化浊解毒调肝方对乙型肝炎大鼠肝纤维化、免疫功能及Ras/ERK信号通路的影响

目的:研究化浊解毒调肝方对乙型肝炎大鼠肝纤维化、免疫功能及Ras/ERK信号通路的影响。方法:将50只大鼠随机分为正常组、模型组、拉米夫定阳性对照组、化浊解毒调肝方低剂量实验组、化浊解毒调肝方高剂量组,每组10只。除正常组外均建立AAV-HBV大鼠模型,建模成功后,阳性对照组予以0.3 mg/kg拉米夫定灌胃,低、高剂量实验组分别以生药量1.5 g/ml、3 g/ml化浊解毒调肝方剂灌胃,其余建模组均以同剂量生理盐水灌胃,5组大鼠均持续治疗28 d。治疗结束后,取5组大鼠血清及肝组织,用ELISA法分别检测5组大鼠血清中GPT、GOT、IFN-γ、IL-2、IL-4、HA、LN、PCⅢ含量,用免疫印记检测肝组织中Ras、p-Erk/Erk蛋白水平,HE染色观察肝组织病理形态。结果:与正常组相比,模型组大鼠血清中GPT、GOT、IL-4、HA、LN、PCⅢ含量均升高,IFN-γ、IL-2水平降低,肝组织中Ras、p-Erk水平明显升高(P<0.05);与模型组相比,阳性对照组、低/高剂量实验组GPT、GOT、IFN-γ、IL-2、IL-4、HA、LN、PCⅢ、Ras、p-Erk蛋白水平均有明显改善(P<0.05),阳性对照组与低剂量实验组大鼠之间比较,各指标水平无明显差异(P>0.05),与其他建模组相比,高剂量实验组各指标水平均有明显改善(P<0.05)。结论:化浊解毒调肝方可有效降低乙型肝炎大鼠肝纤维化程度,提高免疫功能,机制与调控Ras/ERK信号通路相关,并呈现剂量依赖性。

尺胫针结合丹鹿通督片加麦肯基疗法对腰椎间盘突出症合并马尾神经损伤患者的临床研究

目的:探讨尺胫针结合丹鹿通督片加麦肯基疗法对腰椎间盘突出症合并马尾神经损伤患者的疗效及对镇痛效应和致疼因子及ERK、p-P38表达的影响。方法:90例腰椎间盘突出症合并马尾神经损伤患者随机分为对照组与研究组,每组各45例。对照组患者采用丹鹿通督片结合麦肯基疗法进行治疗,研究组在丹鹿通督片结合麦肯基疗法治疗的基础上给予尺胫针治疗,连续治疗4周后统计临床疗效。比较对照组和研究组治疗前后Frankel脊髓损伤评分、VAS疼痛评分、血清前列腺素E2(PGE2)、5-羟色胺(5-HT)以及一氧化氮(NO)等致疼因子表达水平以及血清细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化-P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)表达水平。结果:研究组治疗总有效率91.11%(41/45)显著高于对照组的73.33%(33/45),差异具有统计学意义(P<0.05);治疗结束后研究组下肢放射性疼痛、麻木无力、大便无力和排尿不畅评分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗结束后研究组Frankel脊髓损伤评分高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);研究组VAS,评分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗结束后研究组血清PGE2、5-HT以及NO含量低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);治疗结束后研究组血清ERK、p-P38MAPK表达水平低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:尺胫针结合丹鹿通督片加麦肯基疗法对腰椎间盘突出症合并马尾神经损伤患者疗效更佳,有助于修复马尾神经损伤,降低致疼因子的表达,从而减轻患者腰腿疼痛症状,其机制可能与影响ERK、p-P38MAPK的表达有关。

miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对细胞外调节蛋白激酶1/2信号通路的影响

目的:观察miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用及其对胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)信号通路的影响。方法:将大鼠随机数字法分为模型组、miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组。建模后,模型组经尾静脉注射10 mL/kg生理盐水,miR-17-5p mimics组、miR-17-5p inhibitor组分别经尾静脉注射7μL miR-17-5p mimics、miR-17-5p inhibitor与RNAi脂质体转染试剂的混合溶液。各组大鼠苏醒后的24 h进行神经功能评分,测定脑梗死体积、大鼠脑组织含水量,检测缺血侧大脑皮质细胞凋亡率,caspase-3、Bax、Bcl-2和ERK1/2蛋白表达。结果:miR-17-5p mimics组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率明显低于模型组,miR-17-5p inhibitor组的神经功能障碍评分、脑梗死体积、脑组织含水量、缺血侧大脑皮质细胞凋亡率显著高于其他2组;miR-17-5p mimics组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax蛋白表达明显低于模型组,Bcl-2、p-ERK1/2蛋白表达高于模型组;miR-17-5p inhibitor组大鼠缺血脑组织中caspase-3、Bax、p-ERK1/2蛋白表达显著高于其他2组,Bcl-2蛋白表达低于其他2组。结论:miR-17-5p对缺血性脑卒中大鼠的脑损伤具有一定的保护作用,miR-17-5p可抑制ERK1/2信号通路激活。

