Anti-tumor Effect and Protective Effect on Chemotherapeutic Damage of Water Soluble Extracts from Hedyotis diffusa

Bai-Hua-She-She-Cao Hedyotis diffusa Willd. (Ru-biaceae) is a medicinal herbwidely distributed in northeast Asian countries. In traditional Chinese medicine, it has the effectof 'clearing away heat and toxic material, promoting blood circulation and removing blood stasis'.It is a well known Chinese folk-medicine used for the treatment of appendicitis, sore throat, mumps,acne, sebo-rheic dermatitis and various kinds of tumors, such as tumors of digestive tract,carcinoma of liver. It was reported that the MeOH extract of H. diffusa demonstrated a significantantitumor activity and ursolic acid succeeded in being isolated from the MeOH extract as an activecomponent . Shan BN, et al suggested that the direct aqueous extract of H. diffusa hadimmuno-modulating activity and antitumor activity in vitro through stimulating the immune system tokill or engulf tumor cells. But regarding anti-tumor activity in vivo of water soluble extracts fromH. diffusa, no detail was reported. Therefore, we prepared water soluble extracts (H_1 and H_2)from H. diffusa and evaluated their anti-tumor property in vivo experiments as well as protectiveeffect on chemo-therapeutic damage.

Physiological Effect and Quality Influences of Hedyotis diffusae Extract on Tobacco Infected by TMV

The extract from Hedyotis diffusae was used to treat tobacco plants infected by TMV before and after incidence. The effect of the changes of some physiological and biochemical indices related with the virus-resistance in tobacco leaves on tobacco quality ware determined. The resuits showed that H. diffusae extract could remarkably increase the total phenol content in tobacco leaves ,strength the activity of phenylalanine ammonialyase （ PAL） , improve the membrane permeability and tobacco quality. Prevention treatment was better than therapy treatment. In conclusion, H. diffusae extract could induce plants to produce disease resistance and strength tha antiviral capability of tobacco against TMV.

白花蛇舌草三大类成分的分离纯化及抗肿瘤活性测定

目的从白花蛇舌草中分离纯化总三萜、总多糖、总黄酮,并检测其抗肿瘤活性。方法将白花蛇舌草置于乙醇溶液中冷浸,对其中的三萜类、多糖和黄酮类化合物进行粗提;再通过大孔吸附树脂对粗提物进行处理,获得纯化后的总三萜、总多糖、总黄酮。通过CCK-8法检测白花蛇舌草总三萜、总多糖、总黄酮对A549细胞增殖的影响。结果三萜类化合物浸膏得率为20.60%,精制后总三萜纯度为82.73%;粗多糖得率为41.17%,精制后总多糖纯度为71.11%;黄酮类化合物浸膏得率为0.49%,精制后总黄酮纯度为38.14%。纯化后的白花蛇舌草总三萜、总黄酮和总多糖对A549细胞增殖均有抑制作用,白花蛇舌草总三萜和总黄酮对肺癌细胞A549的抑制作用明显。结论白花蛇舌草总三萜、总黄酮、总多糖均抑制肺癌A549细胞的增殖,为白花蛇舌草总黄酮、总多糖、总三萜的抗肿瘤作用研究提供了一定的参考。

白花蛇舌草提取物通过AMPK/ATG5信号通路对急性胰腺炎大鼠肺损伤的保护作用机制研究

目的:通过5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/自噬相关蛋白5(ATG5)信号通路,探讨白花蛇舌草提取物减轻急性胰腺炎(AP)大鼠肺损伤的机制。方法:建立AP肺损伤大鼠模型,随机分为模型组、提取物(白花蛇舌草提取物)组、3-MA(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤)组、AICAR(AMPK激活剂)组、提取物+AICAR组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组;ELISA检测血清淀粉酶(AMY)、IL-1β、IL-6、IL-18水平;检测大鼠腹水量及肺湿/干重比(W/D);HE观察胰腺及肺组织病理损伤;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、自噬底物p62、IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、胰蛋白酶原活化肽(TAP)、AMPK、p-AMPK、ATG5、自噬标志物LC3-Ⅱ/Ⅰ、泛素特异性蛋白酶10(UPS10)表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠腹水量、肺W/D、胰腺和肺组织病理损伤评分、血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平、胰腺组织p62、TAP、pro-IL-1β表达、肺组织pAMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表达均升高(P<0.05),胰腺和肺组织LAMP2蛋白表达降低(P<0.05);模型大鼠经白花蛇舌草提取物或自噬抑制剂3-MA干预后,上述指标均得到显著改善(P<0.05),且白花蛇舌草提取物的改善效果优于3-MA(P<0.05);而AMPK激活剂AICAR可削弱白花蛇舌草提取物对AP大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可通过抑制AMPK/ATG5信号通路减轻炎症反应、降低自噬水平改善AP大鼠肺损伤。

