川西小黄菊HPLC指纹图谱建立及7种成分含量测定

目的建立川西小黄菊HPLC指纹图谱,并测定绿原酸、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素、芹菜素的含量。方法分析采用Agilent ZORBAX Extend C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,0.5μm);流动相0.5%磷酸-乙腈,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温35℃;检测波长350 nm。再进行主成分分析、偏最小二乘法判别分析和聚类分析。结果14批样品指纹图谱中有12个共有峰,相似度0.761~0.975。7种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)≥0.9991),平均加样回收率84.00%~105.11%,RSD 1.28%~2.86%。各批样品聚为3类,发现7种差异成分,包括峰4(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)、12(芹菜素)、9(芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷)、8、11(木犀草素)、5(木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷)、2。结论该方法精密稳定,专属性强,重复性好,可用于川西小黄菊的质量控制。

HPLC-FP法同时测定新品富硒竹笋中10种核苷类成分的含量

目的:建立同时测定不同品种富硒竹笋中胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟苷、胸苷、腺苷10种核苷类化合物含量的方法。方法:运用HPLC法同时测定21种不同品种竹笋的核苷类化合物含量,色谱柱为InertsilODS-3C_(18),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),检测波长为260nm,流速为0.8 mL·min~(-1),柱温为30℃,进样量为20μL。绘制21种富硒竹笋的指纹图谱进行相似度评价,确定共有峰,并用主成分分析、相关性分析和聚类分析对21种不同富硒竹笋的核苷类化合物含量测定结果进行分析。结果:10种核苷类成分在30 min内达到分离,线性关系良好(R2≥0.9990),精密度、稳定性、重复性、准确度试验RSD均小于2%。不同品种富硒竹笋中10种核苷类成分含量与结构比差异明显,并且核苷类化合物成分指标互相间存在着不同程度的相关性。通过主成分分析,提取了4个主成分,并确定了胸苷、胸腺嘧啶、腺苷、鸟苷为4项核心指标,可用于评价不同品种富硒竹笋的品质;通过相关性分析,得出尿嘧啶与胞苷、鸟苷与胸苷、胸苷与腺苷等指标间相关性较高,指标之间的含量会互相影响;通过聚类分析,得出新品富硒竹笋主要集中为一类,市场上常见的富硒竹笋主要分为两类。结论:该实验方法操作快速、简便,重现性好,可用于21种富硒竹笋中10种核苷类化合物的含量测定。同时,测定结果为竹笋的后期高效开发和利用提供理论依据。

HPLC-MS/MS法测定盐酸拉贝洛尔中潜在基因毒性杂质

为了更好地控制盐酸拉贝洛尔中潜在的基因毒性杂质,保证用药安全,建立了高效液相色谱-质谱(HPLC-MS/MS)法检测盐酸拉贝洛尔中潜在遗传毒性杂质N-亚硝基拉贝洛尔。液相色谱条件:以Waters ACQUITY UPLC CSH C_(18)(150 mm×3.0 mm,1.7μm)为色谱柱,流动相A为0.01 mol/L甲酸铵-0.1%甲酸水溶液,流动相B为乙腈溶液,梯度洗脱,流速为0.5 mL/min,柱温为50℃,进样体积为10μL。以电喷雾电离源为离子源,负离子模式,采用多反应监测,建立质谱条件,对盐酸拉贝洛尔中N-亚硝基拉贝洛尔进行定量检测。结果表明:N-亚硝基拉贝洛尔质量浓度在1.01~100.60 ng/mL范围内有良好的线性关系;低、中、高3个浓度的加样回收率(n=3)为96.84%~99.53%;检测限和定量限分别为0.01 ng/mL和0.03 ng/mL;6批盐酸拉贝洛尔样品中N-亚硝基拉贝洛尔的含量为0.37~0.79 ng/mL。所提出的方法灵敏度高、专属性强,可用于测定盐酸拉贝洛尔中的N-亚硝基拉贝洛尔,为盐酸拉贝洛尔的质量控制提供参考。

