广东农产品对RECP国家出口规模及结构分析

广东是我国的外贸第一大省和农产品进出口大省,在地理位置、产业、贸易等方面具有明显的优势,尤其是近年来广东积极推进与RECP国家的贸易往来,取得了较好的效果。研究发现,2018—2021年,广东农产品对RECP国家出口额总量达67.42万亿美元,其中三年累计出口额最大的为马来西亚、达10.84万亿美元,最小的为文莱、仅为0.096万亿美元;平均每年出口额超过万亿的国家有9个;水产品、糖及糖食、蔬菜及水果等是广东出口的重要类别。

养殖刺参溃疡病杀鲑气单胞菌的分离、致病性及胞外产物特性分析

从患溃疡病的养殖刺参(Apostichopus japonicus)病灶处分离出1株优势菌H1,以浸浴、创伤浸浴、体腔注射和体壁肌肉注射等方式进行感染实验,证实菌株H1为养殖刺参溃疡病病原菌,并证明该菌通过体表创伤侵入的方式感染刺参,以创伤浸浴和体壁肌肉注射感染的LD50(半数致死量)分别为2.26×107CFU/尾和1.80×107CFU/尾。经形态学观察、生理生化特性分析和mini API系统鉴定,确定菌株H1为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida ma-soucida)。提取菌株H1的胞外产物(ECP)进行致病性实验,结果表明ECP可导致刺参死亡,其对刺参的LD50为5.24μg蛋白/g体质量。H1-ECP具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、几丁质酶和淀粉酶活性,并具有溶血素活性;对底物偶氮酪蛋白(Azocasin)作用的酶比活力可达到674.5活力单位/mg蛋白,最适作用温度为50℃;对热不稳定,70℃作用30 min时,酪蛋白酶活性降到0;100℃作用30 min,ECP对刺参的毒性消失;ECP酶活可被10 mmol/L EDTA完全抑制,可被5 mmol/L PMSF抑制98.8%,Ca2+和Mg2+可使酶活性分别提高约9%和4%。结论认为,该病原菌通过体表创伤侵入方式感染宿主刺参,菌株H1胞外产物是其对刺参致病的因子之一。

养殖石斑鱼溃疡病病原哈维氏弧菌胞外产物的研究

以网箱养殖的患溃疡病青石斑鱼（Epinephlus awoara）和斜带石斑鱼（Epinephlus coioides）分离的哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）TS-628菌株为研究对象，采用平板玻璃纸覆盖技术，获得该菌株的胞外产物（ECP），并对其成分进行分析。利用杯碟法研究表明，哈维氏弧菌TS-628菌株的胞外产物具有酪蛋白酶、明胶蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、卵磷脂酶等多种酶活性和溶血活性，且溶血性物质具有热不稳定性。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及考马斯亮蓝R-250染色分析表明，ECP蛋白条带主要集中在分子质量范围25．0～66．2ku之间，经不同时间培养所获得的ECP在凝胶上显示出的蛋白条带几乎一致。采用复性电泳方法（G-PAGE）分析了哈维氏弧菌及其它4种弧菌属细菌的ECP蛋白酶活性，结果发现哈维氏弧菌ECP在酸性条件下，蛋白酶活性较强，在碱性条件下，蛋白酶带明显减少，活性很弱。在相同的pH条件下，5种弧菌中以副溶血弧菌的ECP蛋白酶活性最强，种类多，分子质量范围宽；而哈维氏弧菌的蛋白酶带较少，活性也稍弱。

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)M3菌株生长条件及其对蛋白酶产量的影响

采用体外测定细菌浓度、胞外产物 (ECP)蛋白含量和蛋白酶活力的方法 ,进行了鳗弧菌M3菌株在 2 2 16E培养基中的培养条件研究。结果表明 ,该菌株用固体培养基培养至 2 4h左右 ,可得到较高的菌体浓度、ECP蛋白含量和蛋白酶活力。采用响应面分析方法设计实验 ,用SAS统计软件分析数据 ,得到NaCl浓度、pH值和温度对菌体生长及蛋白酶产量影响的回归模型。在 2 2 16E培养基的基础上 ,添加不同氮源、碳源物质以及不同浓度蛋白胨进行生长研究。结果表明 ,胰大豆蛋白胨能促进菌体生长及ECP蛋白分泌 ;NH4 Cl与酪蛋白水解物可抑制蛋白酶的产生 ;牙鲆肌肉匀浆对菌体、ECP蛋白产量和蛋白酶产生有不同程度的促进作用 ;培养基中蛋白胨浓度为 4 %时菌体量与ECP蛋白含量达最高值 ,在蛋白胨浓度为 2 %时蛋白酶分泌量已稳定 ;1%的葡萄糖、蔗糖、甘油均能显著地提高菌体及ECP蛋白产量 ,却抑制了蛋白酶的产生。