LAMC2对胃癌细胞侵袭、迁移的作用及其机制研究

目的探讨层黏连蛋白γ_(2)(LAMC2)对胃癌细胞侵袭、迁移的影响及分子机制。方法利用癌症基因组图谱(TCGA)及基因表达综合数据库(GEO)联合分析胃癌中与细胞侵袭相关差异表达基因,京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析差异基因所富集的通路,根据差异倍数及功能确定候选基因LAMC2,GEPIA(Gene Expression Profiling Interactive Analysis)在线数据库分析胃癌中LAMC2的表达,采用蛋白印迹法(Western blot)检测人胃癌细胞株中LAMC2的表达。构建LAMC2敲减胃癌细胞模型,Western blot检测胃癌细胞中LAMC2的表达,将敲减模型构建成功的胃癌细胞(AGS、NCI-N87)分成空白对照组(Control)、阴性对照组(si-NC)及LAMC2敲减组(si-LAMC2),Transwell法检测各组胃癌细胞的侵袭及迁移能力,Western blot检测各组胃癌细胞中EMT标志物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)表达及ERK通路激活情况。结果LACM2在胃癌中的表达显著上调,KEGG分析其主要富集于细胞外基质受体通路(ECM-receptor interaction)。与GES-1细胞比较,人胃癌细胞(KATOⅢ、AGS、NCI-N87、SNU-1)中LACM2的表达均显著升高(均P=0.000),其中AGS表达最低,NCI-N87表达最高。在AGS胃癌细胞中,与si-NC组比较,si-LAMC2显著抑制胃癌细胞侵袭(67.000±4.003 vs 19.675±6.032,P=0.000)及迁移[(64.723±3.062)vs(18.655±4.040),P=0.000],N-cadherin[(0.535±0.041)vs(0.209±0.028),P=0.000]及Vimentin[(0.840±0.032)vs(0.286±0.056),P=0.000]的表达被显著抑制,而E-cadherin[(0.333±0.025)vs(0.570±0.019),P=0.000]的表达显著升高,ERK磷酸化水平(0.638±0.031 vs 0.243±0.027,P=0.000)被显著下调。类似地,抑制LAMC2后,NCI-N87细胞的侵袭、迁移能力倍显著抑制,ERK通路被显著抑制。结论LAMC2在胃癌中的表达上调,其可能通过激活ERK通路促进胃癌细胞侵袭及迁移。

益母草碱抑制ERK/NF-κB信号通路对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察益母草碱抑制细胞外调节蛋白激酶(ERK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将大鼠随机分为Control组、HF组,低剂量益母草碱(L-益母草碱)组、高剂量益母草碱(H-益母草碱)组及ERK抑制剂组。采用腹腔注射阿霉素法建立HF模型,HF模型建立成功后根据分组进行给药干预,连续14 d。利用彩色多普勒动物超声仪测量心功能指标[左室射血分数(LVEF)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室短轴缩短率(LVFS)]变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;免疫组化法检测心肌组织凋亡相关蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织ERK/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果:与Control组比较,HF组LVEF、LVFS及心肌组织Bcl-2蛋白表达均减少,LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及心肌组织Bax蛋白表达均增加(P<0.05);与HF组比较,L-益母草碱组、H-益母草碱组、ERK抑制剂组LVEF、LVFS及心肌组织Bcl-2蛋白表达均增加,LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及心肌组织Bax蛋白表达均减少(P<0.05)。与Control组比较,HF组心肌组织磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、细胞核NF-κB p65蛋白均增加(P<0.05);与HF组比较,H-益母草碱组、ERK抑制剂组心肌组织p-ERK、p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白水平均减少(P<0.05)。结论:益母草碱可抑制HF大鼠心肌细胞凋亡,改善心功能,可能通过抑制ERK/NF-κB信号通路激活而实现。

乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对内皮细胞增殖的影响及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的作用

目的研究人乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Akt信号转导通路在此过程中的作用。方法低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes。采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/ml Exosomes对HUVECs促增殖作用的影响,流式细胞仪测定200μg/ml Exosomes对HUVECs细胞周期的影响,Western blotting检测200μg/ml Exosomes诱导下HUVECs细胞内细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)蛋白的表达水平。结果乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes可促进HUVECs细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性。200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24h后,S期细胞比例(27.8%±3.37%)较对照组(15.34%±0.71%)增加(P<0.05),G1/S期细胞比例(2.22%±0.37%)与对照组(4.67%±0.47%)比较下降(P<0.05)。Western blotting结果显示,200μg/ml Exosomes作用HUVECs细胞24、48、72h后,磷酸化ERK表达(0.3378±0.0415,0.4967±0.0511,0.9205±0.0462)与磷酸化Akt蛋白表达(0.4091±0.0361,0.5484±0.0382,0.7496±0.0481)与对照组(磷酸化ERK 0.1836±0.0324,磷酸化Akt 0.2582±0.0215)相比有所增加(P<0.05)。结论乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes能促进HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变,以及MAPK/ERK和PI3K/Akt信号通路的持续活化有关。

