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毛白杨纤维素合成酶基因(PtoCesA1)克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 被引量:10
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作者 李春秀 齐力旺 +1 位作者 王建华 张守攻 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期49-52,61,共5页
以毛白杨形成层为材料克隆了毛白杨纤维素合成酶基因(PtoCesA1),序列分析表明该基因序列为3215bp,与欧洲颤杨的PtCesA1基因同源性为97%具有开放的阅读框,编码区在52~2985碱基之间,编码区为2925bp。通过同义突变引入BamHI酶切位... 以毛白杨形成层为材料克隆了毛白杨纤维素合成酶基因(PtoCesA1),序列分析表明该基因序列为3215bp,与欧洲颤杨的PtCesA1基因同源性为97%具有开放的阅读框,编码区在52~2985碱基之间,编码区为2925bp。通过同义突变引入BamHI酶切位点,将全长基因克隆到植物表达栽体pBll21中,经酶切和PCR鉴定确认载体构建正确,为下一步ptoCesA1转基因功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 毛白杨 纤维素合成酶基因 植物表达载体
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西尼罗河病毒NS1的克隆、表达及抗原性分析 被引量:2
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作者 郭勇晖 温坤 +3 位作者 潘玉先 丘立文 丁细霞 车小燕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期545-548,共4页
目的克隆和表达西尼罗河病毒(WNV)非结构蛋白1(NS1),并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST-NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗... 目的克隆和表达西尼罗河病毒(WNV)非结构蛋白1(NS1),并分析其与登革病毒NS1的抗原交叉反应性。方法合成WNV NS1全基因序列,将NS1全基因克隆到pGEX-5X-3原核表达载体中表达GST-NS1融合蛋白,用4型登革病毒免疫血清及登革病毒NS1单克隆抗体并应用Western Blot方法分析WNV-NS1重组蛋白的抗原性。结果重组质粒pGEX-5X-3-WNV-NS1经IPTG诱导,高效表达GST-NS1融合蛋白,经变性纯化和复性获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,经Western Blot证实WNV-NS1重组蛋白可与各型登革病毒免疫小鼠血清及部分4型登革病毒NS1交叉单抗识别。结论成功获得可溶性WNV-NS1重组蛋白,该蛋白与登革病毒NS1具有抗原交叉反应性,其结果为建立西尼罗河病毒的血清学诊断和鉴别诊断奠定了基础。 展开更多
关键词 西尼罗河病毒 登革病毒 非结构蛋白 原核表达
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亚麻AtCesA1基因过表达载体的构建 被引量:2
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作者 刘岩 《中国麻业科学》 2017年第2期57-60,共4页
为开展纤维素合成酶基因导入亚麻的基因工程研究,以拟南芥为材料克隆了纤维素合成酶基因AtCesA1,序列长为3912 bp,其中编码区在277~3523碱基之间,共3246 bp,推测其编码了1082个氨基酸。通过同义突变将全长基因克隆到植物表达载体pBI1301... 为开展纤维素合成酶基因导入亚麻的基因工程研究,以拟南芥为材料克隆了纤维素合成酶基因AtCesA1,序列长为3912 bp,其中编码区在277~3523碱基之间,共3246 bp,推测其编码了1082个氨基酸。通过同义突变将全长基因克隆到植物表达载体pBI1301中,构建出植物表达载体pCAMBIA1301-AtCesA1,经酶切和PCR鉴定确认目的基因已经正确地插入到载体上,为下一步AtCesA1遗传转化亚麻功能研究打下了基础。 展开更多
关键词 亚麻 纤维素合成酶基因 克隆 表达载体
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方寸之间的世俗百态——陶然的小小说述评 被引量:1
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作者 王者凌 《佳木斯大学社会科学学报》 2007年第1期89-91,共3页
香港著名作家陶然是文坛多面手,他不仅能够熟练驾驭长篇小说的创作,而且小小说也写得有声有色,神采飞扬。本文将从古今时空的互文建构、阴阳两界的怪诞写意与现实世界的艺术写真三个视角切入陶然的小小说世界,探讨陶然小小说的审美特质。
关键词 陶然 小小说 互文建构 怪诞写意 艺术写真
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甲状腺乳头状癌中CK19表达与其生物学行为的关系
