UPLC法测定水红花子中花旗松素及槲皮素的含量

目的 应用超高效液相色谱法(UPLC)建立同时测定水红花子药材中花旗松素和槲皮素含量的方法。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱,柱温25℃,检测波长290 nm,流速0.2 mL·min^(-1),进样量1μL。结果 建立的分析方法方法学考察良好。花旗松素、槲皮素进样浓度分别在3.258~104.272μg·mL^(-1)、2.983~95.452μg·mL^(-1)内呈良好的线性关系(r~2=0.999 9),平均加样回收率为98.8%、98.8%,RSD值为1.9%、2.2%。结论 本方法简便、快速,可在同一波长下快速测定水红花子中花旗松素及槲皮素的含量,为水红花子药材质量控制提供参考依据。

紫外分光光度法测定水红花子中槲皮素的含量

目的采用紫外分光光度法测定水红花子中槲皮素的含量。方法在25℃、最大吸收波长为370nm处测吸光度。结果此法线性范围0．004～0．0119g／L内，r=0．9992，平均回收率为96．55％，RSD为0．78％（n=5）。结论用此方法可测量水红花子中槲皮素的含量。方法简便，灵敏度和准确度较高，结果满意。

水红花子醇提物抑制大鼠组织脂质过氧化反应的体外作用研究

目的研究水红花子醇提物的抗氧化活性。方法用·OH生成系统Fe2++抗坏血酸诱导大鼠心、肝、肾组织匀浆脂质过氧化,用TBA比色法测定MDA含量;用NBT还原法测酵母多糖A刺激大鼠中性白细胞产生的O2-;用分光光度法测H2O2诱发的大鼠红细胞溶血度。结果6.3、12.5、25、50、100、200μg/LEFPO能不同程度抑制Fe2++抗坏血酸诱导的大鼠心、肝、肾脂质过氧化产物MDA生成,其抑制心、肝、肾MDA生成的IC50分别为31.8、32.5、40.2μg/L,量效关系均呈负相关,r分别为-0.886、-0.874及-0.918(P<0·01);能不同程度抑制酵母多糖A刺激中性粒细胞生成O2-,IC50为31.9μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.873(P<0·01);能不同程度抑制H2O2诱发的红细胞氧化溶血,IC50为56.2μg/L,量效关系呈负相关,r为-0.888(P<0·01)。结论水红花子醇提物通过清除·OH、O2-及H2O2发挥抗氧化活性。

水红花子水提物的抗氧化活性

目的研究水红花子水提物的抗氧化活性及其机制。方法用D-半乳糖建立衰老小鼠模型,分别灌胃服用生药量0.8、1.6和3.2g/kg·b.w.的水红花子水提物(n=10),每日1次,共7周。分别用TBA比色法、亚硝酸盐法、DTNB法及Sohal法测定心、肝、肾中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)及脑中脂褐质(LF)含量。结果衰老小鼠心、肝、肾组织中MDA含量升高,SOD及GSH-PX活性降低,脑组织中LF升高。上述3种剂量的EFPO,能不同程度抑制脑组织中LF升高及心、肝、肾组织中MDA升高,其量效关系均呈负相关,相关系数分别为-0.963(相关性检验P<0.01)、-0.981(P<0.01)、-0.966(P<0.05)及-0.978(P<0.01);能不同程度抑制心、肝、肾组织中SOD活力下降,其量效关系均呈正相关,相关系数分别为0.984(P<0.05)、0.990(P<0.01)、0.985(P<0.01);能不同程度抑制心、肝、肾组织中GSH-PX活力下降,其量效关系均呈正相关,相关系数分别为0.984(P<0.01)、0.956(P<0.01)及0.957(P<0.01)。结论水红花子水提物可通过清除·OH,提高SOD及GSH-PX活力而发挥抗氧化活性。

红蓼果实有效成分的指纹图谱研究

对红蓼果实水红花子的黄酮类成分进行研究,采用HPLC色谱法对分布于我国9个地区的水红花子的有效部位槲皮素进行指纹图谱研究,色谱条件:DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为310 nm。结果表明9个不同产地药材的指纹图谱具有较好的相似度,因此可为水红花子的资源品质评价提供一定的科学依据。

水红花子花旗松素乙醇回流法提取工艺优化

研究水红花子花旗松素乙醇回流法提取工艺。在单因素试验的基础上,以乙醇浓度、提取时间、料液比为自变量,以花旗松素提取量为响应值,利用响应面法优化水红花子中花旗松素的提取条件。结果表明:花旗松素的最佳工艺条件为乙醇体积分数63%、提取时间3.4h、料液比1∶19(m∶V)、提取温度95℃、提取2次,该条件下,花旗松素提取量为7.2mg/g。