心脑欣片HPLC指纹图谱建立及7种成分测定

目的:建立心脑欣片HPLC指纹图谱,并测定红景天苷、酪醇、没食子酸、没食子酸乙酯、对香豆酸、咖啡酸和绿原酸的含量。方法:心脑欣片75%甲醇提取液的分析采用WondaSil C18-WR色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱;流速为1.0 mL/min;柱温为35℃;检测波长为275 nm;进样量为20μL。对心脑欣片HPLC指纹图谱进行聚类分析、主成分分析。以没食子酸为内标,采用一测多评法测定多种成分含量。结果:11批样品中HPLC指纹图谱中有24个共有峰,相似度均大于0.960。各批次样品分为3类,4个主成分累积方差贡献率达95.045%,7种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.995),平均加样回收率为96.76%~104.02%,RSD值为0.05%~1.48%。一测多评法结果与外标法接近。结论:该方法简单可靠、重复性好,可用于心脑欣片的质量控制。

HPLC法同时测定健腰密骨片浸膏粉中5种指标成分

目的:建立健腰密骨片浸膏粉的多成分定量分析方法,为评价浸膏粉中间体的质量提供依据。方法:采用HPLC法,以乙腈-磷酸盐缓冲液为流动相,梯度洗脱,测定健腰密骨片浸膏粉中5种成分的含量。结果:木兰花碱、丹酚酸B、朝藿定C、淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ5种成分在各自质量浓度范围内呈良好线性关系,r≥0.9997;5种化合物的平均回收率分别为100.47%、104.37%、95.38%、95.93%、96.66%。该方法的专属性、重复性均良好。结论:该分析方法准确、重复性好,可作为健腰密骨片浸膏粉的质量控制方法。

HPLC双波长法同时测定甘草药材中5种活性成分含量及主成分分析

目的:建立HPLC双波长法同时测定甘草中甘草苷、甘草素、异甘草苷、异甘草素和甘草酸含量,为甘草质量的综合评价提供参考。方法:采用Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以0.1%磷酸-乙腈为流动相,梯度洗脱,检测波长为248 nm和362 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。使用统计学软件SPSS 21.0对15批甘草的测定结果进行主成分分析。结果:5种活性成分分离效果良好,精密度、重复性、稳定性、线性关系、加样回收率和耐用性均良好。主成分分析可知,新疆甘草总体质量较好并且差异较小。结论:本法可同时测定5种成分的含量且可靠简便,结合主成分分析可为甘草质量的综合评价提供参考。

HPLC法测定五味子颗粒中7种木脂素成分的含量

建立了同时测定五味子颗粒中7种木脂素成分含量的高效液相色谱(HPLC)法。采用Poroshell 120 SB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,2.7μm)进行分离,四氢呋喃水-乙腈梯度洗脱,流速为0.6 mL/min,柱温为30℃,检测波长为220 nm,进样量为10μL。结果表明:该方法对五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子酯乙、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素的检测下限(LOD)分别为0.017、0.041、0.156、0.165、0.136、0.166和0.113μg/mL,线性关系良好,相关系数(r)均大于0.9999,平均加样回收率为98.1%~100.9%,相对标准偏差(RSD)均小于3.0%。因此,该方法重复性好、灵敏度高,所得含量关系可对五味子颗粒进行质量控制,特别是可为预防南五味子掺伪提供参考,也为其他含五味子制剂的质量标准修订奠定了基础。

不同品种红花HPLC指纹图谱及其化学成分差异性研究

目的采用HPLC指纹图谱结合化学模式识别评价不同品种红花Carthamus tinctorius L.质量。方法建立HPLC指纹图谱,采用HPLC-Q-TOF-MS法对共有峰进行鉴定,结合聚类分析、偏最小二乘判别分析进行质量评价,筛选差异成分。结果43批样品指纹图谱中有12个共有峰,鉴定出6-羟基山柰酚-3,6,7-三-O-β-D-葡萄糖苷、烟花苷等11种成分,相似度为0.919~0.998。不同品种样品聚为3类,9,12,13-三羟基-10-十八碳烯酸等6种成分为质量差异标志物。结论该方法可有效识别不同品种红花成分差异,为该药材选育及质量控制提供依据。

复方金银花颗粒HPLC指纹图谱研究

目的探讨复方金银花颗粒的质量评价方法。方法采用InerSustain C18色谱柱,以甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1 mL/min,柱温为35℃,检测波长为320 nm,进样量为10μL。以葛根素为内标物,分析27批复方金银花颗粒样品,并进行相似度评价,确定共有峰,进行聚类分析和主成分分析。结果27批不同生产厂家不同批次的复方金银花颗粒有20个共有峰,相似度在0.907~0.991,经主成分分析,20个共有峰可综合为4个主成分,累计贡献率达到85.804%。结论本研究建立的复方金银花颗粒HPLC指纹图谱可以为其质量控制与评价提供参考。

