连翘叶乙醇提取物对APAP诱导肝损伤小鼠氧化应激及炎症因子的影响

【目的】研究连翘叶乙醇提取物(ethanolic extract of Forsythia suspense leaves,FSLE)对对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导的肝损伤作用及其机制。【方法】随机将48只昆明小鼠分为空白对照组(NC组)、APAP肝损伤模型组(LD组)、连翘叶乙醇提取物高剂量对照组、高、中、低剂量组(FSLE组、HFSLE+LD组、MFSLE+LD组、LFSLE+LD组),每组8只。建立肝损伤模型并给药,检测各组小鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)活性与谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和过氧化氢(H2O2)含量,苏木精伊红(HE)染色观察肝组织病理情况,检测TRAF2、NF-κB p65 mRNA、蛋白的表达水平和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)的水平。【结果】FSLE可降低肝损伤小鼠ALT、AST活性和MDA、H2O2含量(P<0.05),提高SOD活性和GSH含量(P<0.05),改善肝组织病理情况,降低TRAF2和NF-κB p65 mRNA、蛋白表达量和TNF-α、IL-1β、IL-6的水平(P<0.05)。【结论】FSLE通过改善氧化应激、调节TNF/NF-κB p65信号通路和抑制炎症反应发挥抗APAP肝损伤的作用。

超声波提取连翘叶总黄酮与总酚酸的实验研究

目的确定实验室超声波提取连翘叶总黄酮、总酚酸的最佳处理条件。方法采用正交设计法对甲醇浓度(A)、超声时间(B)、提取次数(C)和提取温度(D)4个因素进行考察,确定最优超声提取条件。结果因素D和C对测定指标均有显著性影响,因素A、B为不显著因素。结论以60%甲醇,超声时间10 m in/次,提取3次,提取温度45℃为最佳超声提取条件。

连翘叶中连翘苷类成分的提取工艺研究

目的研究连翘叶中苷类成分提取工艺的最佳方案。方法利用L9(34)正交实验表,对回流次数,料液比,乙醇浓度,回流时间进行研究。结果最佳方案为A2B2C3D2,即回流次数为3次,料液比为1∶10,乙醇浓度为85%,回流时间为60min。用最佳方案提取,测得连翘苷含量平均值为5.781%。结论乙醇浓度是影响连翘叶中连翘苷类成分提取工艺的最主要因素,用85%的乙醇提取效果最好。

连翘叶茶提取物对高脂血症小鼠体重增长和心脏脂质过氧化的影响

用饲喂高脂饲料的方法建立小鼠高脂血症模型,测定高脂血症小鼠体重、心指数以及心肌SOD、POD活性和MDA含量来探讨连翘叶茶提取物(FSE)对高脂血症小鼠体重增长和心脏的影响。结果显示FSE可以延缓高脂血症小鼠体重增长率,降低高脂血症小鼠的心指数异常升高,提高高脂血症小鼠心肌POD活性和降低MDA的生成,对高脂血症小鼠心脏具有一定的保护作用。

连翘叶提取物抗油脂氧化作用的实验研究

乙醇提取连翘叶中的抗氧化物质,以猪油为底物,用烘箱储藏法测定抗氧化活性。结果表明:连翘叶提取物具抗氧化作用。

基于网络药理学研究连翘叶提取物通过AMPK抗恩诺沙星诱导肝损伤的作用

【目的】运用网络药理学并通过体内试验研究连翘叶提取物(Forsythia suspense leaves extract,FSLE)治疗恩诺沙星(enrofloxacin,ENR)诱导的肝损伤(enrofloxacin induced liver injury,EILI)的作用机制。【方法】采用乙醇-酶法提取连翘叶有效成分,通过液相-质谱法(LC-MS)鉴定FSLE主要的化学成分。利用PubChem、Swiss ADME和Swiss Target Prediction数据库分析预测FSLE有效活性成分及作用靶点,通过GeneCards疾病数据库搜索EILI的作用靶点。运用STRING在线网站及Cytoscape 3.8.0软件构建FSLE治疗EILI的核心靶点,借助Metascape网站进行GO功能及KEGG通路富集分析,并用Cytoscape 3.8.0软件绘制“成分-靶点-信号通路”可视化网络。通过体内试验验证FSLE抗EILI的药理作用,采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测不同处理组腺苷酸激活蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)的表达,通过商业化试剂盒检测还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。【结果】结合LC-MS与各数据库分析得出FSLE活性成分有20种,对应靶点338个;EILI疾病靶点913个;药物-疾病交集靶点124个,包含FSLE治疗EILI核心靶点12个,KEGG通路20条,其中AMPK通路与FSLE治疗EILI密切相关。动物试验结果显示,FSLE可显著降低EILI小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine transferase,ALT)和谷草转氨酶(aspartate transferase,AST)活力(P<0.05)。FSLE可显著升高小鼠肝脏AMPK的基因和蛋白表达量水平(P<0.05)。与正常对照组相比,FSLE可显著降低小鼠肝脏组织中MDA和H_(2)O_(2)含量(P<0.05),显著升高GSH含量和SOD活力(P<0.05),抑制EILI诱导的肝脏氧化应激。【结论】FSLE可通过上调AMPK的表达抑制肝脏氧化应激发挥抗EILI的作用,对肝损伤药物的开发具有重要的意义。