QAMS多组分定量联合PCA、OPLS-DA及GRA分析法评价白花蛇舌草的质量

目的:采用高效液相-一测多评(HPLC-QAMS)法联合化学计量学及灰色关联度分析法评价白花蛇舌草质量。方法:采用Alltima C_(18)色谱柱(5.0μm,250.0 mm×4.6 mm),0.2%磷酸-乙腈为流动相梯度洗脱;以芦丁为参照物,建立其与京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇和β-谷甾醇的相对校正因子并进行校正因子耐用性考察。同时采用ESM和QAMS法测定收集到的16批白花蛇舌草中该13种成分的含量,再运用统计软件进行化学计量学及灰色关联度分析。结果:13种成分方法学验证均符合2020年版《中华人民共和国药典》要求。京尼平苷酸、京尼平苷、车叶草苷酸、车叶草苷、2-羟基-3-甲基蒽醌、1,2-二羟基-3-甲基蒽醌、槲皮素、山柰酚、齐墩果酸、熊果酸、豆甾醇、β-谷甾醇与芦丁的平均相对校正因子分别为0.9489、0.7033、0.7824、1.1359、0.5845、0.8005、0.8933、1.0683、0.7406、0.8640、0.6745、0.5424。两种方法测定结果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。化学计量学方法显示16批白花蛇舌草聚为3类,呈现一定的产区差异。芦丁、车叶草苷酸、京尼平苷和齐墩果酸是影响白花蛇舌草产品质量的主要潜在标志物。GRA法分析结果显示7个省中浙江和江西地区所得白花蛇舌草质量最优。结论:本试验所建立的方法操作便捷、结果准确,结合化学计量学及GRA方法可用于白花蛇舌草质量的综合评价。

白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液的抗炎作用研究

目的:比较白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液体内外抗炎作用的差异,为进一步的临床研究提供理论依据。方法:用水或75%乙醇对白花蛇舌草鲜品进行回流提取,并对提取液进行浓缩和冷冻干燥,得到提取物粉末;将提取物粉末配置相应的生药溶液,观察其对炎症模型的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)和小鼠的抗炎作用,并比较水提液和醇提液在其中的作用差异。结果:白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液均可抑制脂多糖致炎的RAW264.7的活力,并且总体上水提液对致炎的RAW264.7中白介素-6、白介素-1β、肿瘤坏死因子-α等炎症因子的抑制率优于醇提液;此外,白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液均能减轻炎症模型小鼠耳肿胀和减少扭体次数,且水提液的整体效果优于醇提液。结论:白花蛇舌草水提液和醇提液的抗炎作用有差异,水提液综合抗炎效果优于醇提液,这可能与其成分差异有关。

白花蛇舌草提取物通过抑制有氧糖酵解和促进氧化磷酸化抑制肝癌细胞增殖

目的 探讨白花蛇舌草提取物(HDE)对肝癌细胞增殖的影响及其与有氧糖酵解和氧化磷酸化的关系,并分析其可能机制。方法 采用CCK-8实验和细胞增殖实验(5-ethynyl-2-deoxyuridine, EDU)检测不同质量浓度(20、40、80 mg/mL)HDE对肝癌细胞SNU-368增殖的影响;采用酶标仪检测乳酸脱氢酶活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、线粒体呼吸链复合体活性,采用pH计检测细胞外液pH值,采用细胞氧耗仪检测细胞氧耗,分析HDE对SNU-368细胞有氧糖酵解和氧化磷酸化的影响;采用qRT-PCR实验检测各组SNU-368细胞中GLUT1、GLUT4、HK2、GPI、PFKL、ALDOA和HIF-1α的mRNA表达,采用Western blotting检测HIF-1α的蛋白表达。用过表达HIF-1α的慢病毒转染肝癌细胞SNU-368构建过表达HIF-1α稳转细胞株,并进行HDE相应干预后,采用qRT-PCR和Western blotting检测HIF-1α的mRNA及蛋白表达。结果 CCK-8实验显示,HDE呈一定的浓度依赖效应抑制肝癌细胞增殖(均P<0.05);糖代谢相关检测结果显示,HDE可以抑制葡萄糖摄取和乳酸生成,降低乳酸脱氢酶活性,升高细胞外培养液pH值,增加细胞氧耗和线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性(均P<0.05);qRT-PCR结果显示,HDE抑制了GLUT1、HK2、GPI、ALDOA mRNA的表达(均P<0.05)。qRT-PCR和Western blotting实验显示,与对照组相比,HDE组HIF-1α mRNA及蛋白的表达明显减少;而与HDE组相比,HDE干预过表达HIF-1α的HIF-1α-LV组中,HIF-1α mRNA及蛋白表达再次增加(P<0.05)。结论 HDE通过抑制肝癌细胞有氧糖酵解、促进氧化磷酸化而抑制肝癌细胞增殖,作用机制可能与抑制HIF-1α的表达有关。