HPLC法测定44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中有效成分含量

建立了一种同柱分离检测44%砜吡草唑·异丙隆悬浮剂中有效成分的高效液相色谱定量方法,确定的色谱条件为250 mm×4.6 mm ODS-C18不锈钢色谱柱和紫外检测器,柱温30℃,甲醇+水溶液(60︰40,体积比)为流动相,检测波长为220 nm。结果表明:在设定的质量浓度范围内,砜吡草唑和异丙隆的线性相关系数r均为0.9999,变异系数分别为1.07%和0.1421%,回收率分别为99.78%和99.50%,说明该方法操作简单、分离效果好,线性关系、准确度和精密度均符合分析的基本要求,可用于制剂产品中砜吡草唑和异丙隆的质量控制。

通窍鼻炎片HPLC指纹图谱研究及多指标成分定量分析

目的建立通窍鼻炎片(Tongqiao Biyan tablets,TBT)的HPLC指纹图谱及对升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素、白术内酯Ⅰ6个指标成分的定量分析方法。方法采用AlltimaTM C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.2%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长254 nm。利用中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立TBT对照指纹图谱,并进行相似度评价。同时对通窍鼻炎片中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、欧前胡素、异欧前胡素及白术内酯Ⅰ6个指标成分进行含量测定。结果建立的TBT对照指纹图谱中,共匹配出10个共有峰,通过对照品指认了其中6个指标成分:升麻素苷(1号峰)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷(2号峰)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(4号峰)、欧前胡素(7号峰)、异欧前胡素(8号峰)和白术内酯Ⅰ(10号峰),相似度介于0.991~0.998。上述6个成分分别在0.051~0.6054μg(R 2=0.9992)、0.0082~0.3273μg(R 2=0.9993)、0.0143~0.5703μg(R 2=1.0000)、0.0307~1.2288μg(R 2=1.0000)、0.0147~0.5897μg(R 2=1.0000)、0.0023~0.0918μg(R 2=1.0000)范围内与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为96.4%~102.2%,RSD均小于3.0%(n=9),精密度、稳定性、重复性试验RSD均小于3.0%。结论所建立的HPLC指纹图谱及含量测定方法稳定、可控,适用于通窍鼻炎片的质量控制。

基于HPLC-Q-Exactive-MS技术的蒙药壮西六味散化学成分解析

目的 基于高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱(HPLC-Q-Exactive-MS)对壮西六味散化学成分进行快速分析和鉴定。方法 采用Shim-pack GIST C_(18)色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速为0.35 mL/min,柱温为35℃,进样量为10μL,质谱采用电喷雾离子源,正、负离子扫描,扫描范围为m/z 110~1 200。结果 结合质谱数据和文献信息,在壮西六味散中鉴别出65个成分,包括16个生物碱类成分、11个黄酮类成分、14个有机酸类成分、6个色酮类成分、7个倍半萜类成分、4个脂肪酸类成分、3个氨基酸类成分、2个鞣质类成分、1个酚酸类成分、1个苯丙素类成分。结论 HPLC-Q-Exactive-MS法能快速鉴别壮西六味散中的化学成分,为壮西六味散的药效物质研究奠定基础。

Qualitative and Quantitative Analysis for the Quality Control of Rhizoma Coptidis by HPLC-DAD and HPLC-ESI-MS

