三叶青乙酸乙酯提取物通过P53/SLC7A11/GPX4信号通路促进铁死亡抑制前列腺癌PC-3细胞增殖

目的:探讨三叶青乙酸乙酯提取物(SYQY)抑制前列腺癌PC-3细胞增殖的作用机制。方法:将4种提取方式的三叶青予PC-3细胞给药,以CCK-8试验筛选最佳提取方式的药物用于后续试验。SYQY给药,克隆形成试验检测细胞增殖情况。网络药理学进行靶点的获取,并将三叶青主要成分与铁死亡关键蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)进行分子对接。试剂盒检测细胞还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)及活性氧(ROS)含量;q RT-PCR及Western Blot分别检测铁死亡相关基因P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达。使用P53小干扰RNA转染细胞并同时SYQY给药,进一步检测细胞增殖情况。结果:SYQY可在一定程度上呈浓度及时间依赖性抑制PC-3细胞增殖能力(P<0.01),48 h时的药物IC50值为3.24μg/mL。三叶青主要成分儿茶素与GPX4残基形成了7个稳定氢键,并具有良好的结合活性。与DMSO组比较,SYQY给药可显著降低GSH含量(P<0.05,P<0.01),升高MDA及ROS水平(P<0.01);P53 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01),而SLC7A11、GPX4 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。P53沉默(si-P53)并同时SYQY给药可部分逆转SYQY单独给药对PC-3细胞的增殖抑制作用(P<0.01,P<0.05)。结论:SYQY可能通过激活P53/SLC7A11/GPX4信号通路促进铁死亡,发挥抑制PC-3细胞的增殖作用。

三叶青乙酸乙酯提取物通过miR-508-5p/CDCA5轴调控卵巢癌增殖、侵袭及迁移机制研究

目的 观察三叶青乙酸乙酯提取物卵巢癌增殖、侵袭及迁移的影响及可能机制。方法 体外培养卵巢癌SK-OV-3细胞,然后分为对照组、不同剂量三叶青乙酸乙酯提取物处理组(10μg/mL、30μg/mL、60μg/mL)组、NC mimic组、miR-508-5pmimic组、60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+NCinhibitor组和60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+miR-508-5pinhibitor组,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力,RT-PCR检测细胞中miR-508-5p的表达,Western blot法检测CDCA5的表达,双萤光素酶实验验证miR-508-5p和CDCA5的靶向调控关系。结果 与对照组比较,不同剂量三叶青乙酸乙酯提取物处理组(10μg/mL、30μg/mL、60μg/mL)处理后,卵巢癌SK-OV-3细胞增殖、侵袭和迁移以及CDCA5表达明显下降(P<0.05),miR-508-5p表达升高,miR-508-5p mimic组细胞增殖、侵袭和迁移以及CDCA5表达明显低于对照组和NCmimic组(P<0.05),miR-508-5p负向调控CDCA5,与60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物处理组和60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+NC inhibitor组相比,60μg/mL三叶青乙酸乙酯提取物+miR-508-5p inhibitor组细胞增殖、侵袭和迁移以及CDCA5明显升高(P<0.05)。结论 三叶青乙酸乙酯提取物能够明显抑制卵巢癌SK-OV-3细胞增殖、侵袭以及迁移,其作用机制可能与调控miR-508-5p/CDCA5轴有关。

三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的:评价三叶青乙酸乙酯提取物(ethyl-acetate fraction of extracts from Tetrastigma hemsleyanumDiels et.Gilg,EAFT)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。FITC标记annexinⅤ/PI染色流式细胞术分析细胞凋亡率。ELISA法测定细胞组蛋白/DNA碎片。Western Blotting分析细胞Bax蛋白和细胞色素C的表达。结果:EAFT以浓度依赖方式诱导annexinⅤ染色阳性细胞百分率和组蛋白/DNA碎片增加(P<0.01)。10.0 mg/L EAFT分别作用HeLa细胞6 h、12 h和24 h,细胞色素C和Bax蛋白表达上调。结论:EAFT具有诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用,其作用机制与激活线粒体途径有关。