甘蓝显性雄性不育基因的延长随机引物扩增DNA(ERPAD)标记

获得了一个与甘蓝显性雄性不育基因连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥｘｔｅｎｄｅｄＲａｎｄｏｍＰｒｉｍｅｒＡｍｐｌｉｆｉｅｄＤＮＡ，ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００。ＥＰＴ１１９００是在与甘蓝显性雄性不育基因连锁的ＲＡＰＤ标记ＯＴ１１９００的基础上，通过逐步筛选３’端延长的随机引物的方法转化而成的稳定性和特异性都得到增强的新标记。这种标记的稳定性和特异性接近ＳＣＡＲ标记，但不需要克隆和测序。该方法首先根据ＯＰＴ１１的序列合成３’端添加Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ４种碱基的４个引物，组成１０个引物对。以不育池为模板筛选出ＯＴ１１Ｃ＋ＯＴ１１Ｇ为唯一能够扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段的引物对。在此引物对基础上，又添加４种碱基得到８个新的引物，相互组合成１６个引物对。进一步以不育池为模板筛选出ＯＴ１１ＣＴ＋ＯＴ１１ＧＡ，在严格条件下，它可特异扩增长度与ＯＴ１１９００相同的一个片段ＥＰＴ１１９００。通过分离群体分析证实这一片段与ＯＴ１１９００处于同一位点。

红檵木的3′端延长随机引物扩增DNA(3′-ERPAD)标记

为了对 1 1 6个 1 0 -mer随机引物的RAPD分子标记进行深入了解 ,探讨分子标记与园艺性状的关系 ,筛选出多态性明显、重复性好、亮度大、分子量也较大 ( 1 0 31bp以上 )的 1 0 -mer随机引物 ,在其 3’端添加一任意碱基 ,对 1 4个红木材料和 2个来源不同的生态型木材料进行 3’ -ERPAD标记分析。发现在S2和S35的延伸引物中能够得到最佳扩增结果的引物对是S2 -G +S2-C和S35-A +S35-C ,它们的扩增结果都含有与各自基本引物相同的差异扩增带 ,这些差异带分别是S2 15 0 0 、S2 10 31和S3530 0 0 、S3590 0 、S355 6 0 。通过与园艺性状比较 ,发现S2 15 0 0

随机扩增多态性DNA分子标记技术在肠球菌分型中的应用

该研究旨在探索随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)分子标记技术在肠球菌种间快速分型的效果。试验通过筛选模板、单引物、双引物及RAPD反应体系,构建肠球菌种间分型体系,对32株已知肠球菌分型确定分型相似度标准,并通过对46株未知肠球菌进行种间分型以及管家基因rpoA测定验证分型效果。结果显示微波法提取基因组DNA满足实验需要,筛选出7条单引物用于双引物配对组合,最适的双引物反应体系为:2×PCR Taq Mix 12.5μL,模板DNA 1μL,引物各1μL,ddH_(2)O 9.5μL;分型效果最好的双引物组合为Primer1+Primer5,该引物组合可以在80%的相似度下区分肠球菌种间差异,Primer1+Primer3组合在500 bp位置扩增出海氏肠球菌的特征条带,可以作为海氏肠球菌的鉴定指标,用以快速鉴定海氏肠球菌。

芥蓝×甘蓝F_2群体的2个RAPD标记转化为ERPAD标记的研究

在对芥蓝C100-12×甘蓝秋50-Y7杂交组合构建F2作图群体进行RAPD检测的基础上,分别对4个O12,R13,Q14,P17进行了延长1个碱基的研究,其中O12和P17能将部分特异RAPD标记转化为稳定性更强的ER-PAD标记,但对R13和Q14随机引物未找到相应的ERPAD标记。

藓类植物RAPD反应体系的建立

本实验针对RAPD反应体系中Taq聚合酶、dNTP、模板和引物等影响较大的因素 ,设计了一组 4因素 4水平的正交试验。根据试验结果 ,筛选出了藓类植物RAPD反应体系中这 4个因素的最佳浓度配比 ,并在此基础上从 1 0 0个随机引物中筛选出了 30条显示藓类植物遗传差异的多态性引物。

利用分子标记EPT11_(900)辅助甘蓝显性雄性不育基因转育

利用与甘蓝显性雄性不育基因（Ｍｓ）连锁的延长随机引物扩增ＤＮＡ（ＥＲＰＡＤ）标记ＥＰＴ１１９００对３３个甘蓝自交系的多态性进行了分析。ＥＰＴ１１９００主要分布在各种早熟甘蓝中，很少存在于鸡心类型或晚熟扁圆类型甘蓝中。该结果表明：它可用于辅助大多数鸡心型或晚熟扁圆类型甘蓝的Ｍｓ基因转育；ＥＰＴ１１９００在辅助两个甘蓝自交系回交三代及两个青花菜自交系回交一代的Ｍｓ基因转育中，预测的准确性超过９０％。

