杜仲对去势大鼠腰椎骨和rBMSCs TGFβ与FGF2表达调控

目的:观察杜仲干预去势大鼠腰椎骨及对大鼠骨髓间充质干细胞(rat bone mesenchymal stem cells,rBMSCs)转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)和成纤维生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)表达的调控。方法:(1)80只4月龄雌性SD大鼠随机分成4组,假手术组、阴性对照组、阳性对照组和实验组。除假手术组打开腹腔、暴露卵巢后即缝合外,其他3组均摘除双侧卵巢。大鼠手术10天后,阳性对照组和实验组分别用阿尔法骨化醇(ALF)和盐杜仲灌胃,每天一次,另外2组正常饲养。灌胃3个月后,解剖取各组第一腰椎骨,4%多聚甲醛固定,3天后浸入4%EDTA溶液中脱钙,4周后冰冻切片,免疫组化检测各组中TGFβ与FGF2表达;(2)取盐杜仲粉末2 g,分别加水或甲醇至15 ml,室温震荡1 h,静置过夜后,离心弃沉淀。水浸上清不经进一步处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15 ml溶解剩余物后,得醇提取物。水/醇提取物均经0.22μm膜过滤,-20℃保存;(3)取2月龄SD大鼠骨髓细胞,置含20%小牛血清的DMEM/F12培养基中,37℃,5%CO2培养,传代3次后进行杜仲水/醇提取物诱导,诱导物分为10-2、10-3、10-4和10-5 4个稀释度并设4个重复组,同时设一不加诱导物的对照细胞培养组。诱导6天后,免疫细胞化学法测定BMP-2表达。结果:与假手术组比较,阴性对照组腰椎骨中TGFβ、FGF2表达均下降;与阴性对照组相比,ALF阳性对照组和杜仲实验组TGFβ和FGF2表达上升;与对照细胞培养组比较,杜仲水/醇提取物诱导rBMSCs FGF2的表达显著升高,但TGFβ的表达变化不显著。结论:杜仲改善去势大鼠骨质疏松状态与调节TGFβ、FGF2表达相关,杜仲具有直接刺激细胞FGF2的表达的作用。

杜仲对去势大鼠骨细胞及骨髓间充质干细胞BMP-2表达的调节作用

目的:观察中药杜仲在干预去势大鼠骨质疏松过程中对骨细胞BMP-2表达的调节作用,以及杜仲水提取物和醇提取物对大鼠骨髓间充质细胞(mesenchymal stemcells,MSCs)BMP-2表达的影响。方法:80只4月龄雌性SD大鼠随机分成4组,假手术组、模型组、阿尔法骨化醇(法能)组和杜仲实验组。除假手术组打开腹腔,暴露卵巢后即缝合外,其他3组均摘除双侧卵巢。大鼠手术10天后,阿尔法骨化醇组和杜仲实验组分别用阿法骨化醇软胶囊和盐杜仲灌胃,另外2组正常饲养。3个月后,解剖取股骨,4%多聚甲醛固定,三天后浸入4%EDTA溶液中脱钙,4周后进行冰冻切片,免疫组化测定BMP-2表达。取盐杜仲粉末2g,分别加水/甲醇至15ml,室温震荡1小时,静置过夜后,经15000rpm离心10min,弃沉淀。水浸上清不经处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15ml溶解剩余物后,得醇提取物。水/醇提取物均经0.22μm膜过滤,-20℃保存。取2月龄SD大鼠骨髓细胞,置含20%小牛血清的DMEM/F12培养基中,37℃,5%CO2培养,传代3次后进行杜仲水/醇提取物诱导,诱导物分为10-2、10-3、10-4、和10-54个稀释度并分为4个重复组。诱导6天后,免疫组化测定BMP-2表达。结果:杜仲实验组大鼠骨切片中的BMP-2的表达量明显高于模型组,杜仲水/醇提取物对大鼠MSCs的BMP-2表达具有显著刺激作用,醇提取物的作用大于水提取物,并且10-5稀释度的作用大于其他稀释度。结论:在体和离体实验均证实杜仲有干预去势大鼠骨质疏松的作用与调节BMP-2表达相关。