白花蛇舌草治疗非小细胞肺癌的药理机制及研究进展

非小细胞肺癌是常见的恶性肿瘤之一,其早期症状不明显,多数患者错过最佳治疗时机。目前非小细胞肺癌的主要治疗方法包括:手术、放疗、化疗、靶向治疗、免疫治疗等。治疗带来的不良反应明显且易产生耐药,肿瘤复发转移风险较高,多数患者预后不佳。随着中医药抗肿瘤研究的不断深入,在抗肿瘤、减少不良反应方面取得了显著成果,探索中药抗肿瘤机制,受到了人们广泛的关注。中医认为正虚与邪毒相互作用,痰、湿、瘀、毒等蕴结于肺脏,日久成积,白花蛇舌草作为临床常用中药,功可清热解毒、利尿消肿、活血止痛。现代药理学研究发现白花蛇舌草含有黄酮类、萜类、蒽醌类及甾醇类等抗癌活性成分。该研究对白花蛇舌草有效成分的药理作用及其治疗非小细胞肺癌的药理机制进行综述,并对白花蛇舌草的药对及复方进行归纳梳理,为非小细胞肺癌的相关研究及临床治疗提供参考价值。

基于网络药理学探讨“白花蛇舌草-半枝莲”活性成分治疗卵巢癌机制研究

目的 基于网络药理学及分子对接技术,探究白花蛇舌草和半枝莲药治疗卵巢癌的作用机制。并对药对活性成分槲皮素进行体外细胞实验,验证其对卵巢癌的作用。方法 从中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology,TCMSP)数据库筛选白花蛇舌草和半枝莲的活性成分并找出对应的靶点;在GeneCards数据库中检索出卵巢癌相关靶点;用jvenn在线作图工具得到药对和疾病相同的靶点交集;将交集靶点导入STRING平台,构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction network,PPI)关系,用Cytoscape做出白花蛇舌草和半枝莲药对治疗卵巢癌的主要靶点图,用Metascape数据库对主要靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。用分子对接对结果进行验证。并对白花蛇舌草-半枝莲活性成分槲皮素进行CCK-8细胞增殖实验和流式细胞术检测细胞凋亡实验。结果 与卵巢癌相关的白花蛇舌草-半枝莲药对成分-靶点网络中包含30种成分、109个靶点。其相关性位于前3位的候选化合物分子为槲皮素、木犀草素、β-谷甾醇。这些成分通过AKT1、BCL2L1、CASP3、CASP7等信号蛋白来抑制卵巢癌细胞的生长和转移,涉及信号通路有癌症的途径、乙型肝炎、脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的应用、PI3K-AKT信号通路等。分子对接结果显示核心成分与核心靶点均有较好的结合能力。不同浓度槲皮素可明显抑制卵巢癌细胞增殖,且浓度越高细胞抑制率越高,细胞凋亡率也随浓度增高,数据结果差异有统计学意义(P<0.01)。结论 从网络药理学和分子对接技术得出白花蛇舌草和半枝莲药对可通过多成分、多靶点、多通路治疗卵巢癌的作用机制。槲皮素能有效抑制卵巢癌细胞并促进其凋亡。

白花蛇舌草多糖的提取工艺、生物学功能及在畜禽生产上应用的研究进展

白花蛇舌草是一种药食同源性植物,对畜禽绿色健康养殖、畜产品安全等都有积极作用。迄今为止从白花蛇舌草中鉴定出180多种化合物,包括环烯醚类、黄酮类、蒽醌类、酚类、挥发油和多糖等。多糖类化合物是白花蛇舌草主要的生物活性成分之一,具有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等多种药理活性。为此,本文对白花蛇舌草多糖的提取工艺、生物学活性的作用机制及其在畜禽生产上的应用进行阐述,并对白花蛇舌草多糖目前存在的问题和在畜禽生产上的前景进行展望,为白花蛇舌草多糖在新型饲料添加剂方面的开发利用提供参考。

