菌活性。实验结果相关性分析表明:季节对中国蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)的化学组成有显著影响,中国EEP中总酚、总黄酮、黄酮-黄酮醇和黄烷酮的含量均在7～8月为最高,9月份化学成分含量大多最低,说明其品质在8月总体最好,而9月份,中国蜂胶品质最差。不同季节EEP的总酚和总黄酮含量差异极显著,总酚最大值为(243.87±152.13)mg/g,最小值为(187.25±146.45)mg/g,总黄酮最大值为(189.34±107.51)mg/g,最小值为(122±81.02)mg/g;且季节对EEP的抗氧化活性也有显著影响;EEP的E1cm值与清除DPPH自由基活性和总酚、总黄酮的含量有显著正相关性。而季节对中国EEP的抑菌性没有显著影响。因此,季节对中国蜂胶品质有较大影响。

蜂胶醇提液和水提液对急性炎症动物模型的作用

通过蜂胶醇提液和水提液对小鼠毛细血管通透性、大鼠急性关节炎、大鼠急性胸膜炎影响的实验研究,探讨蜂胶对急性炎症的影响,检测蜂胶水提液的抗炎效果.结果表明,蜂胶水提液和醇提液对急性炎症均有明显的抑制作用,但作用机理似乎有所不同.提示蜂胶发挥抗炎作用的主要成分除了黄酮类化合物之外还存在其它水溶性物质.

不同方法萃取蜂胶的黄酮含量及地区化差异

文中收集了我国9个地区16个品种的蜂胶样品,采用体积分数95%乙醇萃取法和超临界CO2萃取法获得蜂胶萃取物,测定蜂胶得率和总黄酮含量,将数据统计分析并进行地区差异化研究。将2种萃取方法进行比较发现,超临界法萃取的蜂胶的总黄酮含量显著低于乙醇萃取法。地区化差异实验表明,河北和云南地区的蜂胶中总黄酮含量和得率普遍较高;湖北、山东、湖南和海南地区的蜂胶中总黄酮含量和得率居中;黑龙江地区的蜂胶中总黄酮含量和得率普遍较低;河南地区及四川地区内不同蜂胶品种间的总黄酮含量和得率差异极显著。

蜂胶醇提物通过抑制caspase-12减轻氧化低密度脂蛋白诱导的巨噬细胞凋亡

目的:研究蜂胶醇取物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的巨噬细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养RAW264.7巨噬细胞,给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;5 mmol/L)或二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium,DPI;5μmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平。采用免疫印迹技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白caspase-12的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性减轻ox-LDL所致的巨噬细胞损伤,表现为细胞活力增加(P<0.01),凋亡率降低(P<0.05),且可抑制ERS诱导剂TM所引起的巨噬细胞活力下降和凋亡(P<0.05);与氧化应激抑制剂DPI相似,EEP可抑制ox-LDL诱导的氧化应激反应,表现为ROS和MDA生成减少(P<0.01),SOD活性增加(P<0.05);EEP显著抑制ox-LDL和TM所诱导的caspase-12活化(P<0.05);与ox-LDL组比较,PBA和DPI预处理组caspase-12活性也受到明显抑制(P<0.01)。结论:EEP可减轻ox-LDL所诱导的RAW264.7巨噬细胞凋亡,其机制可能与抑制氧化应激和caspase-12活化有关。

中国不同地区蜂胶的抑菌性研究

蜂胶具有显著的抑菌性,常被做成药品或保健品.为了解中国蜂胶的抑菌性,本实验以采自中国23个省的29种蜂胶(根据采集地气候区域分为5类)为研究对象,分别提取获得蜂胶醇提物(EEP),并测定了EEP对枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、毛霉、青霉、曲霉、根霉的抑菌圈大小和最小抑菌浓度,比较不同气候区域蜂胶的抑菌性差异.结果表明,EEP对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌均有明显的抑菌性,平均抑菌圈直径分别为:9.88mm±1.47 mm、8.75 mm±1.56 mm和10.01 mm±0.65 mm,EEP对真菌的抑菌性最强,其次为革兰氏阳性菌,最弱为革兰氏阴性菌;9个菌种中,EEP对变形杆菌的抑菌性最差,对根霉的抑菌性最好;不同气候区域蜂胶的EEP抑菌性没有显著差异.