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作者 杨燕初 陆竞艳 +2 位作者 卓建红 史琳 任传伟 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期334-335,343,共3页
目的:检测细胞角蛋白19(CK-19)在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用。方法:用RT-PCR和免疫组织化学(EnvisionTM)法检测36例甲状腺乳头状癌,19例良性甲状腺疾病及8例正常甲状腺组织中CK19mRNA和蛋白的... 目的:检测细胞角蛋白19(CK-19)在甲状腺乳头状癌组织中的表达,探讨其在甲状腺乳头状癌发生发展中的作用。方法:用RT-PCR和免疫组织化学(EnvisionTM)法检测36例甲状腺乳头状癌,19例良性甲状腺疾病及8例正常甲状腺组织中CK19mRNA和蛋白的表达。结果:CK19基因mRNA和蛋白表达一致,在甲状腺乳头状癌组与其他非癌组间的表达差异均具有显著性;CK19mRNA在有淋巴转移组的表达水平明显高于无淋巴转移组,差异有显著性。结论:CK19基因在甲状腺乳头状癌中表达明显增加且与转移有关,提示CK19可能参与了甲状腺乳头状癌的发生发展,并对肿瘤的肿瘤转移有促进作用。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤/病理学 角蛋白/免疫学 基因表达 聚合酶链反应
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经前平颗粒对PMS肝气逆模型猕猴血清激素水平的影响 被引量:2
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作者 魏盛 《中国中医药现代远程教育》 2014年第9期154-155,共2页
目的探讨经前平颗粒干预对PMS肝气逆证猕猴模型血清激素水平的影响。方法观察造模给药后猕猴表情行为变化并检测猕猴体内激素水平变化。结果予经前平颗粒干预后模型猕猴表情行为及激素变化基本恢复到正常水平,符合临床变化情况。结论经... 目的探讨经前平颗粒干预对PMS肝气逆证猕猴模型血清激素水平的影响。方法观察造模给药后猕猴表情行为变化并检测猕猴体内激素水平变化。结果予经前平颗粒干预后模型猕猴表情行为及激素变化基本恢复到正常水平,符合临床变化情况。结论经前平颗粒可明显改善PMS肝气逆证猕猴模型表情行为异常及体内激素水平波动,这从侧面证明所制备模型是可靠的。 展开更多
关键词 PMS肝气逆证 猕猴模型 经前平颗粒 表情行为 激素水平
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Increase of Expression Levels of Reporter Gene in Transgenic Tobaccos by Matrix Attachment Regions
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作者 李旭刚 《High Technology Letters》 EI CAS 2000年第4期89-94,共6页
The matrix attachment region (MAR) located downstream of Plastocyanin gene was isolated from the genome of pea. To study the effect of MARs on foreign gene expression in transgenic plants, T DNA vector was constructed... The matrix attachment region (MAR) located downstream of Plastocyanin gene was isolated from the genome of pea. To study the effect of MARs on foreign gene expression in transgenic plants, T DNA vector was constructed in which MARs flanked bothβ glucuronidase(GUS) gene and selectable marker neomycin phosphotransferase (NPT II) gene. The plant expression vectors were transferred into leaf discs via Agrobacterium mediated transformation procedure. The result of GUS measurement showed that pea MAR could increase transgene expression level. The mean expression levels of GUS gene expression in population containing MARs could be increased twofold when compared with that of population without MARs. 展开更多