汉防己乙素抑制P38 MAPK和ERK1/2的磷酸化缓解心肌缺血再灌注大鼠心肌细胞凋亡和线粒体氧化损伤

目的探讨汉防己乙素(Fan)对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌细胞凋亡和线粒体损伤的影响。方法雄性SD大鼠分为假手术组、模型(I/R)组、I/R+Fan 1,3和10 mg·kg^-1组,I/R+盐酸维拉帕米(VH)20 mg·kg^-1组,每组9只。模型大鼠结扎左前降支冠状动脉30 min后,松开结扎线再灌注90 min。给药大鼠分别在造模前20 min ip给予Fan 1,3,10 mg·kg^-1及VH 20 mg·kg^-1。记录平均动脉血压(MAP),左心室收缩压(LVSP);ELISA法测定血清中肌红蛋白(Mb)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)的含量;HE染色观察心肌组织病理损伤;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;试剂盒检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性,丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量;Western印迹法检测心肌组织Bcl-2、Bax、原癌基因(c-Myc)、活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平和P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平。结果与假手术组比较,I/R组LVSP和MAP、GSH含量、SOD活性及c-Myc蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);Mb,CK-MB和MDA含量、心肌细胞凋亡率、活化胱天蛋白酶3和Bax蛋白表达水平及P38 MAPK和ERK1/2的磷酸化水平均显著升高(P<0.05)。与I/R组比较,I/R+Fan 3和10 mg·kg^-1组LVSP和MAP、GSH含量、SOD活性及Bcl-2和c-Myc蛋白表达水平均显著升高(P<0.05),Mb,CK-MB和MDA含量显著降低(P<0.05),心肌细胞凋亡率显著降低(P<0.05),胱天蛋白酶3和Bax/Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05),P38 MAPK和ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05)。结论Fan能够抑制P38 MAPK和ERK1/2的磷酸化,缓解心肌I/R大鼠心肌细胞凋亡和线粒体损伤。

右美托咪定调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨右美托咪定(DEX)调节MAPK/ERK-CREB通路对大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法通过腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱构建癫痫持续状态(SE)大鼠模型,并随机分为4组,每组各10只。SE+DEX组在SE模型构建成功后腹腔注射DEX 1μmol/L,阳性对照组腹腔注射1μmol/L苯巴比妥,药物干预24 h后,通过Nissl法和TUNEL法检测大鼠海马神经元损伤及凋亡情况,Western blot法检测大鼠海马组织中MAPK、pERK、pCREB蛋白和凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax表达。结果与正常对照组相比,SE、阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著增加(P<0.05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著减少(P<0.05),棕褐色TUNEL阳性细胞数、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著增加(P<0.05)。与SE组相比,阳性对照组、SE+DEX组大鼠Racine分值显著降低(P<0.05),大鼠海马神经元数、Bcl-2蛋白表达量显著增加(P<0.05),棕褐色TUNEL阳性细胞、MAPK、p-ERK、p-CREB、caspase-3、Bax、Bax/Bcl-2蛋白表达量显著减少(P<0.05)。结论DEX可能通过抑制MAPK/ERK-CREB通路抑制海马神经元凋亡对其有保护作用。

阿托伐他汀对同型半胱氨酸诱导的心肌细胞MEK/ERK通路及心肌线粒体损伤的影响

目的探讨阿托伐他汀对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的心肌细胞H9c2丝裂原细胞外信号调节激酶(MEK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路及心肌线粒体损伤的影响。方法细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测不同浓度Hcy对H9c2细胞存活率的影响,筛选Hcy诱导浓度和时间。将诱导后的H9c2细胞分为模型组、5μmol/L阿托伐他汀组、10μmol/L阿托伐他汀组和15μmol/L阿托伐他汀组,另取正常H9c2细胞为对照组。流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位的变化;DCFH-DA法检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)含量;Western blot检测各组细胞MEK1/2和ERK1/2磷酸化水平。结果与对照组相比,2μmol/L Hcy可显著降低H9c2细胞存活率(P<0.05),本研究使用2μmol/L Hcy处理24 h诱导H9c2细胞。与对照组相比,模型组H9c2细胞凋亡率、ROS水平、MDA含量显著升高(P<0.05),线粒体膜电位、SOD、CAT含量及MEK1/2、ERK1/2磷酸化水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,5μmol/L阿托伐他汀组、10μmol/L阿托伐他汀组和15μmol/L阿托伐他汀组H9c2细胞凋亡率、ROS水平、MDA含量依次降低(P<0.05),线粒体膜电位、SOD、CAT含量及MEK1/2、ERK1/2磷酸化水平依次升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过激活MEK/ERK通路降低Hcy诱导的H9c2细胞氧化应激反应,减轻心肌线粒体损伤。