蜂胶醇提物脂质体制备及表征

以大豆卵磷脂和胆固醇为膜材,采用薄膜分散-动态高压技术制备蜂胶醇提物（ethanol extract of propolis,EEP）脂质体,通过粒度分析仪、透射电子显微镜、清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、低温贮存实验等进行性状表征。结果表明：制备的蜂胶脂质体为大小均匀的球形,粒径为（78±14）nm,包埋率和稳定性分别达到（97.80±5.21）%和（2.53±0.05）%。4℃条件下保存90 d和180 d后,包埋率分别下降了16.74%和28.77%,分散系数分别增加了6.61%和14.32%,DPPH自由基清除指数分别为2.78和2.71;高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）分析贮存180 d后EEP脂质体中7种物质变化分别为1.08%~6.63%,低于EEP的5.55%~19.42%,说明脂质体对EEP中的活性物质具有一定的保护作用。

CO_2超临界和乙醇提取蜂胶对大鼠降血脂效果

试验用健康雄性SD大鼠,给予高脂颗粒饲料喂饲后第9 d,大鼠眶静脉取血,测定血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和高密度脂蛋白(HDL-C)值。高脂血症动物模型成功后,随机分为对照组1(给予聚乙二醇400)、超临界蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)、超临界蜂胶中剂量组(300 mg/kg BW)、超临界蜂胶低剂量组(150 mg/kg BW);对照组2(给予食用油)、乙醇提取蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)、乙醇提取蜂胶中剂量组(300 mg/kg BW)、乙醇提取蜂胶低剂量组(150 mg/kg BW)8个组。分组后连续4周蜂胶灌胃,同时各组大鼠继续给予高脂颗粒饲料喂饲,之后各组大鼠取血测定TC、TG和HDL-C。结果表明:喂蜂胶28 d后,只有超临界蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)的TG值和乙醇提取蜂胶高剂量组(600 mg/kg BW)的TC值分别与相对照组差异显著,其它指标都差异不显著。

HPLC测定两种中国蜂胶醇提物化学组成

建立了同时测定蜂胶醇提物(EEP)中23种多酚类化合物的高效液相色谱(HPLC)分析方法,并用该法测定了分别采自山东济宁和云南西双版纳的EEP。采用ZORBAX Eclipse XDB C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长256和280 nm,进样量20μL,柱温35℃。结果表明,所用的分离条件可以使混合对照品及EEP均实现良好分离。通过对比保留时间和紫外吸收光谱,从山东蜂胶中鉴定出20种化合物,云南蜂胶中鉴定出14种化合物。两地EEP的HPLC图谱相似度分别为0.417(256 nm)和0.499(280 nm),两者化学成分差异巨大。山东济宁和云南西双版纳分别地处温带和热带地区,不同的气候及植被可能是这种差异的主要原因。

蜂胶提取液对草菇及其污染菌抑制作用的研究

以云南蒙自的粗蜂胶为材料,采用75%乙醇、95%乙醇、75%乙酸乙酯、95%乙酸乙酯浸提,测定蜂胶提取液的黄酮含量,并进行草菇及分离获得的污染菌的抑制作用研究。结果表明,95%乙酸乙酯提取效果较佳,其可溶物含量为60.3%,黄酮含量为6.23mg/mL;分离获得的草菇污染菌初步鉴定为革兰氏阳性细菌和青霉属菌。蜂胶提取液对草菇及污染菌均有一定的抑制作用,抑制强弱为:细菌>草菇>霉菌。相关性分析表明,草菇、霉菌和细菌的抑制率与黄酮含量的相关系数均大于0.9,有较强的相关性。