水红花子炮制品化学成分研究

目的:研究水红花子炮制品的化学成分。方法:利用硅胶色谱柱进行分离,通过波谱数据和理化性质进行化合物结构鉴定。结果:共分离得到8个化合物,分别鉴定为正二十烷酸(Ⅰ),β-谷甾醇(Ⅱ),白桦酯酸(Ⅲ),22-O-(4-hydroxy-3-methoxy-cinnamyl)-docosanoic acid(Ⅳ),3,5,7-三羟基色原酮(Ⅴ),paprazine(Ⅵ),槲皮素(Ⅶ),花旗松素(Ⅷ),胡萝卜苷(Ⅸ)。结论:首次对水红花子炮制品进行了系统分离。

分光光度法测水红花子中花旗松素含量

目的:检测水红花子中花旗松素的含量。方法:采用紫外分光光度法,在常温下(25℃)290nm处,对水红花子乙醇提取物进行吸光度测定。结果:此方法线性范围:0.002～0.01 g/L,花旗松素浓度与吸光度线性关系:y=0.0724x+0.007,r^2=0.9986;平均回收率为99.37%,RSD=0.897%。结论:紫外分光光度法测定水红花子中花旗松素含量操作简便、快速和准确度高,具有一定实用价值。

水红花子对LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制效应及其保胎作用

目的:探讨水红花子对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制及其保胎作用。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为细菌脂多糖(LPS)处理组(B组),水红花子处理组(C组),水红花子及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,用酶组织化学、免疫组化和ELISA方法分别检测非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+和CD204+巨噬细胞、TNF-α的变化。结果:B组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至10.39%。与A组相比,在B组,α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量和阳性面积,以及TNF-α含量均显著增加;在D组,环肌外侧极显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层均接近正常水平。与A、B组相比,C、D组CD204+巨噬细胞数量和阳性面积均显著增多。结论:通过调节子宫巨噬细胞的表型、活性和TNF-α的分泌,可能是水红花子对抗LPS所致流产效应的机制之一。

水红花子对免疫肝纤维化大鼠肝功能及血清肝纤维化标志物的影响

目的观察水红花子对免疫肝纤维化大鼠模型血清肝纤维化标志物的影响。方法 40只wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、水红花子组。除正常对照组外,其余各组均给予腹腔注射无菌猪血清,剂量为0.3mL/100g,每周2次,连续12周。模型对照组、正常对照组每日灌服蒸馏水1mL/100g;其余各组灌服相应药物。采用放射免疫的方法观察肝纤维化大鼠血清肝纤维化指标(HA、LN、Ⅳ-C、PCⅢ)的变化。结果与模型对照组比较,各治疗组血清学标志物均有不同程度改善,其中秋水仙碱组PCⅢ、HA、LN显著降低;水红花子组LN、PCⅢ、HA、Ⅳ-C显著降低。结论水红花子可有效降低肝纤维化血清学指标,其作用优于秋水仙碱。

芪水煎对糖尿病肾病小鼠肝、肾组织细胞外基质调节因子表达的影响

目的基于肝肾同源理论,观察糖尿病肾病(kk-ay)小鼠后期谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶含量(aspartate transaminase,AST)变化以及芪水煎对肝、肾基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloe proteinas-9,MMP-9)及基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)表达的影响。方法采用kk-ay小鼠高糖高脂饮食4周建立糖尿病肾病模型后,随机分为模型组、黄芪水组、通心络组,设立C57BL/6J小鼠作为对照组。予芪水煎及通心络干预12周后,监测各组小鼠血ALT、AST,采用Western Blot、Realtime-PCR检测肝、肾组织MMP-9和TIMP-1蛋白含量及m RNA表达水平。结果与模型组比较,芪水煎组AST显著降低(P<0.01)、ALT呈下降趋势(P>0.05),肝MMP-9蛋白及m RNA表达显著升高(P<0.01),TIMP-1蛋白显著降低(P<0.01),m RNA表达降低(P<0.05),肾MMP-9蛋白及m RNA表达升高(P<0.05),TIMP-1蛋白及m RNA表达降低(P<0.05)。结论 kk-ay小鼠后期会出现肝损伤,芪水煎对kk-ay小鼠肝、肾损伤具有一定的保护作用。

水红花子的化学成分研究

目的研究水红花子的化学成分。方法利用各种色谱技术进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定。结果分离得到4个化合物,分别为:3,3′-二甲基鞣花酸-4′-O-β-D-葡萄糖苷(3,3′-di-O-meth-ylellagic acid-4′-O-β-D-glucopyranoside,Ⅰ)、3,3′-二甲基鞣花酸(3,3′-di-O-methylellagic acid,Ⅱ)、花旗松素(taxifolin,Ⅲ)、槲皮素(quercetin,Ⅳ)。结论化合物Ⅰ为首次从蓼科植物中分得,化合物Ⅱ为首次从该植物中分得。

HPLC法测定芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量

目的：建立高效液相色谱法测定芪红水煎剂中2种主要有效成分花旗松素和槲皮素的含量。方法：采用Waters Sunfire C（18）（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以甲醇-0.5%磷酸溶液为流动相梯度洗脱,流速1 m L/min,检测波长290 nm（花旗松素）、365 nm（槲皮素）。结果：花旗松素和槲皮素线性范围分别为0.075 5~0.120 8μg（r=0.999 4）和0.030 8~0.092 4μg（r=0.999 9）;平均加样回收率（n=6）分别为102.74%（RSD=1.71%）和102.45%（RSD=1.52%）。结论：本法简便、准确,重复性好,可用于芪红水煎剂中花旗松素和槲皮素的含量测定。亦可作为芪红水煎液质量控制方法之一。