产超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的检测及基因分型研究

目的 对产ESBL肺炎克雷伯菌的耐药现状进行分析研究 ,对耐药株进行基因分型 ,监测耐药株的流行状况。方法 对临床分离的 195株肺炎克雷伯菌进行药敏试验和ESBL检测 ,对产ESBL菌株以随机扩增多态性DNA分型法 (RAPD)进行基因分型。结果 产ESBL肺炎克雷伯菌占 2 3% ,其中 5 1%来源于重症监护病房 (ICU)。ESBL阳性细菌对 12种抗生素的耐药性远远高于ESBL阴性菌。 2 0株产ESBL肺炎克雷伯菌分为 11型。结论 本院脑外SICU、呼吸科RICU存在产ES BL肺炎克雷伯菌的流行 ,合理使用抗生素 ,加强重点病区的消毒隔离措施 ,是控制医院感染流行的重要措施。RAPD是从分子水平对耐药细菌进行流行病学研究的一种经济、快速。

应用随机PCR方法鉴定一株真养产碱杆菌

采用随机引物PCR技术从新建细胞培养室空气中获得一段长414bp的片段,通过克隆测序及序列分析,结果表明所测序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性分别高达79%-83%,由其推导的氨基酸序列与真养产碱杆菌主要参考菌株的同源性高达86.4%-89.1%,从而确定所分离菌株为真养产碱杆菌。

用RAPD技术分析中国嗜人按蚊种型

目的 鉴别中国不同地区嗜人按蚊 ,特别是海南岛与内陆嗜人按蚊间有无种型差异。 方法 海南、四川、江苏三地收集嗜人按蚊标本 ,通过对蚊基因组 DNA的提取纯化及 RAPD- PCR扩增和产物检测 ,最终筛选出 3条引物并制定出稳定的 RAPD图谱。 结果 三地嗜人按蚊绝大部分谱带完全相同 ,但又有明显不同的谱带存在。 结论 中国不同地区嗜人按蚊存在一定的种型差异 ,并为解释海南岛与内陆嗜人按蚊在生态习性和传疟作用方面的不同提供了科学依据。

鸡传染性支气管炎病毒ZZ2004分离株3a、3b及E基因的序列测定与分析

采用随机引物PCR技术从具有腹泻、呼吸道症状及肾脏病变的肉鸡及无明显症状但生长迟缓的鸭体内获得一段长1171bp的片段,将此片段克隆入pMD18-T载体,测序后将序列用网上的BLAST软件和DNASTAR软件进行分析,结果表明所测序列与IBV主要参考毒株的同源率为82.0%-94.4%,与国内主要毒株CK/CH/LGD/04III、CK/CH/LGD/04II、chicken/JS/YZ07/2008、CK/CH/LSC/99I、SAIBK的同源率较高,达92.4%-94.4%,与国外毒株M41、H120、Beaudette、IBV4/91的同源性较低达85.2%-87.9%,从而确定所分离毒株ZZ2004为肾型传染性支气管炎病毒。

不同花色金盏菊的RAPD分析

利用 RAPD分析技术 ,选取 1 3个具有 1 0个碱基长度的随机引物 ,对开淡黄色花和橙色花的金盏菊进行了扩增反应 .在对扩增产物进行琼脂糖电泳后显示 :有 9个随机引物扩增出条带 ,一共扩增出条带 89条 ,平均每个随机引物扩增约 1 0条 ;在 9个随机引物中 ,有 3个引物扩增的条带在两种不同花色金盏菊中有差异 .此项研究结果将为分析控制淡黄色和橙色花色有关的基因提供一点新的思路 .

应用RAPD方法鉴别香菇菌株的研究(英文)

作者采用单个、10-碱基的随机引物(Operon公司产品)PCR扩增香菇的多态性DNA。测试的7个引物均能扩增15个香菇菌株的DNA,扩增位点为12～19个,DNA片段大小为0.34kp～2.52kp。除菌株ATCC 28759和ATCC 28760所有引物扩增的DNA指纹图谱均相同外,其余13个菌株都有其独特的DNA谱带。结果表明,RAPD方法可用于鉴别香菇菌株间的差异,在食用菌遗传育种研究中具有广泛的用途。