连翘叶酶-醇提取物抗药物性肝损伤作用研究

【目的】研究连翘叶酶-醇提取物(FLEAE)抗药物性肝损伤(DILI)的作用及其机制。【方法】将48只昆明小鼠随机分为6组,每组8只,分别为正常对照组(NC)、FLEAE对照组(FC)、DILI模型组(DILI)及FLEAE高、中、低剂量治疗组(HFC、MFC、LFC),其中NC组和FC组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组小鼠腹腔注射300 mg/kg APAP注射液,每天2次,连续注射4 d,第5天开始NC组和DILI组小鼠灌胃生理盐水,FC、HFC、MFC和LFC组小鼠分别灌胃FLEAE 600,600,400和200 mg/kg,每天2次,连续灌胃3 d。最后1次灌胃12 h后,检测各组小鼠谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平及氧化应激指标谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢(H_(2)O_(2))和丙二醛(MDA)水平,肝组织切片苏木精伊红(HE)染色观察肝损伤情况。用网络药理学方法构建FLEAE调控DILI的靶点集,GO和KEGG分析靶点的基因功能及通路,筛选FLEAE抗DILI的核心靶点。qRT-PCR和Western Blot检测核心靶点PIK3CA及其下游凋亡抑制分子B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)基因和蛋白的表达水平。【结果】FLEAE可显著降低DILI组小鼠血液中的ALT和AST水平,改善药物性肝损伤。FLEAE可显著降低DILI小鼠的GSH和SOD水平,提高H_(2)O_(2)和MDA水平。网络药理学分析表明,FLEAE抗DILI靶点与凋亡过程的负调控、氧化应激等有关,主要富集于PI3K/Akt信号通路,可能通过PIK3CA发挥作用;qRT-PCR和Western Blot结果显示,FLEAE可能通过提高PIK3CA基因和蛋白的表达发挥抗DILI及抑制细胞凋亡的作用。【结论】FLEAE通过上调DILI中PIK3CA的表达抑制细胞凋亡和改善氧化应激,发挥抗DILI的作用。

连翘果、连翘叶乙醇提取物的抑菌活性及成分分析

为研究连翘果和连翘叶的抑菌活性及其活性成分的差异,采用滤纸片法测定连翘果、连翘叶乙醇提取物对三种细菌的抑菌圈直径,倍比稀释法测定了两种样品对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度,并分析了两种样品对金黄色葡萄球菌的生长曲线及培养液中大分子物质和碱性磷酸酶的影响。采用气质联用分析了连翘果、连翘叶乙醇提取物中的挥发性成分。结果表明,连翘果与连翘叶乙醇提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均有抑制效果,其中连翘叶乙醇提取物对三种细菌的抑菌圈直径分别为(12.7±1.2)、(15.0±0.8)、(14.7±0.7) mm,均大于连翘果乙醇提取物;连翘果、连翘叶乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度分别为6.25、3.125 mg/mL;连翘果、连翘叶乙醇提取物可以破坏细胞壁、细胞膜的完整性,使培养液中核酸等大分子物质以及碱性磷酸酶含量增加,并抑制金黄色葡萄球菌的生长繁殖,且连翘叶乙醇提取物的抑制作用大于连翘果乙醇提取物。气质联用分析发现连翘果乙醇提取物中主要包括醇类(38.55%)、酚类(14.00%)、酮类(11.07%)等物质;连翘叶乙醇提取物中主要包括醇类(34.97%)、烯烃类(12.71%)、酚类(12.26%)、烷烃类(11.05%)等;连翘果、连翘叶乙醇提取物中醇类、酚类、酮类、醛类、烷烃类物质对其抑菌活性有较大贡献,且其抑菌活性的差异主要与这些物质的种类和含量有关。

十堰地区连翘叶提取物的抑菌和抗氧化活性研究

试验旨在研究十堰地区野生连翘叶提取物的抗氧化和抑菌活性。试验采用回流法提取连翘叶,通过测定DPPH·、OH·和ABTS^(+)·清除能力,研究不同浓度连翘叶水提取物的体外抗氧化活性。使用牛津杯法、倍比稀释法测定连翘叶提取物对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性。结果表明,连翘叶水提物清除DPPH·、OH·和ABTS^(+)·的IC_(50)值分别为1.29、100.71和16.30 mg/L;阳性对照VC清除DPPH·、OH·和ABTS^(+)·的IC_(50)值分别为6.23、388.19和47.70 mg/L;连翘叶水提物对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌均具有抑制作用,对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌和大肠杆菌的最低抑菌浓度(MIC)分别为0.100、0.100、0.200 g/L。研究表明,十堰地区野生连翘叶提取物具有较好的体外抗氧化和抑菌活性,可为该地区野生连翘叶功能性饲料添加剂的开发利用提供参考。