阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对子宫内膜癌生长抑制作用的研究

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路抑制剂(PD98059)对ER阳性表达的Ishikawa和ER低表达的HEC-1A人子宫内膜癌细胞系的裸鼠体内抗增殖作用,探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞,将对数生长期的两种细胞分别接种于裸鼠背部皮下,建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型。将两种细胞系成瘤阳性裸鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,分别腹腔注射生理盐水和PD98059,每周2次,共3周,观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,建立移植瘤生长曲线,计算抑瘤率。实验结束时取肿瘤组织切片HE染色,原位末端标记(TUNEL)法检测组织细胞的凋亡,Western blot检测各组织中ERK1/2的活化。结果:(1)PD98059能有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞裸鼠皮下移植瘤的生长;(2)HE染色可见实验组瘤细胞核浆比相对较小,血管密度降低;TUNEL染色可见两种细胞移植瘤中实验组细胞凋亡率较对照组明显增加;(3)Western blot检测结果:PD98059能有效降低裸鼠移植瘤组织中p-ERK表达。结论:PD98059通过阻断MAPK/ERK信号传导通路增加Ishikawa和HEC-1A细胞裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡,抑制肿瘤生长,抗肿瘤效果明显,可成为治疗子宫内膜癌的有效方法。

锌离子螯合剂对脂多糖诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响

目的研究锌离子螯合剂四吡啶甲基乙二胺(TPEN)对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞中细胞因子表达的影响及机制。方法体外培养小鼠小胶质瘤细胞系小胶质细胞后分为对照组、LPS组(100 ng/ml LPS,30 min或4h)、TPEN+LPS组(25μmol/L TPEN,1 h+LPS,30 min或4 h)、细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059+LPS组(PD98059+LPS组,25μmol/L PD98059,30 min+LPS,4 h),采用实时定量PCR法分析细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达,Western blot法检测pERK1/2蛋白的表达。结果与对照组比较,LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01);与LPS组比较,TPEN+LPS组pERK1/2蛋白表达和IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),而PD98059+LPS组IL-1β、IL一6、TNF-αmRNA表达明显降低(P<0.01)。结论 TPEN可能通过减少pERK1/2表达来抑制LPS诱导的细胞因子的大量释放。

阿托伐他汀通过ERK1/2通路抑制内皮微粒诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达

目的探讨阿托伐他汀对内皮细胞微粒(EMPs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响及其与ERKl/2信号通路的关系。方法将HUVECs分为不同浓度EMPs作用组与阿托伐他汀干预组。应用Western印迹检测磷酸化ERK1/2和ICAM-1蛋白的表达,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测ICAM-1 mRNA的表达。结果 EMPs可诱导HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白表达增加,且具有浓度和时间依赖关系(均P<0.01);阿托伐他汀及ERK1/2特异性抑制剂PD98059显著抑制EMPs诱导的HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白及磷酸化ERK1/2蛋白的表达(均P<0.01)。结论阿托伐他汀通过ERK1/2信号通路抑制EMPs诱导HUVECs ICAM-1表达。

鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠的影响及可能机制

目的评价鞘内注射胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对神经病理性疼痛大鼠行为学的影响，以及脊髓背角C—Jun氨基末端蛋白激酶（JNK）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）蛋白表达的影响。方法取鞘内置管成功的健康雄性sD大鼠120只，随机分为对照组（C组）、假手术组（S组）、神经病理性疼痛组（P组）和GDNF治疗组（G组），每组30只。P组和G组采用结扎大鼠右侧坐骨神经建立坐骨神经慢性压迫损伤（chronicconstric—tioninjury，CCI）模型。C组不给予任何处理；S组只暴露坐骨神经，但不结扎；P组鞘内注射生理盐水10叫，隔日1次，连续14天；G组鞘内注射GDNF2I,zg，用生理盐水稀释至10μl，隔日1次，连续14天。各组大鼠分别于处理前及处理后3、7、14天测定热刺激缩足反射潜伏期（pawwithdrawthermallatency，PWTL）和机械刺激缩足反射阂值（pawwithdrawalmechanicalthreshold，PWMT），然后每组取10只大鼠处死，取L4-6脊髓背角，采用Westernblot法测定磷酸化JNK（P—JNK）蛋白和磷酸化ERK（P—ERK）蛋白的表达水平。结果与C组比较，P组和G组PWTL和PWMT均缩短，脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达上调（P〈0．05）；与P组比较，G组PWTL和PWTL均延长，脊髓背角P—JNK蛋白和P—ERK蛋白表达下调（P〈0．05）。结论鞘内注射GDNF可以通过抑制脊髓背角P—JNK蛋白及P—ERK蛋白的表达减轻大鼠神经病理性疼痛。