白花蛇舌草不同提取工艺对抗肿瘤活性的影响

目的 为研制低毒高效的抗癌制剂 ,确定不同的白花蛇舌草提取物 (汤剂、亲脂提取物、粗多糖 )的抗肿瘤作用。方法 采用水提取法、醇提取法、脱脂水提醇沉法分别制备了白花蛇舌草汤剂、亲脂提取物和粗多糖。用 S-180细胞植入小鼠作为模型 ,进行了抑制肿瘤的试验。结果 白花蛇舌草的水提液 (汤剂 )对 S- 180肿瘤细胞没有明显的抑制作用 ;白花蛇舌草水溶性的多糖和亲脂提取物对 S- 180肿瘤细胞具有显著的抑制作用 ;在抑瘤的同时 ,多糖部分具有对化学损伤的保护作用 ;水溶性的多糖和亲脂提取物合并给药并未显示协同抗肿瘤活性。结论 白花蛇舌草的脂溶性部位和多糖具有良好的抗肿瘤应用前景 。

白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位的抗肿瘤作用。方法将接种S180肉瘤细胞的小鼠分为阴性组、阳性(环磷酰胺,CTX)组、白:半配对组,白半水提醇溶组以及白半水提醇沉组。给药12 d后,称重,取材,记录瘤重,计算抑瘤率、生长抑制率,记录肝脏、脾脏质量并计算指数。HE染色方法观察肿瘤组织细胞的形态学特征,ELISA法检测血清IL-2、IFN-γ、TNF-α含量,细胞免疫荧光标记法检测细胞凋亡。结果CTX组、不同给药组抑瘤率分别为83.46%、50.82%、32.79%、36.61%。与阴性对照组相比,CTX组肝指数、脾指数明显降低(P<0.05,P<0.01);给药各组肝指数和脾指数,明显升高(P<0.05,P<0.01)。HE染色显微镜观察,瘤组织出现大面积坏死区,但提取物组细胞坏死较少。用ELISA法测得,各中药给药组能提高机体IL-2、IFN-γ、TNF-α表达水平。体外细胞凋亡实验初步证明白花蛇舌草、半枝莲药对具有细胞毒作用,其提取物细胞毒作用减弱。结论白花蛇舌草、半枝莲药对及其不同提取部位均具有抗肿瘤作用,提取分离后各部分作用均有所减弱,说明中药配伍作用的合理性以及综合性。

复方白花蛇舌草和半枝莲总黄酮提取工艺的研究

本研究采用正交试验设计法优选复方白花蛇舌草和半枝莲(质量比为1∶1)总黄酮的提取工艺,得到的最佳提取工艺为:用药材30倍量的70%乙醇加热回流提取3次,每次2 h。实验表明本研究所优选的提取工艺方法简便,工艺可行性强。

白花蛇舌草对人肝癌Bel7402细胞凋亡的影响

目的从基因水平研究白花蛇舌草对体外培养的人肝癌Bel7402细胞诱导凋亡的作用及其可能的作用机制。方法采用人肝癌Bel7402细胞常规体外培养,随机设定空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)阳性对照组、白花蛇舌草组。倒置显微镜直接观察细胞形态变化。HE染色法光镜下观察细胞形态改变,计算凋亡指数。采用MTT法检测白花蛇舌草对癌细胞的生长抑制作用。RT-PCR半定量法检测Bcl-xl、p53基因mRNA表达的变化。结果光镜下观察到白花蛇舌草组肿瘤细胞脱壁,有细胞出芽现象等凋亡形态改变;凋亡指数略低于5-Fu阳性对照组,但与空白对照组比较有显著差异(P<0.01);细胞抑制率略低于5-Fu阳性对照组,与空白对照组相比有显著差异(P<0.01);上调p53基因mRNA表达,降低Bcl-xl基因mRNA表达,与空白对照组比较均有显著差异。结论白花蛇舌草抑制人肝癌Bel7402细胞增长,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与激活抑癌基因p53基因、抑制原癌基因Bcl-xl基因表达有关。