For quality control purpose, an approach of fingerprinting and simultaneous quantification of five major bioactive constituents of Rhizoma Coptidis was established via a high-performance liquid chromatograph coupled with a photodiode array UV detector（HPLC-DAD） and an electrospray ionization mass spectrometer（HPLC-ESI/MS） The compounds were identified on the basis of the comparison of their mass spectra with literature data and those of standard samples and quantified by the HPLC-DAD method. Baseline separation was achieved on an XTerra C18 column（5 μm, 250 mm×4.6 mm i. d.） with linear gradient elution of formate buffer（consisting of 0.5% formic acid, adjusted to pH=4.5 with ammonia） and acetonitrile（consisting of 0.2% formic acid and 0.2% triethylamine）. The me- thod was validated for linearity（r^2〉0.9995）, repeatability（RSD〈3.1%）, intra- and inter-day precision（RSD〈1.8%） with recovery（99.9%-105.1%）, limits of detection（0.15-0.35 μg/mL）, and limits of quantification（0.53-0.82 μg/mL）. The similarities of 32 batches of Rhizoma Coptidis and their classification according to their manufacturers were based on the retention time and peak areas of the characteristic compounds. The five compounds were selected for quality assessment ofRhizoma coptidis via partial least squares analysis（PLS）.

基于HPLC-QAMS多指标成分定量测定联合化学计量学的甘露消渴胶囊质量评价

目的建立高效液相一测多评法(high performance liquid chromatography-quantitative analysis of multi-components by single marker,HPLC-QAMS)定量测定甘露消渴胶囊中毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B_(1)、东莨菪素、东莨菪苷、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B的含量,并结合化学计量学对3个厂家的产品质量进行评价。方法采用高效液相色谱仪,流动相选择乙腈-0.2%磷酸,色谱柱为Ultimate XB-C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)进行梯度洗脱。检测波长分别为330 nm(检测毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B_(1)、东莨菪素、东莨菪苷)、240 nm(检测莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷)和208 nm(检测泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B)。以马钱苷为内参物,建立其他10种成分的相对校正因子,并计算各成分含量。采用SPSS 26.0统计软件对甘露消渴胶囊中11种成分含量测定结果进行聚类分析和主成分分析。结果毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B_(1)、东莨菪素、东莨菪苷、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷、泽泻醇F、泽泻醇A、24-乙酰泽泻醇A、23-乙酰泽泻醇B分别在7.51~375.50、3.37~168.50、0.46~23.00、1.08~54.00、9.60~480.00、4.77~238.50、1.64~82.00、0.76~38.00、1.95~97.50、0.93~46.50和6.69~334.50μg·mL^(-1)范围内线性关系良好,相关系数(r=0.9991~0.9995),加样回收率及相应的RSD依次为99.11%(1.24%)、98.66%(1.45%)、97.71%(1.60%)、96.98%(0.93%)、100.20%(0.65%)、98.54%(1.18%)、97.90%(1.34%)、96.95%(1.07%)、98.47%(0.94%)、99.10%(0.89%)和100.08%(0.59%)。15批甘露消渴胶囊聚为3类,经主成分分析得4个主成分的累积贡献率达到85.338%。结论所建立的HPLC-QAMS法结合化学计量学可综合评价甘露消渴胶囊的质量。

南天竹根HPLC指纹图谱建立及其成分分析

目的建立南天竹根HPLC指纹图谱,分析鉴定其化学成分,并测定其总生物碱、小檗碱的含量。方法指纹图谱与小檗碱含量测定采用Agilent ODS-A色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.2%乙酸,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长365 nm。“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”进行图谱分析。紫外分光光度法测定南天竹根总生物碱的含量。UPLC-Q-TOF-MS/MS法、Peakview软件分析鉴定化学成分。主成分分析(PCA)、判别分析(DA)对色谱峰数据进行统计学分析。结果12批南天竹根指纹图谱中有9个共有峰,相似度大于0.920。通过与数据库比对,在南天竹根总提物中鉴定出41个化合物,已知化合物32个,其中23个为生物碱。南天竹根中总生物碱、小檗碱含量差异均较大,栽培南天竹根中两者含量普遍高于野生。PCA、DA分析发现,野生、栽培南天竹成分并无差异性。结论该方法准确、快捷,可用于评价南天竹根质量。

Published the papers of HPLC-MS analysis—Chemical drug

Sun Guoxiang, Ding Nan, Song Yuqing, Wang Zhen, Song Liangwei. Determination of Guaiacol salicylate in Guacetisal by HPLCmethod and qualitative identification of relevant substances by HPLC-MS

Published the papers of HPLC-MS analysis—Traditional Chinese medicine

Medicinal materials Ma Chenchen, Li Bailin, Ou Jie, Wang Jing, Zhao Junhong. Detection of N-acyl-homoserine lactones class signal molecules of quorum sensing secreted by bacteria using high performance liquid chromatography-mass spectrometry/ mass spectrometry