蜂胶醇提物通过抑制C/EBP同源蛋白表达减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞凋亡

目的:研究蜂胶醇提物(ethanol extract of propolis,EEP)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的血管内皮细胞凋亡的抑制作用,并探讨可能的分子机制。方法:体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),给予EEP(7.5、15和30 mg/L)、4-苯丁酸(4-phenylbutyric acid,PBA;4 mmol/L)预处理1 h,再加入ox-LDL(100 mg/L)或衣霉素(tunicamycin,TM;4 mg/L)继续培养24 h。分别采用MTT法和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞活力和凋亡情况;试剂盒测定培养液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)和细胞内caspase-3活性。分别采用Western blot和real-time PCR技术检测内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)凋亡途径关键蛋白C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bcl-2的表达变化。结果:与ERS抑制剂PBA相似,EEP呈剂量依赖性地减轻ox-LDL所诱导的HUVECs损伤,表现为细胞活力增加(P<0.01或P<0.05),LDH漏出、凋亡率和caspase-3活性降低(P<0.05或P<0.01),且可抑制ERS诱导剂TM所致的HUVECs活力下降(P<0.05),以及LDH漏出、细胞凋亡率和caspase-3活性增加(P<0.05或P<0.01);与PBA相似,EEP可抑制ox-LDL所诱导的CHOP上调和Bcl-2下调(P<0.05或P<0.01);另外,与TM组比较,EEP预处理组CHOP蛋白和mRNA表达上调也受到明显抑制(P<0.05或P<0.01)。结论:EEP可减轻oxLDL所诱导的HUVECs凋亡,其机制可能与抑制CHOP介导的ERS凋亡途径有关。

不同取胶方式对蜂胶品质影响的比较研究

采用塑料取胶器、尼龙纱网、覆布以及从框梁缝隙刮取4种取胶方式采集蜂胶,分析不同取胶方式所得蜂胶样品的乙醇提取物含量、8种黄酮含量、总黄酮含量。结果表明:取胶方式对蜂胶品质的影响很大;尼龙纱网方式收集所得蜂胶的品质最好,3个品质指标均极显著的优于其他取胶方式;塑料取胶器和从框梁缝隙处刮取的蜂胶品质次之,两种取胶方式间无显著差异但都显著的优于覆布取胶;采用覆布方式收集所得蜂胶的品质最差。由此提示,通过缩小取胶器空隙可以提升所采集蜂胶品质。

巴西绿蜂胶乙醇提取前后挥发性成分的分析比较

将巴西绿蜂胶原胶制备出乙醇提取液及蜂胶渣,采用超声波辅助萃取对巴西绿蜂胶原胶、乙醇提取液及醇提后蜂胶渣中的挥发性成分进行提取,GC-MS分析,比较其在化学组成及含量上的差异。分析鉴定出蜂胶原胶挥发性成分中主要活性物质14种,主要是芳香酸及烯萜类化合物;蜂胶乙醇提取液及蜂胶渣挥发性成分中主要活性物质分别为14种和11种,主要为烯萜类化合物和有机酸酯类,蜂胶乙醇提取物中主要挥发性物质还含有烷烃类化合物。结果表明,蜂胶原胶、蜂胶乙醇提取液及蜂胶渣中的挥发性成分的化学组成有一定的相同性也存在一定的差异,但其含量明显不同并且存在一定的转化关系。

蜂胶醇提物的挥发性成分分析

本研究采用顶空-固相微萃取法(HS-SPME)和气相色谱-质谱(GC-MS)比较分析了中国和马来西亚醇提蜂胶(EEP)的挥发性成分。结果显示,中国醇提蜂胶的挥发性成分中检测到60种物质,其中姜黄烯、雪松烯、苯乙醇、乙酸苯乙酯和柏木烯含量较高;马来西亚醇提蜂胶挥发性成分中检测到29种物质,其中苯甲醛、萘、2-戊基呋喃、2-甲基萘和可巴烯含量较高;中国醇提蜂胶的挥发性成分含量较之马来西亚醇提蜂胶高出约10倍;二者挥发性成分之间的共有物质为乙醇、苯乙烯、柏木烯、苯甲醇和4-乙基-2-甲氧基苯酚,但含量明显不同。

