奇异海蟑螂Ligia exotica幼体的生长特征研究

海蟑螂在中国沿海从南到北均有分布,为半陆生甲壳类生物,常栖息于近海岩礁的石缝中。海蟑螂野生资源量巨大,饲用与药用效果明显,且适应能力强,有很高的科研和实用价值。实验评估了奇异海蟑螂(Ligia exotica)幼体从出生到60日龄的生长表现,发现在45日龄后,个体体重增加开始明显加快。60日实验期间幼体增重率为7746.51%,特定生长率为7.27%,高于其他甲壳类生物。幼体体长和体宽呈现相近的增长趋势,且体长的增长快于体宽。回归分析显示海蟑螂幼体体重与体长、体宽均具有较好的正相关性,决定系数R2分别为0.90和0.87,故可以通过体长和体宽估算其体重。实验首次实现了海蟑螂幼体的全人工培育,为其成为经济虾蟹类研究的模式动物打下了基础。且实验证实海蟑螂幼体生长速度非常快,有利于人们对其种群的开发利用。

Comparison of Murraya exotica and Murraya paniculata by fingerprint analysis coupled with chemometrics and network pharmacology methods

There are two source plants for the traditional Chinese medicine Murrayae Folium et Cacumen(MFC)in Chinese Pharmacopoeia,i.e.Murraya exotica L.and M.paniculata(L.)Jack.Herein,a chemical comparison of M.exotica and M.paniculata by high performance liquid chromatography(HPLC)fingerprint analysis coupled with chemometrics and network pharmacology was performed.The main peaks in the fingerprints were identified by liquid chromatography coupled with ion trap/time-of-flight mass spectrometry(LC-IT-TOF-MS)and authenticated by references.The chemometrics results showed that the HPLC fingerprints of these two species were clearly divided into two categories using hierarchical cluster analysis(HCA)and principal component analysis(PCA),and a total of 13 significantly differentiated markers were screened out by orthogonal partial least squares-discriminant analysis(OPLS-DA).However,the following network pharmacology analysis showed that these discriminated markers were found to act via many common targets and metabolic pathways,indicating the possibly similar pharmacological effects and mechanisms for M.exotica and M.paniculata.The above results provide valuable evidence for the equivalent use of these two plants in clinical settings.Moreover,the chromatographic fingerprint analysis coupled with chemometrics and network pharmacology supplies an efficient approach for the comparative analysis of multi-source TCMs like MFC.

基于UPLC-Q-Orbitrap-MS技术的九里香根化学成分分析

目的建立超高效液相串联四极杆静电场轨道阱质谱技术(UPLC-Q-Orbitrap-MS)对中药九里香根中的主要化学成分进行分析的方法。方法采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以0.1%甲酸水(A)-0.1%甲酸乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,正、负离子模式分别采集一级、二级质谱数据。结果通过推导质谱裂解规律、与对照品、文献数据和质谱数据库比对等方式,从九里香根中初步鉴定了63个化学成分,主要包含香豆素类、黄酮类、生物碱类、腺苷类等。其中,26种成分为首次从九里香中发现。结论该方法可为阐明九里香根的药效物质基础提供依据。

九里香全长转录组测序分析

目的:获得九里香Murraya exotica L.Mant.全长转录组数据库,为深入挖掘其全长基因信息提供参考。方法:利用Pacino Sequel平台的第三代测序技术,对九里香的根、茎、叶、花、果混合样品进行全长转录组测序,并对原始转录组数据进行分析。结果:共获得94435个转录本,平均长度为76476.23 bp,80583条环形一致性序列,通过聚类、校正和去冗余后最终得到108443个高质量的isoforms,其中在非冗余蛋白(NR)、核苷酸序列(NT)、基因本体(GO)、真核生物相邻类的聚簇(KOG)、蛋白家族(Pfam)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)和SwissProt共注释了100219个isoforms,同时检测出34182个简单序列重复(SSR)位点,其中18482个单核苷酸数量占主导位置;检测了2574个转录因子,29592个长链非编码RNAs(lncRNAs)和30322个mRNAs。结论:获得了较为可靠的九里香全长转录组数据,为深入研究九里香的生长发育、相关代谢途径、功能基因利用、基原物种鉴定等提供数据参考。