一种新型的分子标记—SCARs验证王浆高产蜜蜂的RAPD分子标记—W316bp的研究

为了验证王浆高产蜜蜂的RAPD分子标记—W 316bp正确性 ,采用了新型分子标记—SCARs ,研究结果获得的SCARs分子标记与原来RAPD分子标记有一致的显性行为 。

对5个S180克隆细胞株RAPD特征的研究

目的运用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术建立S180的5个克隆细胞株的特异性图谱。方法运用23条引物对S180-S2D9、S180-S2D7、S180-S1F11、S180-S1H10、S180-S1B115个克隆细胞株的基因组DNA进行RAPD-PCR扩增,以琼脂糖电泳观察结果。结果筛选出3条在各克隆株扩增产物间有差异的引物。结论5个S180克隆细胞株的RAPD特征有明显区别。

淋球菌RAPD分型的引物筛选与应用

目的为了研究不同淋球菌菌株的基因多态性,了解不同菌株之间的亲缘关系,选择适当的随机引物。方法以淋球菌基因组DNA为模板,对淋球菌进行RAPD扩增,选择多态性好、重复性好、稳定性强的随机引物,并用S38号引物对不同淋球菌基因组DNA进行指纹图谱区分。结果从Sagon公司50条RAPD随机引物中筛选出8条扩增效果良好的引物,经RAPD扩增出的淋球菌指纹图谱间有明显不同的DNA多态性,可对不同菌株进行聚类分析。结论利用RAPD技术对淋球菌进行随机引物的筛选,可为今后淋球菌的分子流行病学研究奠定基础。

鹿茸线粒体DNA的指纹鉴定研究

目的通过鹿茸特异性引物鉴别和随机扩增多态DNA(RAPD)鉴别的比较,选择一种更简便的方法用于鉴别鹿茸。方法采用盐析法从梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸、市售鹿茸等样品中抽提线粒体DNA,并应用试剂盒进行纯化。进行特异性引物扩增和序列测定,同时进行随机扩增多态DNA扩增。结果梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸以及部分市售鹿茸经特异性引物扩增后均可在琼脂糖凝胶中显示313 bp片段,只是条带亮度不同。而其余市售鹿茸无扩增条带;随机扩增多态DNA不仅有效显示阳性与阴性的DNA扩增结果,而且对梅花鹿茸,马鹿茸,驯鹿茸的聚合酶链反应产物的差异,以不同的条带数目和条带亮度得以验证。结论随机扩增多态DNA鉴别鹿茸真伪的方法更准确快捷,通过随机扩增多态DNA扩增后主条带与梅花鹿茸或马鹿茸扩增的条带大小和亮度一致,则为正品;如不一致,则为《中国药典》规定外的鹿茸或其他混淆品。这种方法对于筛选、甄别市售动物中药材,特别是名贵中药具有广阔的应用前景。

基于随机扩增多态性DNA分析的霍乱弧菌分子分型方法的建立

目的建立基于随机扩增多态性DNA分析(Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)的霍乱弧菌简便快速分子分型方法。方法选择16株霍乱弧菌代表性菌株,包括O_1群、O_(139)群和非O_1/非O_(139)群等血清群,通过40条随机引物的RAPD-PCR实验,筛选出理想的随机引物,要求其产生的DNA指纹图谱多态性高,并有足够的分辨力进行分子分型。结果通过一系列RAPD-PCR实验和统计学聚类分析,从40条随机引物中筛选出2条最符合要求的引物。16株霍乱弧菌的分析结果显示,2条引物对于O_1群和O_(139)群产毒株、O_1群非产毒株和非O_1/非O_(139)群均有很好的聚类分辨率。结论本研究筛选获得了2条随机引物并建立了基于RAPD的分子分型方法,该方法简便、省时、省力,适用于地方疾控部门和口岸检疫部门的基层实验室开展霍乱监测和流行病学溯源工作。

产ESBLs肺炎克雷伯菌的RAPD基因分型研究

目的:建立肺炎克雷伯菌的基因扩增多态性DNA分型方法,了解产ESBLs肺炎克雷伯菌院内感染的分子流行情况。方法:收集临床各病区送检的产ESBLs肺炎克雷伯菌感染标本29份。采用随机扩增DNA多态性方法对产ES-BLs肺炎克雷伯菌进行基因分型。利用Phylip3.67聚类分析软件对RAPD扩增条带结果进行聚类分析。结果:RAPD扩增的指纹图谱清晰,带型稳定,多态性丰富。29株不同来源的菌株可大致分为三种亲缘关系。结论:随机扩增多态性DNA技术可以用于产ESBLs肺炎克雷伯菌基因多态性分型研究;产ESBLs肺炎克雷伯菌基因多态性分布可能与菌株的来源有关。