HPLC分析比较不同炮制方法对水红花子活性成分的影响

目的:研究不同炮制方法对水红花子中活性成分花旗松素及槲皮素含量的影响。方法:采用HPLC法,Agilent色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液梯度洗脱,检测波长:270 nm,流速:1.0 mL/min,柱温:25℃,比较不同炮制品中花旗松素和槲皮素含量的变化。结果:热高压炮制法水红花子的爆花率最高(压力为14 Pa),其活性成分含量均明显高于传统炮制方法。结论:首次将热高压法用于水红花子的炮制,该工艺设备简单,操作方便,药材的质量可控,为水红花子的炮制方法和质量控制提供参考。

基于ITS2条形码鉴定水红花子及其混伪品

目的：利用ITS2条形码对中药材水红花子及其混伪品进行鉴定研究。方法：为对该中药材进行准确鉴定,共收集71份样本,包含药材正品及其混伪品。通过对样品进行DNA提取、PCR扩增、双向测序,利用Codon Code Aligner软件进行序列质量评价与拼接,获得ITS2序列。用MEGA软件进行序列比对、变异位点及遗传距离分析,采用最近距离法和构建NJ（邻接）树法来评价ITS2条形码的鉴定能力。结果：水红花子药材基原物种红蓼ITS2序列种内遗传距离为0-0.0124,与其混伪品水蓼、酸模叶蓼以及春蓼的种间遗传距离分别为0.0334-0.0508、0.0688-0.0875、0.0379-0.0467。红蓼种内最大遗传距离小于其与混伪品的种间最小遗传距离,表明ITS2条形码可以准确鉴定水红花子与其混伪品。此外,基于ITS2序列构建的NJ树也可将水红花子及其混伪品明显区分开。结论：ITS2条形码是鉴别水红花子药材的有效工具,可为保障该药材生产投料安全提供新的技术手段。

水红花子总黄酮的提取工艺优化

分别采用乙醇回流提取法、索氏提取法、超声波辅助萃取法、水提法对水红花子总黄酮进行提取,以总黄酮提取率为指标,优选出最佳提取方法,并通过正交试验优化其提取工艺。结果表明:乙醇回流提取法具有提取率高、操作简便、成本低等优点,乙醇回流提取法的最佳工艺条件为乙醇溶液体积分数55%、料液比1:24(g/mL)、提取时间4h、提取温度90℃、提取2次,此条件下总黄酮提取率为7.06%。

中药水红花子HPLC指纹图谱的研究

目的:为保证水红花子药材质量稳定可控,研究水红花子药材指纹图谱的测定方法。方法:采用HPLC法测定甲醇提取液的指纹图谱,对28件商品药材进行了比较,并进行了方法学考察。结果:建立了水红花子药材HPLC指纹图谱,发现7个色谱峰为共有峰,确定了其相对保留时间和峰面积比值的范围。结论:在选定的条件下所建立的指纹图谱可以控制水红花子药材商品质量。

水红花子中抗肝脏肿瘤有效成分的提取工艺研究

目的筛选抗肝脏肿瘤药材水红花子的最佳提取工艺。方法以花旗松素、槲皮素含量和干膏收率为考察指标,先对提取溶媒进行单因素考察,再采用正交设计进行优选,最终筛选出水红花子的最佳提取工艺。结果水红花子中抗肝脏肿瘤有效成分最佳提取工艺为用6倍量60%乙醇回流提取3次,每次2 h。结论验证实验表明,筛选的水红花子最佳提取工艺稳定、可行,本实验为充分利用此药材提供了基础资料。

微波法提取水红花子总黄酮的应用研究

在微波单因素提取的基础上,采取L9(33)正交优化试验,探讨乙醇浓度、微波提取时间和料液比对水红花子总黄酮提取率的影响。结果表明,微波提取法影响水红花子总黄酮提取率的主要因素为料液比,其次为乙醇浓度、提取时间。在微波功率为350W的条件下,最佳提取工艺条件为:乙醇体积分数为80%,微波提取时间为90s,料液比(g∶mL)为1∶25。在此条件下,水红花子总黄酮提取率可达5.05%。

水红花子总黄酮的超声波提取及抗氧化性研究

研究水红花子总黄酮的超声波辅助法提取工艺,并对水红花子总黄酮的抗氧化活性进行测定。结果表明:水红花子总黄酮的最佳提取工艺条件为浸泡16h、乙醇浓度55%(v/v)、料液比1:18(g.mL-1)、超声波功率100W、提取时间40min、提取温度70℃、提取次数2,此条件下总黄酮提取量为6.14g/100g;抗氧化实验证明水红花子总黄酮具有清除羟自由基的作用。