奇异海蟑螂提取物抗炎活性及改善筋伤的作用研究

[目的]研究奇异海蟑螂不同提取部位对巨噬细胞RAW264.7的体外抗炎活性及对筋伤大鼠的治疗作用。[方法]以脂多糖诱导细胞株RAW264.7建立细胞炎症模型,用MTT法检测药物对RAW264.7细胞的毒性作用,Griess反应检测细胞上清液中NO的水平,进而评价奇异海蟑螂不同提取部位的体外抗炎活性。以重物自由落体组织损伤法建立筋伤大鼠模型,造模成功24 h后予以大鼠外用涂抹给药,每天1次,连续给药5 d。通过检测前列腺素E2(PGE2)、白细胞介素-1β(IL-1β)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)等含量,观察病理切片,检测全血(高/中/低切)黏度、血浆黏度和纤维蛋白原含量等来评价奇异海蟑螂不同提取部位对筋伤模型大鼠受损肌肉组织和血液流变学的改善作用。[结果]与模型组相比,奇异海蟑螂乙醇提取物、乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物均能显著降低RAW264.7炎症细胞释放NO含量(P<0.01),且高剂量组均能显著降低筋伤模型大鼠受损肌肉组织中PGE2、IL-1β、MDA的含量,提高受损肌肉组织的SOD活力,降低全血(高/中/低切)黏度、血浆黏度和纤维蛋白原含量(P<0.05或P<0.01),改善筋伤模型大鼠损伤肌肉的组织形态。[结论]奇异海蟑螂乙醇、乙酸乙酯和正丁醇提取物均具有显著的体外抗炎活性,同时高剂量的奇异海蟑螂不同提取部位能更为显著地增加SOD含量,降低MDA、PGE2和1L-1β的含量,降低全血(高/中/低切)黏度、血浆黏度和纤维蛋白原含量,进而达到改善模型大鼠筋伤的作用。

九里香叶的抗炎镇痛作用研究

采用小鼠扭体试验、热板法、二甲苯致耳朵肿胀法和角叉菜胶致足肿胀法研究了九里香[Murrayaexotica(L.)]叶的镇痛抗炎作用。结果表明,九里香叶醇提物可有效抑制醋酸致小鼠的扭体反应,延长小鼠的痛阈值,显著抑制二甲苯及角叉菜胶诱导的肿胀。表明中药九里香叶醇提物具有显著的抗炎、镇痛药理学作用,为中药九里香的二次开发提供了有益的科学依据。

九里香醇提物抗膝骨关节炎研究

利用Hulth手术诱导法复制大鼠膝骨关节炎模型,利用光学显微镜、组织化学法观察关节平面损害情况,通过ELISA法测定大鼠血清中的IL-1β、TNF-α、SOD及iNOS含量,研究中药九里香(Murraya exotica L.)醇提物对大鼠膝骨关节炎的防治作用。结果表明,治疗组与模型组相比,九里香醇提物对关节平面具有显著的保护作用,可提高大鼠血清中SOD含量、有效降低IL-1β、TNF-α及iNOS含量。

不同土壤水分对九里香光合特性的影响

利用Li-6400XT便携式光合仪,在灌水周期内测定了8种不同水分条件下九里香(Murraya exotica L.)叶片光合速率、蒸腾速率、气孔导度、胞间CO2体积分数及水分利用效率等生理参数的光响应过程,探讨了维持九里香较高光合速率和水分利用效率的适宜土壤水分及光照强度范围。结果表明:光辐射强度和土壤湿度对九里香叶片光合特性有十分显著的影响,九里香在土壤体积含水量29.80%(相对含水量89.40%)时光合速率达到最大值。当土壤水分条件适宜时,光强在400～1600μmol.m-2.s-1范围内,九里香光合速率较高。适宜九里香生长的土壤湿度范围(具有较高的光合速率和水分利用效率)为土壤体积含水量21.30%～29.80%(相对含水量64.53%～89.40%)。九里香永久萎蔫的最低土壤湿度为土壤体积含水量10.60%(相对含水量32.11%)。

高速逆流色谱分离纯化九里香中的黄酮类化合物

应用高速逆流色谱法分离纯化了九里香中的4种黄酮类化合物。以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5:5:4.8:5,v/v/v/v)作为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,以主机转速800r/min、流速2.0mL/min、单次进样量200mg的条件成功地从4.0g九里香粗提物中分离纯化出54.31mg5,7,3′,4′,5′-五甲氧基黄酮(重结晶后)、107.68mg5-羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮、215.54mg5-羟基-6,7,8,3′,4′-五甲氧基黄酮、84.36mg5-羟基-6,7,8,3′,4′,5′-六甲氧基黄酮,纯度均在95%以上。各化合物的结构均由质谱和核磁共振氢谱、碳谱鉴定。其中化合物5-羟基-6,7,3′,4′-四甲氧基黄酮为首次从九里香中分离得到。