基于HPLC的秦艽药材特征指纹图谱构建及主成分分析

【目的】HPLC测定23批秦艽样品中3种环烯醚萜苷含量,并结合中药指纹图谱进行相似度评价,同时探究主成分分析。【方法】以收集7个不同产区和4个不同基原的秦艽药材,采用HPLC测定样品中马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的含量。色谱条件为C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%醋酸(9∶91),检测波长254 nm,流速1.0 mL/min,柱温25℃,进样量为10μL。另外,结合中药指纹图谱软件进行相似度评价;同时利用10个共有色谱峰的峰面积组成的数据矩阵进行主成分分析。【结果】23批不同产地及不同基原的秦艽、粗茎秦艽、麻花秦艽和小秦艽,马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷含量分别在0.112%~2.390%,0.079%~2.038%,0.426%~17.314%。马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷三者总含量在0.7146%~19.969%。该试验精密度、稳定性和重复性试验的RSD均≤3.0%,马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷加标平均回收率分别为:97.56%,100.06%,102.12%(RSD<1.0%,n=6)。另外,所有秦艽样品与共有模式下的对照指纹图谱其相似度在0.990~0.999,各批样品相似度较好。最后,根据共有色谱峰的峰面积组成的数据矩阵进行主成分分析,其结果表明,秦艽的2个主成分(PC1和PC2)分别表征了原始变量49.5%和22.2%的变异信息。【结论】所构建的HPLC检测方法,可用于秦艽药材的含量测定;同时因产地或基原不同,样品中马钱苷酸、獐牙菜苦苷和龙胆苦苷三种成分含量存在一定差异,但三者的谱峰的分离度和响应值较高且为共有峰,因此可确定为秦艽药材指纹特征图谱和主成分分析。

Applications of HPLC/MS in the analysis of traditional Chinese medicines

In China, traditional Chinese medicines （TCMs） have been used in clinical applications for thousands of years. The successful hyphenation of high-performance liquid chromatography （HPLC） and mass spectrometry （MS） has been applied widely in TCMs and biological samples analysis. Undoubtedly, HPLC/MS technique has facilitated the understanding of the treatment mechanism of TCMs. We reviewed more than 350 published papers within the last 5 years on HPLC/MS in the analysis of TCMs. The present review focused on the applications of HPLC/MS in the component analysis, metabolites analysis, and pharmacokinetics of TCMs etc. 50% of the literature is related to the component analysis of TCMs, which show that this field is the most popular type of research. In the metabolites analysis, HPLC coupled with electrospray ionization quadrupole time-of-flight tandem mass spectrometry has been demonstrated to be the powerful tool for the characterization of structural features and fragmentation behavior patterns. This paper presented a brief overview of the applications of HPLC/MS in the analysis of TCMs. HPLC/MS in the fingerprint analysis is reviewed elsewhere.

基于HPLC-QAMS/GC法联合多元统计分析及加权TOPSIS法评价广藿香质量

目的基于HPLC-QAMS/GC法多组分定量,建立多元统计分析及加权TOPSIS模型,对不同产地广藿香进行综合质量评价。方法HPLC-QAMS法同时测定新西兰牡荆苷、紫葳新苷Ⅱ、毛蕊花糖苷、列当苷、异毛蕊花糖苷、鼠李素、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、藿香黄酮醇、雷杜辛黄酮醇、广藿香酮的含量。GC法测定百秋李醇含量。主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)筛选影响广藿香化学成分差异的标志性成分。加权TOPSIS模型对广藿香整体质量进行分析和评价。结果10种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.9991),平均加样回收率96.85%~100.20%,RSD 0.67%~1.64%。毛蕊花糖苷、百秋李醇、广藿香酮、列当苷是影响广藿香产品质量的主要潜在标志物。18批不同产地广藿香加权TOPSIS法质量评价贴近度(D_(n))分别为0.3821、0.5129、0.5125、0.5358、0.5357、0.3588、0.5365、0.5483、0.2063、0.1782、0.1426、0.1174、0.7169、0.7495、0.6645、0.7381、0.6234、0.5821,表明不同产地广藿香药材存在质量差异,广东产的广藿香质量较优。结论该方法操作便捷、结果准确,可用于广藿香的综合质量评价。