木犀草素缓解双酚A诱导的小鼠卵巢毒性作用研究

目的观察木犀草素对双酚A诱导的小鼠卵巢毒性的缓解作用及初步探索p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)和细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)是否参与其中。方法 32只昆明小鼠随机分为正常对照组、双酚A组、双酚A和木犀草素共处理组(共处理组)、木犀草素组,每组各8只,其中双酚A组以10 mg/(kg·d)的双酚A溶剂灌胃,共处理组依次以10 mg/(kg·d)的木犀草素溶剂和10 mg/(kg·d)的双酚A溶剂灌胃,木犀草素组以10 mg/(kg·d)的木犀草素溶剂灌胃,正常对照组以等体积玉米油灌胃;给药均持续4周。给药结束后取小鼠卵巢组织,检测各组小鼠卵巢组织中丙二醛水平、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活性的变化,并检测凋亡相关蛋白Caspase-3的活化片段(cleaved Caspase-3)、磷酸化p38 MAPK、磷酸化ERK蛋白表达。结果经双酚A处理后,小鼠卵巢组织丙二醛水平升高(P <0.05)、SOD和CAT活性降低(P <0.05)、cleaved Caspase-3蛋白相对表达量升高(P <0.05)、p38 MAPK和ERK的磷酸化水平升高(P <0.05);与双酚A单独处理相比,木犀草素与双酚A共处理后小鼠卵巢组织丙二醛水平降低(P <0.05)、SOD和CAT活性增高(P <0.05)、cleaved Caspase-3蛋白相对表达量降低(P <0.05)、而磷酸化p38 MAPK和ERK蛋白相对表达量降低(P <0.05)。木犀草素组与正常对照组各项指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论木犀草素可有效缓解双酚A诱导的小鼠卵巢毒性作用,其可能与p38 MAPK和ERK信号通路的参与有关。

偶氮鎓二醇盐衍生物JS-K通过MEK/ERK通路抑制肝纤维化抗大鼠肝癌

目的探讨偶氮鎓二醇盐衍生物O2(2,4-二硝基苯基)1-((4-乙氧羰基)哌嗪-1-yl)偶氮-1-鎓-1,2-二醇(JS-K)对大鼠原发性肝癌的影响。方法Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常对照组(ip,生理盐水10 mL·kg^-1,连续16周)、模型组(ip,二乙基亚硝胺(DEN)50 mg·kg^-1,前4周每周2次,4周后每周1次,连续16周)、JS-K 0.25和0.50 mg·kg^-1组((ip,DEN 50 mg·kg^-1)+(尾静脉注射,JS-K 0.25或0.50 mg·kg^-1),每周2次,在DEN注射后第2天给药,连续16周)。计数大鼠肝肿瘤结节数并称量瘤质量;比色法测定血清γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)和碱性磷酸酶(AKP)活性及羟脯氨酸含量;HE染色观察肝组织病理变化;ELISA检测血清甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白异质体3(AFP-L3)和异常凝血酶原(APT)含量;Gomori银染法检测肝组织网状纤维水平;免疫组化法检测肝组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白的表达;Western印迹法检测肝组织中促细胞丝裂原细胞外激酶(MEK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路相关蛋白表达水平。结果给药16周后,与正常对照组相比,模型组肝肿瘤结节数和瘤质量显著增加,血清γ-GT和AKP活性及羟脯氨酸含量明显升高(P<0.01);肝小叶结构破坏区域增加,细胞出现多核、核固缩、核内空泡等现象;AFP,AFP-L3和APT水平明显升高(P<0.05,P<0.01);网状纤维塌陷、融合、包裹形成假小叶;肝组织ERK,MEK和P90RSK磷酸化水平均明显升高(P<0.01)。与模型组相比,JS-K各给药组大鼠肝肿瘤结节数和瘤质量显著减少(P<0.05,P<0.01);血清中γ-GT和AKP活性及羟脯氨酸含量明显降低(P<0.01);肝小叶结构相对较好,癌细胞分化程度高;AFP,AFP-L3和APT含量明显降低(P<0.05,P<0.01);网状纤维阳性表达区显著减少(P<0.01),大鼠肝组织ERK,MEK和P90RSK蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。结论偶氮鎓二醇盐衍生物通过抑制MEK/ERK通路干预肝纤维化进程,从而对大鼠原发性肝癌具有一定的抑制作用。