九里香挥发油成分研究

目的:对九里香挥发油成分进行研究。方法:利用水蒸气蒸馏法提取挥发油,采用气相色谱-质谱-数据系统联用技术对所得挥发油进行分析。结果:共分离出90多个色谱峰,鉴定出59个成分,占挥发油总量的93.9%。主要成分为双环大香叶烯(26.0%)、β-石竹烯(20.8%)、α-石竹烯(5.8%)、δ-杜松烯(4.7%)、匙叶桉油烯醇(4.3%)、反-α-香柠檬烯(4.1%)、大香叶烯D(3.7%)、β-红没药烯(3.0%)、芳香-姜黄烯(2.5%)。结论:九里香的挥发油成分中,以倍半萜类成分为主,占80.6%,单萜类成分占11.9%。主要成分双环大香叶烯在九里香属植物中未见报道。

九里香含药血清抗软骨细胞凋亡的机制

目的对九里香血清药物化学抗软骨细胞凋亡进行初步研究。方法建立大鼠骨关节炎(OA)模型,含药血清培养软骨细胞,利用流式细胞仪检测其凋亡,建立中药九里香的指纹图谱、血清指纹图谱等方法,利用柱层析从原药材中分离鉴定主要成分。结果分离培养软骨细胞,九里香含药血清可显著抑制OA软骨细胞的凋亡情况。在大鼠血清中存在16个入血成分,其中6个为九里香的原型成分,10个可能为原型成分的代谢产物。分离鉴定两个主要成分九里香酮和phebalosin,分别与血清中色谱峰9和11的相对保留时间基本一致。结论九里香含药血清具有抗OA软骨细胞凋亡作用,入血成分或移行成分可能成为九里香在体内的直接作用物质。

九里香雌激素样作用及其对关节保护作用的初步研究

[目的]研究九里香的雌激素样作用及其对关节的影响。[方法]取60只大鼠,随机分成6组,每组10只,分别为假手术组、去卵巢对照组、尼尔雌醇对照组和九里香低、中、高剂量组。以大鼠卵巢去除术为模型,术后假手术组和去卵巢对照组均给予浓度0.8%的CMC-Na,尼尔雌醇对照组给药剂量为0.5 mg/kg,均连续给药8周,末次给药后检测子宫质量和血清中雌二醇水平,并检测血清及关节液中透明质酸的含量。[结果]九里香各剂量组子宫湿重、血清中雌二醇水平和关节液中透明质酸的含量均比尼尔雌醇对照组低,但比去卵巢对照组高,且与九里香剂量呈正相关,均呈显著性差异;而血清中透明质酸的含量与九里香剂量呈负相关,差异显著(P<0.05)。[结论]九里香具有雌激素样生物活性,可通过影响透明质酸水平保护关节软骨。

海蟑螂提取物的抗肿瘤作用

目的考察海蟑螂提取物的抗肿瘤作用。方法采用温浸、减压浓缩、冷冻干燥制备海蟑螂提取物;MTT法检测其对人子宫颈癌细胞(HeLa)、人胃癌细胞(7901)、人非大细胞肺癌细胞(NCI)和正常人体成纤维细胞(929)的生长抑制作用;考察对小鼠移植性肉瘤(S180)生长的影响。结果海蟑螂提取物对HeLa,7901,NCI细胞的生长均有明显的抑制作用;对正常的人成纤维细胞的生长无明显抑制效应。海蟑螂提取物腹腔注射0.25,0.50,1.00 g.kg-1共7d,对S180的抑瘤率分别为26.9%,45.3%和64.6%。结论海蟑螂提取物在体内外均有显著的抗肿瘤作用,且毒性较低。

火焰原子吸收光谱法测定九里香中多种微量元素

九里香样品用浓硝酸消解,采用火焰原子吸收光谱法测定了九里香中的Fe、Zn、Mg、Ca、Cu的含量。结果表明,方法的回收率在94.46%～113.33%,RSD<2%,该法简便、准确、可信、重现性好。

九里香的药理作用

九里香为芸香科九里香属常绿灌木,可行气止痛、活血散瘀,是一种很好的中药材。九里香主要化学成分为香豆素类、黄酮类及挥发油类化合物,通过查阅相关文献,对九里香抗炎镇痛、抗菌杀虫、抗生育、降糖等方面的药理作用进行了综述。