蜂胶乙醇提取物抗氧化特性研究

通过测定过氧化值（POV值）,考查蜂胶乙醇提取物对猪油、菜籽油、花生油、大豆油4种油样的抗氧化效果,结果表明：蜂胶乙醇提取物对于以上4种油样都具有抗氧化的作用,添加0.5%蜂胶乙醇提取物的抗氧化能力是添加0.5%维生素E的2-3倍.

蜂胶提取物对荷瘤小鼠肿瘤免疫系统的影响研究

目的观察蜂胶提取物对荷瘤小鼠免疫系统的影响。方法通过将荷瘤小鼠移植S180肉瘤,观察蜂胶提取物对荷瘤小鼠NK细胞活性,淋巴细胞增殖以及淋巴细胞IL-2诱生的影响。结果蜂胶提取物对NK细胞杀伤活性有明显增强作用,能够显著提高淋巴细胞增殖能力和IL-2的含量(P<0.01)。结论蜂胶提取物能够显著提高荷瘤小鼠免疫系统的活性。

两种工艺下蜂胶中活性成分及抗氧化活性的比较

采用乙醇浸提与超临界CO2流体萃取两种工艺分别萃取粗蜂胶,比较两者提取率,利用高效液相色谱法分别分析两种工艺下蜂胶提取物黄酮成分的差别,气相色谱法分别分析两种工艺下蜂胶提取物萜烯成分的差别,并从DPPH自由基清除能力和抗油脂氧化能力两个指标分别对两者进行了抗氧化活性的研究和比较。实验发现超临界萃取蜂胶的萃取物得率明显要高于乙醇一次浸泡的提取物得率,接近并略小于乙醇二次浸泡的提取物得率;蜂胶乙醇提取物和蜂胶超临界萃取物在黄酮及萜类化合物种类及含量上有明显差异,蜂胶超临界萃取物中只有两种黄酮,即高良姜素、苛因,总黄酮含量3.17%,比蜂胶乙醇提取物中的总黄酮含量16.32%少得多;蜂胶超临界萃取物中的萜类化合物总含量18.72%是蜂胶乙醇提取物中萜类化合物总含量7.72%的2倍多。蜂胶超临界萃取物具有较强的DPPH清除率,蜂胶乙醇提取物抗猪油氧化能力较高。

不同方法提取的蜂胶液调节血脂作用的实验研究

测定和比较了蜂胶水提液、蜂胶醇提液对实验性高脂血症IRC小鼠血脂及脂蛋白的影响。结果表明,不同的蜂胶提取液均能有效抑制高脂血症ICR小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)的升高,蜂胶醇提液能显著提高血清高密度脂蛋白(HDL-C)浓度,表明蜂胶能够改善高脂血症小鼠的脂肪代谢。

花粉、蜂胶对糖尿病SD大鼠的影响

以花粉、蜂胶水提液、蜂胶醇提液为材料 ,测定和比较了花粉和不同提取方法的蜂胶对糖尿病SD大鼠血糖的影响以及给药 4周后对果糖胺、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、丙二醛、白蛋白、总蛋白的影响 ,以及各组动物的肾重 /体重。结果表明 ,花粉、蜂胶能在一定时间内控制血糖 ;花粉对肾脏具有一定的保护作用。花粉、蜂胶均能降低果糖胺、甘油三酯、总胆固醇、肌酐、丙二醛水平 ;减少总蛋白 ,白蛋白的消耗 ,说明花粉、蜂胶能改善糖尿病大鼠体内糖、蛋白质、脂肪代谢 ,减少糖尿病并发症的危害。