叶下红对实验性肝脂肪变大鼠的保护作用及其分子机制

目的：探讨叶下红对实验性肝脂肪变大鼠的保护作用及其分子机制。方法将70只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、模型组、高或低剂量叶下红组及高剂量叶下红＋磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（pERK1/2）抑制剂（PD98059）组（PD组）。正常对照组予以普通饲料；其余各组予以高脂低蛋白饲料联合30%四氯化碳（CCl4）花生油2 mL/kg每3 d皮下注射1次，连续3周制备动物模型。制模后叶下红组以高、低剂量叶下红提取物（5.0 g/kg和2.5 g/kg）灌胃，每日1次；PD组每日1次灌胃5.0 g/kg叶下红提取物后加用0.3 mg/kg PD98059每周1次尾静脉注射。3周后均改为普通饲料，第5周末取肝组织进行病理学观察；用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）水平，采用免疫组化染色、蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）及流式细胞术检测固醇调节元件结合蛋白1（SREBP-1）、pERK1/2、Toll样受体4（TLR4）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）阳性细胞计数及蛋白表达；用羟胺法及硫代巴比妥酸（TBA）法检测肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平。结果高、低剂量叶下红组及PD组肝组织小叶炎症较模型组减轻（分：1.50±0.53、1.80±0.43、1.20±0.42比2.30±0.48），ALT、AST、TC、TG、SREBP-1、MDA均较模型组减少，以高剂量叶下红组最为明显〔ALT（U/L）为51.91±6.95比66.50±12.15，AST （U/L）为125.70±5.62比147.10±10.52，TC（mmol/L）为1.79±1.04比2.81±1.08，TG（mmol/L）为0.87±0.55比1.17±0.67，SREBP-1为（30.60±5.56）%比（53.10±5.02）%，MDA（nmol/mg）为5.20±0.87比10.61±5.45， P＜0.05或P＜0.01〕；pERK1/2、TLR4、HMGB1相对表达量与模型组比较差异无统计学意义〔pERK1/2为（43.77±4.93）%比（46.83±5.27）%，TLR4（相对荧光强度）为69.12±24.64比69.08±24.32，HMGB1（相对荧光强度）为22.93±14.88比33.17±13.29，均P＞0.05〕；而PD组上述各指标值与高剂量叶下红组接近，说明细胞外调节蛋白激酶（MEK）抑制剂对叶下红作用无影响。结论叶下红能减轻实验性肝脂肪变肝损伤程度，明显减轻肝小叶炎症，其机制可能与减轻氧化应激反应有关，SREBP-1可能参与其作用的发挥。

ERK_(1/2)和NF-κBp65在EMs模型大鼠内膜中的表达及意义

目的:探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK_(1/2))和核因子κB(NF-κBp65)在子宫内膜异位症(EMs)模型大鼠内膜组织中的表达及其与增殖和侵袭的关系。方法:选取雌性未孕SD大鼠20只,自体移植法诱导建立EMs大鼠模型,其中对照组10只。采用免疫组织化学法(IHC)及Western blot法检测各组大鼠子宫内膜组织中ERK_(1/2)和NF-κBp65蛋白表达;增殖相关蛋白(PCNA)、侵袭相关蛋白(MMP9)表达,验证异位病灶组织增殖和侵袭性的变化。结果:EMs模型大鼠病灶局部可见移植物体积增大呈透明或者半透明,内含淡黄色清亮或者咖啡色液体的囊状结构,表面及周围可见血管形成。苏木素伊红染色可见异位病灶组织内腺体、间质或者腺上皮细胞生长。免疫组化结果显示ERK_(1/2)主要表达于子宫内膜腺上皮细胞的胞浆中,间质内少量表达,胞核内极少量表达。NF-κBp65主要表达于子宫内膜腺体和间质的胞核,胞浆中少量表达。Western blot结果显示,EMs模型大鼠异位组及在位内膜组ERK_(1/2)和NF-κBp65蛋白表达水平高于对照组,且EMs异位内膜组表达水平高于EMs在位内膜组(P<0.05);与对照组相比,PCNA和MMP9蛋白在EMs模型大鼠异位组及在位内膜组的表达明显增高,且EMs异位内膜组表达高于EMs在位内膜组(P<0.05)。Pearson相关分析显示ERK_(1/2)和NF-κBp65蛋白表达水平呈正相关(异位内膜组r=0.657,P<0.05;在位内膜组r=0.709,P<0.05)。结论:ERK_(1/2)与NF-κBp65在EMs大鼠模型在位内膜及异位内膜组织中表达增高,可能影响异位内膜的增殖、侵袭能力,继而促进了EMs的发生发展。

