响应面法优化瓜蒌皮中粗多糖提取工艺

以亳州产瓜蒌皮为原料采用水提醇沉法提取得到粗多糖。以瓜蒌皮粗多糖得率为考查指标,选择提取过程中温度、时间和料液比对得率的影响。以单因素试验结果为基础,采用Box-behnken中心组合设计原理优化试验工艺条件,确定粗多糖最佳提取参数。结果表明,瓜蒌皮多糖的最优提取工艺是原料在提取温度70℃,提取时间2.6 h,料液比1∶26条件下,粗多糖得率为3.11%。结果表明,响应面法可较好地优化瓜蒌皮粗多糖的提取工艺,对瓜蒌的深加工研究提供了技术支撑。

瓜蒌皮提取物对高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨瓜蒌皮提取物(extractive pericarpium trichosanthes,EPT)对体外高糖诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及其机制。方法体外培养人脐静脉内皮细胞株(HUVECs),观察不同浓度瓜蒌皮提取物干预高糖处理的HUVECs凋亡的变化。MTT法检测HUVECs的存活率、采用Hoechst染色法检测细胞凋亡、采用比色法测定细胞内Caspase-3的活性、Western blot法以及免疫荧光染色法检测核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的蛋白表达和p65核移位情况。结果 30 mmol·L-1葡萄糖处理内皮细胞48h能引起细胞活性明显降低,细胞凋亡率及caspase-3的活性明显增加,细胞中NF-κB蛋白表达升高及p65核移位增加。用瓜蒌皮提取物(12.5、25、50 mg·L-1)预处理细胞1 h,可以增加细胞活性;降低细胞凋亡率、caspase-3的活性及NF-κB蛋白表达,呈浓度依赖性,且对高糖诱导的p65核移位有抑制作用。结论瓜蒌皮提取物对体外高糖诱导的HUVECs凋亡有抑制作用,其作用机制与下调NF-κB表达和降低caspase-3活性有关。

瓜蒌皮提取物对人脐带静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究瓜蒌皮提取物（EPT）对氧化低密度脂蛋白（OX-LDL）诱导的人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法在培养的人脐带静脉内皮细胞中加入OX-LDL（100mg／L）诱导内皮细胞损伤。检测细胞培养液中非对称性二甲基精氨酸（ADMA）、丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）、二甲基精氨酸二甲胺水解酶（DDAH）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量。结果体外给予OX-LDL（100mg／L）显著诱导内皮细胞损伤，提高培养液中ADMA、MDA、LDH、和TNF-α水平，降低NO和DDAH水平。两种洗脱（水和70％乙醇洗脱）瓜蒌皮提取物均能显著抑制OX—LDL所致的ADMA、MDA、LDH和TNF-α浓度升高和NO、DDAH降低。结论瓜蒌皮提取物对OX—LDL诱导的人脐带静脉血管内皮细胞损伤有保护作用，其保护作用与降低ADMA和TNF-α浓度有关。

瓜蒌皮提取物对大鼠血管内皮损伤的保护作用

目的研究瓜蒌皮提取物(EPT)对低密度脂蛋白(LDL)诱导的血管内皮损伤的保护作用。方法 48只SD大鼠在乙醚麻醉下,舌下静脉注射人血清LDL(4mg/kg)诱发血管内皮功能损伤。检测血中非对称性二甲基精氨酸(ADMA)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果单次静注LDL(4mg/kg)显著增加血液中ADMA、MDA和TNF-α水平,降低血液中NO水平。用水和70%乙醇洗脱的瓜蒌皮提取物能显著抑制ADMA、MDA和TNF-α浓度升高及增加血液中NO水平。结论瓜蒌皮提取物对LDL诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,其保护作用与降低ADMA浓度有关。

栝楼不同部位对卷烟烟气总粒相物诱导人支气管上皮细胞增殖及炎症因子表达的影响

目的研究栝楼不同部位(瓜蒌皮、瓜蒌子、天花粉)对卷烟烟气总粒相物(Total particulate matter,TPM)诱导的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)增殖以及白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法采用TPM诱导BEAS-2B建立细胞损伤模型。实验分为空白对照组、模型组(10μg·mL-1TPM)、红霉素组(阳性对照,10μg·mL-1TPM+5μg·mL-1红霉素)及瓜蒌皮、瓜蒌子、天花粉不同浓度给药组[10μg·mL-1TPM+400、800、1200 ng·mL-1瓜蒌皮/瓜蒌子/天花粉(正丁醇提取物)]。药物作用24 h后,采用MTT法检测细胞增殖情况;采用实时荧光定量PCR法检测细胞IL-6、IL-8、TNF-αmRNA的表达;采用ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-8和TNF-α的含量。结果与空白对照组比较,模型组的BEAS-2B细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),细胞上清液中IL-6、IL-8和TNF-α含量明显升高(P<0.01),细胞IL-6、IL-8、TNF-αmRNA表达明显上调(P<0.01)。与模型组比较,不同浓度组的瓜蒌皮、瓜蒌子、天花粉均可以促进BEAS-2B细胞的增殖(P<0.05,P<0.01);400、800、1200 ng·mL-1瓜蒌皮组的细胞上清液中的IL-6、TNF-α含量及mRNA表达明显下调(P<0.01),800、1200 ng·mL-1瓜蒌皮组的细胞上清液中的IL-8含量及mRNA表达明显下调(P<0.01);400、800、1200 ng·mL-1瓜蒌子组的细胞上清液中的IL-8、TNF-α含量及mRNA表达明显下调(P<0.01);400、800、1200 ng·mL-1天花粉组的细胞上清液中的IL-6、TNF-α含量及mRNA表达明显下调(P<0.05,P<0.01)。结论栝楼不同部位(瓜蒌皮、瓜蒌子和天花粉)正丁醇提取物可能通过促进BEAS-2B细胞增殖,抑制TNF-α、IL-6、IL-8等炎症因子表达,从而发挥其抗炎作用。

瓜蒌皮不同提取物干预急性心肌缺血的药效学研究

目的 :系统比较瓜蒌皮不同提取物干预急性心肌缺血(AMI)的药效差异,为明确该药材发挥药效的物质基础提供依据。方法:选取道地产区的瓜蒌皮,以不同提取方法制备成水煎液、总水提物、总醇提物。Wistar大鼠经结扎冠状动脉,制备AMI模型,分别以瓜蒌皮3种提取物灌胃给药。生理记录仪记录心电图△ST段变化值,检测心脏功能;2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积及梗死率;生化试剂盒检测血浆中肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、α-羟基丁酸脱氢酶(α-HBDH)和乳酸脱氢酶A(LDH-A)活性。结果:与模型组比较,瓜蒌皮水提物组、水煎液组模型大鼠心电图△ST值、心肌梗死面积、血浆5种心肌酶活性明显降低,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而瓜蒌皮醇提物组上述指标无明显改善。结论:对AMI模型大鼠,瓜蒌皮总水提物、水煎液均表现出显著的保护作用,其中水提物中剂量(30 g/kg)组效果更显著;而瓜蒌皮醇提取物作用效果不明显。