白花蛇舌草提取物通过下调Hippo-YAP信号通路促进结肠癌细胞凋亡

目的探讨白花蛇舌草提取物熊果酸、齐墩果酸对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制。方法不同浓度的熊果酸、齐墩果酸作用结肠癌(HCT-8)细胞24、48、72 h后,CCK-8法、平板克隆形成实验检测HCT-8细胞的存活情况。筛选最佳实验条件,将细胞分为对照组和实验组,各组细胞做成细胞爬片,细胞免疫荧光检测YAP1蛋白水平。各组细胞消化离心做成细胞蜡块,免疫组织化学方法检测YES相关蛋白(YAP1)、p53基因(p53)、尾型同源盒转录因子2(CDX-2)、白介素6(IL-6)、第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源等位基因(PTEN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的蛋白水平。结果白花蛇舌草提取物可不同程度抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖。细胞免疫荧光结果显示,对照组YAP1蛋白表达较实验组强。免疫组化结果显示YAP1的表达与TNF-α的表达有一定相关性。结论白花蛇舌草提取物通过抑制Hippo-YAP信号通路的活性,抑制结肠癌HCT-8细胞的增殖,诱导其凋亡。白花蛇舌草提取物可能是一种潜在的肠癌治疗药物。

几种传统中药中多糖的提取及抗肿瘤活性研究

采用超声提取黄药子、黄药子+当归(质量比3∶2)、白花蛇舌草+半枝莲(质量比3∶2)三味传统中药的单复方药中的多糖成分,并应用比色法原理对提取的多糖含量进行测定,其中黄药子+当归(质量比3∶2)的粗多糖含量最大,为16.509%。经测定3种多糖都有一定的抗肿瘤活性,其活性次序为黄药子+当归(3∶2)>白花蛇舌草+半枝莲(3∶2)>黄药子。

白花蛇舌草中黄酮提取工艺的优化及其结构鉴定

[目的]采用微波辅助提取白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)中的黄酮类化合物,并优化其提取工艺,对提取物的化学结构进行鉴定,为白花蛇舌草药用价值的进一步开发提供参考。[方法]用正交试验优化白花蛇舌草黄酮类化合物的最佳提取工艺条件,通过紫外光谱、红外光谱等对提取物的化学结构进行表征。[结果]影响黄酮提取率的因素主次顺序为:提取温度>乙醇浓度>提取时间>料液比;最佳提取工艺为:乙醇浓度为80%,提取时间为40min,料液比为1∶40,提取温度为80℃,在此条件下白花蛇舌草中黄酮的提取率达2.86%。白花蛇舌草的黄酮类化合物主要成分为黄酮醇类。[结论]该研究为白花蛇舌草药用价值的进一步开发提供了参考。

白花蛇舌草-半枝莲药对提取物抑菌活性部位研究

目的通过测定白花蛇舌草-半枝莲药对醋酸乙酯/95%乙醇(1∶1)提取上清液F0、析出浸膏F1、析出浸膏经AB-8大孔树脂富集后组分F2及F2经聚酰胺分离得到的各组分的抑菌活性,寻找药对提取物抑菌活性的活性部位或活性成分。方法采用一剂量法和二倍稀释法测定各提取对5种微生物(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、毛霉、酵母菌)的抑菌活性。结果与结论 F0抑制金黄色葡萄球菌活性最强;F1没有抑菌活性;F1经过大孔树脂富集后组分F2抑菌活性得到显著增强,其抑制枯草芽孢杆菌活性强于F0,抑菌效价值达8.37μg.ml-1;F2经聚酰胺分离得到的F2-10组分是抑制枯草芽孢杆菌的活性部位;各提取物对霉菌和酵母菌均无抑制活性。

白花蛇舌草多糖提取的工艺优化及抗氧化活性研究

目的：优选白花蛇舌草的水提醇沉多糖提取工艺条件。方法：以白花蛇舌草多糖含量为指标,蒽酮比色法测定指标成分含量,在单因素试验基础上,采用L9（34）正交试验考察料液比、超声提取时间、重复提取次数和乙醇浓度对白花蛇舌草多糖含量的影响,优化其提取工艺。并用DPPH自由基清除率法对其抗氧化活性进行测定。结果：白花蛇舌草多糖最佳提取的工艺条件为料液比1：14,提取时间30~40 min,重复提取次数3次,提取乙醇浓度60%。自由基清除实验显示,白花蛇舌草多糖具有浓度相关的自由基清除能力和抗氧化能力。结论：优选的水提醇沉提取工艺稳定可行,所提取白花蛇舌草多糖具有较强的自由基清除效果,是一种极具开发潜力的优良天然抗氧化剂。

白花蛇舌草中熊果酸的提取工艺研究

本研究通过单因素实验,以提取的选择性和提取率为指标,考察了白花蛇舌草中熊果酸的提取过程的几个影响因素;并通过正交实验,对过程参数进行了优化。结果表明,各因素对熊果酸提取效果的影响程度从高到低分别是:提取时间>提取次数>乙醇体积分数>液固比;确定的最适提取条件为:95%乙醇溶液在回流温度下提取两次,每次1.5h,液固比为8:1。