基于MAPK/ERK信号通路探讨当归多糖对脑缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的探讨当归多糖对脑缺血再灌注损伤大鼠丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响。方法选SPF级健康雄性SD大鼠65只,随机分为对照组12只和造模组53只。造模采用大脑中动脉阻塞法建立脑缺血再灌注损伤大鼠模型,对照组大鼠给予假手术。将造模成功的大鼠随机分为模型组、西药组及当归多糖低、高剂量组,各12只。模型组、对照组分别灌胃给予蒸馏水10 mL/kg,每日1次;西药组灌胃给予1.5 mg/mL尼莫地平悬液10 mL/kg,每日1次;当归多糖低、高剂量组分别灌胃给予3 mg/mL、6 mg/mL当归多糖溶液10 mL/kg,每日1次。各组大鼠均给药7 d。检测比较各组大鼠神经功能缺损评分、缺血侧脑组织凋亡细胞数,海马组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平及磷酸化原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶-1(p-Raf1)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶2(p-MEK2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平。结果:与模型组比较,各组大鼠神经功能缺损评分较低,缺血侧脑组织凋亡细胞数较低,海马组织Bax水平及海马组织p-Raf1、p-MEK2、p-ERK1/2蛋白表达水平较低,且当归多糖低剂量组>当归多糖高剂量组和西药组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各组大鼠海马组织Bcl-2水平较高,且当归多糖低剂量组<当归多糖高剂量组和西药组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:当归多糖能剂量依赖性的减轻脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能缺损,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax水平,抑制缺血脑组织细胞凋亡,其作用可能与下调MAPK/ERK信号通路中的p-Raf1、p-MEK2、p-ERK1/2蛋白表达有关。

健脾解毒方对脾虚肝癌大鼠生存的影响及与TCR、ERK1/2信号通路的关系

目的探讨健脾解毒方对脾虚肝癌大鼠生存的影响及与TCR、ERK1/2、p-ERK1/2的关系。方法 105只Wistar大鼠脾虚肝癌模型组,进行造模和干预。随机分为空白对照组(A组),肝癌模型组(B组),脾虚对照组(C组),脾虚肝癌模型组(D组),健脾解毒方低浓度E组、高浓度F组及胸腺五肽组(G组)。实验中记录动物的体质量、生存时间、肝癌大鼠濒死状态时恶液质积分并采集标本。Western blot方法检测大鼠肝组织、肝癌组织、T淋巴细胞中TCR蛋白表达,以及T淋巴细胞中ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达。结果健脾解毒方高浓度组和胸腺五肽组大鼠终末期体质量、累积生存率高于脾虚肝癌模型组及肝癌模型组(P <0. 05),终末期恶液质积分则更低(P <0. 05)。健脾解毒方高浓度组大鼠肝组织、癌组织中TCR蛋白表达量,外周T淋巴细胞中TCR蛋白、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白表达量均较脾虚肝癌模型组明显增加(P <0. 05)。结论高浓度健脾解毒方能延缓荷瘤鼠恶液质的发生和进展,明显延长荷瘤鼠生存时间,其作用可能与健脾解毒方上调TCR、ERK1/2及p-ERK1/2有关。

丙泊酚对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响

目的研究丙泊酚在体外对卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力的影响,并探讨其潜在的分子机制。方法将处于对数生长期的SKOV3细胞分为空白对照组、溶剂对照组、25μmol·L^(-1)丙泊酚组、50μmol·L^(-1)丙泊酚组和100μmol·L^(-1)丙泊酚组。空白对照组细胞给予正常培养基培养,溶剂对照组细胞给予与100μmol·L^(-1)丙泊酚组中丙泊酚等量的脂肪乳处理,25μmol·L^(-1)丙泊酚组、50μmol·L^(-1)丙泊酚组、100μmol·L^(-1)丙泊酚组细胞分别给予含25、50、100μmol·L^(-1)丙泊酚的培养基培养。分别采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测各组SKOV3细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测各组SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9、ERK1/2蛋白的相对表达量。使用ERK siRNA转染SKOV3细胞,然后分为空白对照组、溶剂对照组、25μmol·L^(-1)丙泊酚组、50μmol·L^(-1)丙泊酚组和100μmol·L^(-1)丙泊酚组,采用Western blot法检测转染ERK siRNA的各组SKOV3细胞中ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白的相对表达量。结果空白对照组、溶剂对照组、25μmol·L^(-1)丙泊酚组细胞迁移率、细胞侵袭能力比较差异无统计学意义(P>0.05);50μmol·L^(-1)丙泊酚组、100μmol·L^(-1)丙泊酚组细胞迁移率、细胞侵袭能力显著高于空白对照组、溶剂对照组、25μmol·L^(-1)丙泊酚组(P<0.05);50μmol·L^(-1)丙泊酚组与100μmol·L^(-1)丙泊酚组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P>0.05);100μmol·L^(-1)丙泊酚组细胞侵袭能力显著高于50μmol·L^(-1)丙泊酚组(P<0.05)。空白对照组、溶剂对照组、25μmol·L^(-1)丙泊酚组SKOV3细胞中ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);50μmol·L^(-1)丙泊酚组和100μmol·L^(-1)丙泊酚组SKOV3细胞中ERK1/2、MMP-2、MMP-9蛋白相对表达量均显著高于空白对照组、溶剂对照组和25μmol·L^(-1)丙泊酚组(P<0.05);100μmol·L^(-1)丙泊酚组SKOV3细胞中ERK1/2蛋白相对表达量显著高于50μmol·L^(-1)丙泊酚组(P<0.05);100μmol·L^(-1)丙泊酚组与50μmol·L^(-1)丙泊酚组SKOV3细胞中MMP-2和MMP-9蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。5组转染ERK siRNA的SKOV3细胞中MMP-2、MMP-9蛋白的相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论丙泊酚能增强卵巢癌SKOV3细胞的迁移和侵袭能力,其作用机制可能与丙泊酚通过上调卵巢癌SKOV3细胞表达ERK1/2,进而促进MMP-2及MMP-9蛋白的表达有关。