基于PKC/ERK通路探讨败酱总黄酮对缺氧缺血性脑病新生大鼠神经元凋亡的影响

目的:探究败酱总黄酮对缺氧缺血性脑病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生大鼠海马神经元凋亡的影响及其作用机制。方法:72只新生大鼠分为假手术组、模型组、白屈菜红碱组(5 mg/kg)、败酱总黄酮低剂量组(50 mg/kg)、败酱总黄酮高剂量组(100 mg/kg)、败酱总黄酮+白屈菜红碱组(100 mg/kg败酱总黄酮+5 mg/kg白屈菜红碱),每组12只。采用结扎右颈总动脉和低氧处理2.5 h的方法构建HIE模型。白屈菜红碱组大鼠腹腔注射白屈菜红碱,败酱总黄酮各剂量组灌胃相应剂量的败酱总黄酮,败酱总黄酮+白屈菜红碱组大鼠在灌胃败酱总黄酮的同时腹腔注射白屈菜红碱,1次/d,连续给药7 d。通过神经功能缺损评分检测大鼠神经功能;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察脑组织海马区病理学变化;原位末端转移酶标记(Td T-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)/神经特异核蛋白(neuronal nuclei antigen,Neu N)荧光双染观察海马神经元凋亡;Western blot检测脑组织蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)/细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路及凋亡相关蛋白的表达。采用氧-葡萄糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)构建细胞模型,进行CCK-8实验和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)测定,以分析败酱总黄酮对原代海马神经元的神经保护作用,并采用流式细胞仪分析细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠出现不同程度的神经功能缺损现象,神经功能缺损评分和NeuN+TUNEL+细胞数、脑组织Bax及Caspase-3表达显著增加,Bcl-2表达、p-PKC/PKC、p-ERK1/2/ERK1/2的比值显著降低(P<0.05),海马CA1区神经元肿胀、数量减少;与模型组相比,败酱总黄酮低、高剂量组神经功能改善,神经功能缺损评分和NeuN+TUNEL+细胞数、脑组织Bax及Caspase-3表达显著降低,Bcl-2表达、p-PKC/PKC、p-ERK1/2/ERK1/2的比值显著增加(P<0.05),海马CA1区神经元密度增加;且在败酱总黄酮干预的基础上联用白屈菜红碱可显著削弱败酱总黄酮对HIE后海马神经元凋亡的抑制作用。体外细胞实验中,败酱总黄酮显著增加OGD/R损伤后的细胞活力,逆转神经元损伤并减少海马神经元细胞凋亡,同时增加了海马神经元p-PKC/PKC、p-ERK1/2/ERK1/2的比值(P<0.05),在OGD/R诱导的原代海马神经元中验证了败酱总黄酮对PKC/ERK通路的激活。结论:败酱总黄酮可抑制HIE新生大鼠海马神经元凋亡,其作用机制可能与激活PKC/ERK通路有关。

肝素结合性表皮生长因子样生长因子对大鼠肝星状细胞-T6表达微小RNA-221、微小RNA-222的影响

目的观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）激活大鼠肝星状细胞（HSC—T6）过程中微小RNA（miRNA，miR）-221、miR-222表达的变化，探讨miR-221／222在肝星形细胞（HSC）活化过程中的作用。方法培养、接种HSC—T6，分别以HB—EGF和细胞外信号调节激酶（ERK）特异性抑制剂PD98059＋HB—EGF共处理HSC—T624、48h，采用实时定量反转录聚合酶链反应（RT—qPCR）法检测miR-221／222表达水平。结果对照组、HB—EGF组及共处理组（48h）miR-221表达水平分别为0．90±0．14、1．08±0．09和0．71±0．14，miR-222表达水平分别为0．82±0．10、1．04±0．09和0．68±0．16。说明HB—EGF可促进miR-221、miR-222的表达，ERK抑制剂可使miR-221、miR-222表达下降（P〈0．01）。结论HB—EGF通过激活HSC—T6的Ras／ERK信号通路，继而促进miR-221、miR-222的表达，参与HSC活化的调控。