耐热嗜酸β-甘露聚糖酶TaMan5A在毕赤酵母中高效表达及酶学性质研究

甘露聚糖酶是一类将甘露聚糖降解为短链甘露寡糖及甘露糖的水解酶。为了开发耐酸耐高温的工程酶,从棘孢木霉(Trichodema asperellum)ND-1中克隆甘露聚糖酶基因TaMan5A并在毕赤酵母(Komagataella phaffii)X-33中成功表达。结果显示,该酶的蛋白质分子质量约为67 kDa。最适pH值和温度分别为4.0和65℃,在pH 2.0~6.0具有较强的稳定性,孵育1 h后仍具有80%的活性,且在20~65℃时,残留酶活力均能达到90%以上。1 mmol/L Co^(2+)、脲和5 mmol/L SDS、Zn^(2+)、Fe^(2+)、Mn^(2+)、Ni^(2+)对TaMan5A的活力都有不同程度的激活作用。由于玉米秸秆富含纤维素与半纤维素,因此进一步确定了TaMan5A水解秸秆的最佳组合条件(玉米秸秆用量0.5 g,TaMan5A用量0.5 g,pH 4.0,水解2 d),并得到玉米秸秆用量和TaMan5A用量对玉米秸秆降解效率影响最大。该研究首次从棘孢木霉ND-1中克隆出TaMan5A基因,实验结果表明,TaMan5A是一种嗜酸、耐高温、热稳定性强的酶,具有较大的应用前景,值得进一步研究。

c-fos在阿尔茨海默病及血管性痴呆模型大鼠脑中的表达(英文)

目的:探讨c-fos在阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)模型大鼠和血管性痴呆(vasculardementia,VD)模型大鼠脑中表达的特征,并分析是否存在差异及其意义。方法:实验使用SD雄性大鼠,体质量350～520g;先对所有大鼠进行迷宫训练,筛选出达到学会标准的大鼠,再将其随机分成对照组(3只),AD模型组和VD模型组。手术切断大鼠左侧穹窿海马伞(FF)建立AD大鼠模型,以在颅骨外固定小磁铁吸附经舌下静脉注入Fe3O4粉进而堵塞脑血管复制缺血性VD大鼠模型。在经迷宫检查证实上述模型建成后的不同时段,对含有海马结构的脑组织切片进行Fos蛋白的免疫组化染色。结果:Fos样免疫反应活性(Fos-LI)在AD大鼠的海马及大脑皮质均有增强,并随建模后时间的延长呈逐渐增强的趋势,在VD大鼠脑中Fos-LI则以皮质增强为主且只在建模初期有增强,1周时即已恢复正常。结论:c-fos在AD及VD模型大鼠脑中的表达存在空间及时程上的差异,反映了c-fos功能的多样性及复杂性。

不同连接肽的双价单链抗体基因的构建及表达

采用基因重组技术分别借助不同长度的连接肽[G4S和(G4S)3],将两个相同的抗人大肠癌单链抗体基因ND-1scFv共价连接,构建表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌BL21中表达ND-1sc(Fv)2的融合蛋白。应用Ni2+亲和层析方法对表达产物进行纯化,SDS-PAGE、免疫荧光法(IFA)和ELISA对纯化后的蛋白质进行纯度和免疫活性分析。结果表明成功构建了表达载体pET-28a(+)ND-1sc(Fv)2,并在大肠杆菌中获得高效表达,其表达产物以不溶性包涵体形式存在。纯化后ND-1sc(Fv)2-5、ND-1sc(Fv)2-15的蛋白质纯度分别为90%和86%。IFA及ELISA结果表明,二者均保留了亲本抗体的免疫活性,对表达在人大肠癌细胞上的肿瘤相关抗原LEA具有特异结合活性,其免疫活性均明显高于ND-1scFv,其中ND-1sc(Fv)2-15的免疫活性更接近于亲本单抗ND-1,该抗体有望成为大肠癌临床导向诊断和治疗的理想载体。

阿尔茨海默病发病中β淀粉样蛋白40诱导白细胞介素-1α和S100β表达的意义

目的:探讨SD大鼠脑内β淀粉样蛋白40(amyloid-βprotein40,Aβ40)的沉积与细胞因子白细胞介素1α(IL-1α)、S100β表达的关系。方法:普通级SD雄性大鼠24只,单纯随机分为两组,各12只。Aβ40处理组将Aβ40定向微注射于大鼠的双侧海马CA1,CA2～CA3区,对照组用生理盐水处理。采用免疫组化方法观察了IL-1α和S100β的表达。结果:术后3,7d的IL-1α和S100β免疫组化均显示Aβ40处理组的大鼠海马区有细胞因子IL-1α,S100β的表达,而在生理盐水对照组的大鼠海马区未出现IL-1α,S100β的阳性表达。结论:Aβ40可诱导大鼠海马IL-1α和S100β表达。作为重要的病理性细胞因子,Aβ40诱导的细胞因子IL-1α和S100β上调表达可能具有重要的神经毒性效应,参与了阿尔茨海默病的病理活动。

一类二阶对称常微分算式的极限点型

利用二阶实系数对称微分算式Ｌ（ｙ）的亏指数与其相应零空间维数之间以及平方算子Ｌ２（ｙ）的亏指数与其相应零空间维数之间的相互联系，得到在〔０，∞）上Ｌ（ｙ）为极限点型的一个充分条件：ｑ（ｘ）为微分方程Ｌ（ｙ）＝０的解．

人蛋白激酶CK23个亚基cDNA的克隆与测序

目的 :构建人蛋白激酶 CK2 α、α′和 β亚基 c DNA重组表达质粒深入进行 CK2结构与功能的研究。方法 :利用 RT- PCR、定向克隆和 DNA测序等进行本实验。结果 :通过反转录 PCR从 HL - 60细胞中获得了人蛋白激酶 CK2α、α′和β亚基编码区 c DNA,将 Nde I/H ind 双酶切的 3种 PCR产物分别与同样双酶切的表达载体 p T7- 7进行定向连接。Ca Cl2 法分别转化 DH5α获转化子 ,快速提取质粒 DNA进行电泳初筛得到阳性克隆。限制性酶切分析结果表明插入片段和重组质粒的大小与理论推测值相符。每种 CK2亚基都各随机挑选 4个阳性克隆 ,PEG法进行纯化。采用 PE ABI的 Big Dye荧光标记的终止底物循环测序试剂盒 ,使用各种引物进行正反向 DNA测序。通过测序分别在每种 CK2 α、α′和 β亚基的 4个阳性克隆中筛选到 2个、1个和 2个含完全正确的人 CK2 α、α′和 β亚基 c DAN的重组质粒克隆 ,其余的克隆均存在 1～ 2个碱基突变。我们将这种含正确序列的重组质粒分别命名为 p TCKA、p TCKA′和 p TCKB。结论 :CK2全套 3个亚基重组质粒克隆的成功 ,将为在原核细胞中表达人 CK2α、α′和β亚基以及利用人 CK2α、α′和β c

从“信达雅”看翻译的真谛

翻译是一门语言艺术,艺术是有创造性的。作为语言艺术,翻译是应遵循哪些原则,哪些标准呢?最终又是达到什么样的翻译真谛呢?本文试图从“信达雅”入手,对此作一一剖析。