槲皮素对大鼠废用性骨质疏松的预防作用及ERK1/2-MAPK信号通路的影响

目的探讨槲皮素对大鼠废用性骨质疏松的预防作用及细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)-丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法选取清洁级SD大鼠80只随机分成对照组、模型组、强骨胶囊组、槲皮素低、高剂量组,每组16只。模型组、强骨胶囊组、槲皮素低、高剂量组建立大鼠废用性骨质疏松模型。从造模第1天开始,强骨胶囊组给予强骨胶囊250 mg/kg灌胃,槲皮素低、高剂量组分别给予槲皮素100、200 mg/kg灌胃,对照组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,1/d,给药4周。显微CT扫描大鼠股骨形态,测定大鼠股骨骨密度、骨小梁数量、骨小梁厚度、骨小梁分散度及股骨ERK1/2、MAPK mRNA和蛋白水平。结果与对照组比较,模型组股骨骨密度、骨小梁数量、骨小梁厚度显著降低,骨小梁分散度、ERK1/2、MAPK mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,强骨胶囊组、槲皮素低、高剂量组股骨骨密度、骨小梁数量、骨小梁厚度显著升高,骨小梁分散度、ERK1/2 mRNA和蛋白表达水平、MAPK mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与槲皮素低剂量组比较,强骨胶囊组和槲皮素高剂量组股骨骨密度、骨小梁数量、骨小梁厚度升高,骨小梁分散度、ERK1/2、MAPK mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);槲皮素高剂量组与强骨胶囊组上述指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。模型组股骨骨小梁结构疏松、数量较对照组减少,且各骨小梁互相独立、网状结构减少;槲皮素低剂量与模型组比较变化不明显,强骨胶囊组及槲皮素高剂量组骨小梁结构较模型组密集,数量增加,且网状结构也增加。结论槲皮素能显著改善骨小梁结构数量,增加骨密度,对废用性骨质疏松有明显预防作用;其机制与槲皮素可抑制ERK1/2、MAPK mRNA和蛋白的表达,从而抑制ERK1/2-MAPK信号通路的传导有关。

复合应激勃起功能障碍大鼠阴茎组织中Sprouty 2、ERK1/2蛋白表达及药物干预的研究

目的观察Sprouty 2(Spry 2)和细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)在复合应激勃起功能障碍模型大鼠阴茎组织中的表达及伊木萨克片对二者表达的影响,探讨伊木萨克片的作用机制。方法选用50只正常的雄性Sprag-Dawley大鼠,随机抽取10只作为正常组,余40只大鼠采用环境雌激素样饮食联合冷应激干预条件建立复合应激勃起功能障碍模型。建模24周后,通过阿朴吗啡(APO)勃起实验筛选出勃起功能障碍大鼠20只,然后随机分为模型组和伊木萨克片组各10只。模型组和正常组大鼠给予蒸馏水灌胃,伊木萨克片组大鼠给予伊木萨克片250 mg/kg灌胃,均每天1次,连续2周。干预2周后,免疫组化方法检测3组大鼠阴茎组织中Spry 2和ERK1/2蛋白表达情况。结果模型组大鼠阴茎组织中Spry 2表达水平明显低于正常组(P<0.05),伊木萨克片组大鼠阴茎组织中Spry 2表达水平明显高于模型组(P<0.05);3组大鼠阴茎组织中总ERK1/2(t-ERK1/2)表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05);模型组大鼠阴茎组织中磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平明显高于正常组(P<0.05),伊木萨克片组大鼠阴茎组织中p-ERK1/2表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论环境激素样饮食联合冷应激诱导的Spry 2-ERK1/2通路的活化可促进勃起功能障碍的发生发展,而伊木萨克片可能通过抑制此通路对复合应激勃起功能障碍大鼠模型发挥保护作用。