地衣芽孢杆菌De株的胞外产物对凡纳滨对虾脂肪酶活性影响的体外实验

为探析芽孢杆菌提高水产动物的消化酶活性的作用机制，在体外条件下实验研究了地衣芽孢杆菌（Bacillw licheniformis）De株的胞外产物（Extracellular products，ECP）对凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）脂肪酶活性的影响。以半透膜法收集地衣芽孢杆菌De株的胞外产物，以匀浆离心法提取凡纳滨对虾成虾的肝胰腺和肠道消化酶，将胞外产物和对虾消化酶按体积比10：90混合，于体外条件下研究不同温度、pH及胞外产物添加量对样品脂肪酶活性的影响。结果显示，地衣芽孢杆菌胞外产物添加组的脂肪酶活性明显高于对照组（P〈0．05），在其最适的pn8。10下对虾肝胰腺和肠道的脂肪酶活性分别提高了118％和136．5％；而在其最适温度30℃～50℃时样品的脂肪酶活性则比两对照组分别提高了394．2％和195．1％。研究还发现，胞外产物添加组的脂肪酶活性与样品中胞外产物的添加量呈正相关。可见，在体外条件下地衣芽孢杆菌De株的胞外产物对凡纳滨对虾的脂肪酶活性具有促进作用。

嗜麦芽寡养单胞菌胞外产物对斑点叉尾损伤的病理学研究

采用硫酸铵盐析从嗜麦芽假单胞菌培养物中提取其胞外产物,通过腹腔注射方式,进行了嗜麦芽假单胞菌(P.maltophilia)胞外产物对斑点叉尾(Ictalurus punctatus)损伤的系统病理学研究。结果表明,嗜麦芽假单胞菌胞外产物具有较强的毒力,对斑点叉尾(42.5±4.4)g的半致死剂量(LD50)为3.21mg蛋白/kg体重。病鱼出现神经症状,腹部和下颌充血、出血,腹部膨大,腹腔内充满大量淡黄色或带血的腹水,胃肠道黏膜充血、出血,肠套叠,肝、脾、肾肿大等临床病变。组织学病变主要表现为全身多组织、器官水肿,出血、变性、坏死以及炎症反应,特别是脑、骨骼肌、肝、脾、肾和胃肠道的损伤较为严重。超微结构观察发现病鱼肝、脾、肾和骨骼肌等器官的细胞的超微结构均有较为严重的破坏,线粒体肿胀,嵴断裂或溶解消失,呈空囊状,内质网扩张,细胞核变形,染色质溶解或固缩;研究中还发现嗜麦芽假单胞菌胞外产物可致淋巴细胞凋亡,脾和肾间质内淋巴细胞均表现为细胞核染色质浓缩边移,或核固缩成一个或数个团块凝聚在核膜周边,形成凋亡小体。

创伤弧菌FJ03-X2胞外产物对欧洲鳗鲡的致病性和免疫原性分析

以70％饱和硫酸铵盐析法制备鳗源创伤弧菌生物1型高致病菌株FJ03-X2的胞外产物（ECPs），攻毒试验表明，该ECPs对鳗鲡无致病力；SDSPAGE分析表明，该ECPs由约36ku为主的系列蛋白条带组成。制备ECPs的免疫刺激复合物（ISCOMs），以20pg／尾的剂量腹腔注射免疫规格为15-20g／尾的欧洲鳗鲡，ELISA分析表明，21d和28d时的血清抗体效价约为1：1280，免疫印记显示，ECPs中分子量为36ku以上的蛋白成份可被免疫欧洲鳗鲡血清所识别，是构成ECPs的主要免疫原；免疫保护试验表明，免疫欧洲鳗鲡显示出较高的免疫保护力。试验结果也显示出，单纯以ECPs等剂量腹腔注射免疫欧洲鳗鲡，不能激发欧洲鳗鲡产生较高滴度的血清抗体，免疫欧洲鳗鲡也未能产生有效的保护性免疫应答。