气质联用结合保留指数分析海南九里香叶和果实中的挥发油成分

目的研究比较海南产九里香叶和果实中挥发油的化学成分及相对含量。方法采用水蒸气蒸馏法提取九里香叶和果实中的挥发油,气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)结合保留指数进行分析和鉴定。结果从九里香叶和果实的挥发油中分别鉴定出挥发性化合物61种和44种,分别占挥发油总量的96.2%和99.4%。结论九里香叶和果实的挥发油存在较大差异,其主要成分倍半萜的含量分别为91.9%和43.4%,其中共有成分23种。该方法为九里香进一步的研究及开发利用提供了参考。

九里香中香豆素类成分抗骨关节炎的分子对接研究

目的:研究九里香中香豆素类成分与骨桥蛋白的结合模式和相互作用。方法:采用Auto Dock 4. 2分子对接软件,将九里香中香豆素类成分共36个化合物和阳性对照单克隆抗体23C3的二维结构转化成三维结构,确立其空间坐标,再设置受体蛋白的网格,并运行对接程序,进行对接运算。结果:化合物13和化合物20对接的Ki分别为5. 71μmol·L-1和4. 11μmol·L-1,小于阳性对照23C3对接的Ki值19. 95μmol·L-1,对接数据最差的是化合物4,Ki值为154. 48μmol·L-1。对接构象上,23C3基本占据骨桥蛋白的疏水口袋和亲水口袋,化合物13和化合物20落入到骨桥蛋白的疏水口袋,与周围的Tyr49形成疏水相互作用力,表现出较强的结合能力;而化合物4既未占据骨桥蛋白疏水口袋,也未落入骨桥蛋白的亲水口袋,空间上与骨桥蛋白的活性位点不匹配,虚拟活性较弱。结论:九里香中香豆素成分有较强的抗炎活性,其中化合物13和化合物20虚拟活性最强,甚至强于阳性对照单克隆抗体23C3,化合物4在空间上与骨桥蛋白活性腔不匹配,虚拟活性最弱。化合物13和化合物20并未伸入骨桥蛋白的亲水活性口袋,是其结构修饰的方向,本研究将为骨桥蛋白抑制剂的开发提供一定理论指导。

九里香化学成分及活性的研究

为进一步揭示九里香的药理活性,便于系统性的药物化学研究,探讨了九里香的化学成分及活性。通过正反硅胶柱法,Sephadex LH-20、液相色谱法,对药物的12个化学成分进行分析。结果表明:九里香中的药物成分对于醛糖还原酶具有较高的抑制性,抑制率均高于槲皮素的对照组;黄花瘦中药成分对于DNA拓扑异构酶IV也有不同程度的抑制作用,在与环丙沙星相同质量浓度下(1mg·mL^(-1)),产生较强的抑制效果。九里香的化学成分中的芸香糖苷、异洋丁香苷和密蒙花苷为首次提取成分,并以DNA拓扑异构酶IV为靶点进行流份和单体化合物的抑菌性筛选测试、醛糖还原酶活性抑制测试,测试结果均比较理想。

海岸水虱消化道的凝结芽孢杆菌分离鉴定及其产酶能力研究

采用传统的微生物富集、分离纯化方法,对海岸水虱(Ligia exotica)消化道微生物进行分离鉴定,得到1株产酶能力较强的菌株,命名为HZL-3。利用分子生物学方法,初步确定其为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。采用ELISA法检测HZL-3产蛋白酶、淀粉酶含量,并研究温度、pH、培养时间、接种量等因素对其产酶量的影响。结果表明,HZL-3能够产生蛋白酶和淀粉酶;温度36℃,pH为7.5,培养16 h,接种量为6%,蛋白酶活性最高;温度36℃,pH为6.0,培养10 h,接种量为4%,淀粉酶活性最高,研究旨在揭示海岸水虱消化道微生物作为水产养殖益生菌的潜在应用。

紫外分光光度法测定海蟑螂中腺苷含量

目的建立海蟑螂中药理作用成分腺苷的含量测定方法。方法海蟑螂全体经37℃水温浸提取,硅胶 薄层层析分离,用紫外分光光度法于260nm处测定腺苷吸光度。结果在1.0～20.0μg·mL-1的范围内腺苷 的浓度和吸光度呈良好线性关系(r=0.9998,n=6),平均回收率为99.3%(RSD=1.9%,n=3)。结论本法 简捷、准确,适用于海蟑螂中腺苷的含量测定。