关键词 Matrix ATTACHMENT REGIONS β GLUCURONIDASE TRANSGENIC plant Foreign gene expresst
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BABA,BTH对番茄白粉病的抗性研究 被引量:5
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作者 李会佳 朱露露 +5 位作者 李帅 杨欢欢 张冬野 汪强 吴明臣 李景富 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2016年第4期580-585,共6页
分别以500 mg·L-1BABA和50 mg·L-1BTH两种诱导剂处理番茄幼苗,后期进行白粉病菌的接种,接种时间分别为诱导剂处理后1,2,3,5,8和15 d。通过病情指数、相对防效、H2O2和NO含量以及抗白粉病相关基因表达水平的测定,比较分析两种... 分别以500 mg·L-1BABA和50 mg·L-1BTH两种诱导剂处理番茄幼苗,后期进行白粉病菌的接种,接种时间分别为诱导剂处理后1,2,3,5,8和15 d。通过病情指数、相对防效、H2O2和NO含量以及抗白粉病相关基因表达水平的测定,比较分析两种诱导剂的作用时间、最优处理模式以及抗病的相关机制。结果表明:BABA处理后防治效果最佳的间隔时间为第2天,且有效持续时间为10 d左右,BTH处理后1,3和5 d均为最佳期间且有效持续时间可达15 d,相对BABA持续期较长;BABA和BTH诱导后H2O2和NO含量均有显著增加;两种诱导剂处理后抗白粉病相关基因CHI3,GLUCA,GLUCB和PR1A表达趋势相近,但不同抗病相关基因在不同处理时间以及不同材料中均存在差异;喷施BABA和BTH后均有助于番茄抵抗白粉病菌的侵染,提高番茄的抗病能力。 展开更多
关键词 BABA BTH 信使分子 基因表达 番茄 番茄白粉病
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重组人表皮生长因子在毕赤酵母中的表达纯化及鉴定 被引量:2
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作者 廖小金 肖清江 +2 位作者 庄露 周卫东 陈清西 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期855-859,共5页
构建并筛选出重组人表皮生长因子(rhEGF)高表达的毕赤酵母(Pichia pastoris)基因工程菌株,于30L发酵罐进行中试发酵按1∶15接种15LFBSM发酵,pH 6.0、28~30℃、DO20%~30%、流加甲醇诱导发酵42h,rhEGF的表达量可达1g/L.采用疏水层析... 构建并筛选出重组人表皮生长因子(rhEGF)高表达的毕赤酵母(Pichia pastoris)基因工程菌株,于30L发酵罐进行中试发酵按1∶15接种15LFBSM发酵,pH 6.0、28~30℃、DO20%~30%、流加甲醇诱导发酵42h,rhEGF的表达量可达1g/L.采用疏水层析、离子交换柱层析及分子筛凝胶层析的方法分离纯化rhEGF,获得的rhEGF试制品的纯度大于95%,得率在40%以上.通过基质辅助激光解吸电离/飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)测定rhEGF的分子质量为5 946.309u,与理论分子质量一致.N端蛋白序列分析仪分析其N端氨基酸序列,测序结果与理论的氨基酸序列一致.采用Balb/c 3T3细胞增殖/MTT比色法测定其活性,测定rhEGF的活性为1.0×106 IU/mg,与WHO标准品相当.本研究实现了毕赤酵母高效表达rhEGF并纯化得到符合《中国药典》标准的rhEGF,为工业化生产rhEGF提供基础. 展开更多
关键词 表皮生长因子(EGF) 表达 纯化
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水稻OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体的构建
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作者 石宏浩 靳萍 +1 位作者 王利娜 梁卫红 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期113-115,共3页
水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRac... 水稻OsRacD是从水稻幼穗中分离的Rho基因,OsRhoGDI2是通过酵母双杂交筛选到的与OsRacD相互作用蛋白的编码基因,已有的研究表明OsRacD与OsRhoGDI2之间可能存在相互作用,并参与水稻育性调控过程.为了鉴定二者的相互作用,本研究构建了OsRacD与OsRhoGDI2基因共表达载体,为采用免疫共沉淀验证二者在体内的相互作用,解析OsRacD与OsRhoGDI2基因参与水稻育性控制的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 水稻 OsRacD基因 OsRhoGDI2基因 共表达载体
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