嗜水气单胞菌胞外产物的生物活性及主要蛋白型分析

在血清学分型的基础上制备了23 株嗜水气单胞菌和1 株温和气单胞菌的胞外产物。分析这些菌株的溶血活性、蛋白酶解活性和细胞毒活性。结果表明,上述3 种生物学活性与菌株血清型间没有严格的对应关系。SDS PAGE分析显示,胞外产物的SDS PAGE图谱主要包括35 ku,45 ku,53 ku 3个主要蛋白质条带。有别于此前的多数报道,35 ku的蛋白质条带为多数菌株(22/24)所共有。根据凝胶上主要蛋白条带在不同菌株中的分布,可初步将其中的18 株细菌分为3 个胞外产物ECPs蛋白型,该ECPs蛋白型显示与血清型有一定的对应关系。经蛋白酶K消化处理的ECPs,银染可见脂多糖(LPSs)的典型O 糖侧链结构,显示脂多糖是组成粗制ECPs的重要组分之一。

杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种胞外产物毒性及免疫原性分析

用玻璃纸平板法提取了杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种Aeromonassal monicida masoucida的胞外产物(ECP)。毒性试验证实,ECP对剑尾鱼Xiphophorus helleri具有致死性,其半致死量(LD50)为4.72μg蛋白/g体重。SDS-PAGE表明,ECP由13条蛋白带组成。利用大鼠抗ECP血清进行的Western-blot印迹显示,组成ECP的13条蛋白带中有7条具有免疫原性,能够引发机体的免疫应答反应产生抗体,其分子量分别为88、70、42、39、36、22和15kDa。

基于企业协同协议的协同设计系统研究

为满足异地产品协同设计的需求 ,开发了一个基于企业协同协议、采用并行工程思想的产品异地协同设计系统。介绍了系统的功能、体系结构与主要特色。系统开发的目的是为企业提供全面的异地产品协同设计的支持。

哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ML01株胞外产物及分泌性蛋白的分离与特性分析

本研究以引起珍珠龙胆石斑鱼[Epinephelus fuscoguttatus(♀)?Epinephelus lanceolatus(♂)]幼鱼"皮肤溃疡病"的哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)ML01株为研究对象,采用平板膜覆盖技术和柱层析技术,分离、纯化了ML01株的胞外产物及分泌性蛋白。应用毒性试验、质谱分析与分子克隆技术,对纯化的胞外产物和3种主要的分泌性蛋白进行了特性分析与鉴定。结果显示,哈维氏弧菌ML01株的胞外产物(Extracellular products,ECPs)具有酯酶、明胶酶、淀粉酶、酪蛋白酶活性,无脲酶活性。ECPs对羊红细胞无溶血性,对斑马鱼(Danio rerio)的半数致死剂量(LD50)为19.55μg/g鱼体重。从ML01株中分离到3种主要的分泌蛋白P42、P36、P31,其分子量分别为42、36、31 k Da。经质谱鉴定和分析,这3种蛋白分别为哈维氏弧菌的外膜蛋白Omp U和Omp N,以及一种功能未知的蛋白。利用同源克隆,成功地从ML01株基因组中扩增到了P42、P36、P31的基因。序列测定和比对结果显示,ML01株的这3个基因与哈维氏弧菌ATCC 33843(Gen Bank CP009467)的相应基因相比,其开放阅读框(Open reading frame,ORF)序列的相似性分别为97.08%、100%、99.67%,其编码的多肽序列的相似性分别为99.71%、100%和99.93%。本研究对进一步分析哈维氏弧菌ML01株的致病机理、研发该菌的亚单位疫苗具有重要的参考价值。

控制底水分段完井的产能预测模型

利用水平井技术开采底水油藏能够提高油藏的最终采收率,但同时又出现了底水脊进现象,目前还没有好的解决办法。在水平井下衬管、盲管和管外封隔器(ECP)组合的管柱完井时,对水平井完井进行分段优化来调整水平井的流入剖面,从而可以有效避免跟端附近出现的端部效应,减缓可能出现的底水脊进。在出水的情况下,通过压力检测,发现出水层位,实施有效的堵水措施。在带管外封隔器ECP及衬管(包括打孔管)完井方法下,分别建立油藏流动模型和井筒流动模型,对油藏流动和井筒流动进行耦合,得出产能预测模型。