鞘内注射ETAR拮抗药对大鼠骨癌疼痛改善情况及其对ERK通路的影响

目的观察鞘内注射内皮素A受体(ETAR)拮抗药对大鼠骨癌疼痛(BCP)改善作用及其对细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路的影响。方法取60只大鼠均进行鞘内置管,随机分为假手术(sham)组、假手术+ETAR拮抗药(sham+BQ123)组、骨癌痛(BCP)组、骨癌痛+ETAR拮抗药(BCP+BQ123)组。BCP组、BCP+BQ123组采用股骨远端骨髓腔内接种Walker256细胞法建立BCP大鼠模型,sham组、sham+NS同法注射等量生理盐水。建模成功大鼠于建模第14天,BCP+BQ123组和sham+BQ123组各14只,鞘内注射7μl BQ123;BCP组13只、sham组14只鞘内注射等量生理盐水。鞘内注射前即刻、注射后0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h分别评估各组大鼠疼痛行为学:机械性缩足反射阈值(PWT)、自发抬足次数(NSF);末次评估疼痛行为学后,影像学评估各组骨质破坏情况;RT-qPCR、Western blot法检测脊髓组织中内皮素1(ET1)、ETAR、ERK1/2 mRNA和蛋白表达量及p-ERK1/2蛋白表达量。结果与sham组、sham+BQ123组比较,注射前BCP组、BCP+BQ123组的PWT降低和NSF增多(P<0.05),鞘内注射后T0.5~3.0 h期间,BCP组的PWT和NSF均保持不变,而BCP+BQ123组的PWT先升高后降低,NSF先减少后增多,PWT和NSF均于1.5 h达到最高和最少,3.0 h恢复至注射前水平。胫骨骨质X线片显示,sham组和sham+BQ123组胫骨骨质密度均匀、骨皮质连续无缺失;BCP组注射后14 d出现大范围骨破坏、骨皮质缺损严重;BCP+BQ123组股骨远端见较小骨破坏病灶,部分皮质缺损。与sham组、sham+BQ123组比较,BCP组、BCP+BQ123组脊髓ET1、ETAR mRNA和蛋白及p-ERK1/2蛋白相对表达量均升高,且BCP+BQ123组低于BCP组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BCP疼痛反应与脊髓ET-1及ETAR有关,鞘内注射ETAR拮抗药可有效减轻BCP大鼠的疼痛反应,可能通过抑制脊髓ERK通路发挥调控作用。

S1PR5激动剂减轻H2O2诱导的脑微血管内皮细胞高通透性及氧化应激损伤

目的鞘氨醇⁃1⁃磷酸酯受体5(S1PR5)在急性缺血性卒中(AIS)血脑屏障氧化应激损伤中的作用及机制尚不清楚。文章旨在探讨S1PR5在小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)氧化应激损伤中的作用及分子机制。方法将bEnd.3细胞分为对照组、H_(2)O_(2)组、H_(2)O_(2)+5μmol/L A971432(S1PR5特异性选择性激动剂)组、H_(2)O_(2)+10μmol/L A971432组、H_(2)O_(2)+20μmol/L A971432组。用CCK⁃8法检测细胞活力改变;FITC⁃Dextran渗透法检测血管内皮细胞通透性;Western Blot检测S1PR5、ZO⁃1、VE⁃Cadherin、Occludin、Bax、Bcl2、Caspase⁃3、p⁃Erk1/2、Erk1/2、Nrf2、HO⁃1、SOD1和SOD2的蛋白表达水平;免疫荧光观察ZO⁃1的荧光强度;光学显微镜下观察细胞形态变化;DCFH⁃DA探针法检测细胞活性氧水平。结果Western blot结果显示,与对照组bEnd.3细胞的S1PR5蛋白表达(1.00±0.01)相比,H_(2)O_(2)组(0.59±0.03)明显降低(P<0.01)。与对照组相比,H_(2)O_(2)显著增加血管内皮细胞通透性,减少ZO⁃1、VE⁃Cadherin、Occludin、Nrf2、HO⁃1、SOD1和SOD2蛋白表达以及ZO⁃1荧光强度,降低细胞活力,增加MMP⁃9、Bax/Bcl2、Caspase⁃3、p⁃Erk1/2/Erk1/2的蛋白表达和细胞内总活性氧(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组[(75.33±3.76)%]相比,H_(2)O_(2)+10、20μmol/L A971432组[(93.34±0.49)%,(100.60±7.29)%]可以明显逆转H_(2)O_(2)诱导的细胞活力下降(P<0.05)。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+5、10、20μmol/L A971432组的血管内皮细胞通透性显著降低,ZO⁃1、VE⁃Cadherin、Occludin、Nrf2、HO⁃1、SOD1和SOD2蛋白表达和ZO⁃1荧光强度增加,细胞活力增加,MMP⁃9、Bax/Bcl2、Caspase⁃3、p⁃Erk1/2/Erk1/2蛋白表达和细胞内总活性氧降低(P<0.05)。结论A971432选择性激动S1PR5可减轻H_(2)O_(2)诱导的bEnd.3内皮细胞高通透性及凋亡,并可能通过激活Nrf2/HO⁃1通路发挥抗氧化损伤作用。与H_(2)O_(2)组相比,H_(2)O_(2)+10、20μmol/L A971432组可以明显逆转H_(2)O_(2)诱导的细胞活力下降(P<0.05)。