茎莴苣F6′H家族基因鉴定及其与鲜切莴苣褐变的关系初探

为深入探究阿魏酰-CoA-6′-羟化酶(feruloyl-CoA 6′-hydroxylase, F6′H)在鲜切莴苣褐变过程中的作用及机制,本研究通过Blastp结合结构域筛选的方法从茎莴苣基因组中搜索鉴定F6′H家族成员,并对其进行生物信息学分析及褐变过程中的表达分析,同时测定了鲜切莴苣贮藏过程中褐变度和总酚含量的变化。结果表明,共鉴定出11个茎莴苣F6′Hs基因,其编码蛋白均为定位于细胞质中的亲水蛋白,氨基酸数在181~840个之间,分子量在20.74~93.35 kDa之间,等电点在5.16~8.36之间,脂肪系数在82.28~102.98之间,不稳定指数为26.13~55.39。鲜切莴苣贮藏过程中LsF6′H9基因明显上调表达,LsF6′H3和LsF6′H11在贮藏4~6 d上调表达,其余基因下调表达或变化较小;褐变度逐渐升高,总酚含量先升高后降低,贮藏6 d时最高。相关性分析结果显示,总酚含量与褐变度呈显著正相关,表明酚类的积累可能是导致鲜切莴苣发生褐变的重要因素;褐变度及总酚含量均与LsF6′H1、LsF6′H2、LsF6′H3、LsF6′H4、LsF6′H9、LsF6′H10和LsF6′H11的表达量呈正相关,特别是总酚含量与LsF6′H9表达量呈极显著正相关,褐变度与LsF6′H9表达量呈显著正相关,表明LsF6′H9可能在鲜切莴苣褐变中扮演重要角色。本研究结果可为深入探究F6′H在鲜切莴苣褐变过程中的作用及机制提供理论依据。

WZS-50F6微量注射泵常见故障维修六例

目前,手动夹为临床控制输液速度最常用的方法,但其不能精准控制输液速度,护理人员工作量较大[1]。为提高输液精准度,减少护理人员工作量,微量注射泵在临床中被广泛应用,尤其是在特殊药物注射、老年及儿童人群中应用较多[2-4]。史密斯WZS-50F6微量注射泵是一款双道微量注射泵,可精准调控输液速度与输液量,确保药物在患者体内发挥最大药效,具有操作简单、流速稳定、精准度高等优势。随着使用时间的延长,WZS-50F6型微量注射泵使用过程中故障频发,严重影响患者治疗效果,且存在医疗安全风险[5]。因此,本研究对WZS-50F6微量注射泵出现的常见故障进行分析,以供临床参考。

TGP超前地质预报技术在隧道F6断裂带的应用研究

为探明F6断裂带对天山胜利隧道的影响范围,文中采用TGP超前地质预报手段对天山胜利隧道进入、离开F6断裂带影响范围区间进行超前地质预报应用研究。结果表明,F6断裂带对天山胜利隧道的实际影响范围小于勘察时已探明的影响范围,TGP超前地质预报手段对长、大断裂带的超前地质预报准确率较高。

采用TRIP2.0软件计算DLR-F6构型的阻力

采用"亚跨超CFD软件平台"(TRIP2.0)数值模拟了DLR-F6构型,主要目的是通过计算DLR-F6构型的安装阻力考察TRIP2.0软件的数值模拟精度,并为运输机构型的气动特性计算积累经验。本文数值模拟采用的多块对接网格,测压和测力的试验结果均来自AIAA CFD Drag Prediction Workshop Ⅱ(DPWⅡ),对比计算结果采用了CFL3D的结果。本文详细研究了网格密度、湍流模型对DLR-F6翼身组合体和翼/身/架/舱复杂组合体两种构型的的总体气动特性和压力分布的影响,计算结果与相应的试验结果取得了较好的一致。本文采用SST两方程模型计算两种构型均得到了网格收敛结果;不同的湍流模型对压差阻力影响较小,对摩擦阻力影响较大;不同的网格密度和湍流模型对压力分布影响较小。

E2F6在物理性低氧及化学性低氧诱导的凋亡中的表达特征(英文)

心肌细胞凋亡性死亡是低氧发生时的重要病理学特征,但低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控机制尚未完全阐明。E2F6是E2F转录因子家族成员之一, 我们新近的研究证实其具有抑制DNA损伤诱导的细胞凋亡作用。但是,E2F6 是否参与了低氧诱导的心肌细胞凋亡的调控尚不清楚。在本研究中,我们初步探讨了E2F6 在物理性低氧及化学性低氧模拟物诱导大鼠心肌细胞系H9c2 细胞凋亡中的表达特征。结果表明:物理性低氧、化学性低氧模拟物去铁胺(desferrioxamine, DFO)和氯化钴(cobaltchloride, CoCl2)均能有效诱导 H9c2 细胞发生凋亡。在物理性低氧及 CoCl2 诱导的 H9c2 细胞凋亡中,内源性 E2F6 mRNA 表达明显下调,但蛋白表达没有明显变化。而在DFO 诱导的凋亡中,内源性E2F6 mRNA及蛋白表达均发生明显下调。这些结果提示,E2F6 可能参与调控DFO 模拟低氧诱导的H9c2 细胞凋亡,而对物理性低氧及CoCl2 模拟低氧诱导的细胞凋亡敏感性较低。此外,DFO 模拟低氧诱导的细胞凋亡机制可能与物理性低氧及 CoCl2 模拟低氧诱导的细胞凋亡机制不同。

鸭胚骨骼肌不同组织Myf6基因表达的发育性变化研究

为研究Myf6基因对鸭肌肉发育的影响,本试验利用实时荧光定量PCR绝对定量技术检测Myf6基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期第13、17、21、25、27天及出生后7日龄胸肌、腿肌发育过程中的表达量。结果显示,Myf6基因在2个品种的胸肌和腿肌中均有表达,在不同品种同一肌肉组织中的表达变化规律一致,而在不同肌肉组织中的表达模式不同,其中在胸肌组织中21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,维持相对较高表达水平;在腿肌组织中13胚龄时表达量较高,17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。上述结果表明,Myf6基因参与了胸、腿肌组织的发育,在胸、腿肌中表达模式不同,推测Myf6基因在胸、腿肌中的调控存在差异,可能与其胸、腿肌不同肌纤维的发育与分化有关。

DLR-F6翼身组合体阻力计算

采用"亚跨超CFD软件平台"(TRIP2.0)数值模拟DLR-F6翼身组合体构型,采用的多块对接网格、测压和测力的试验结果均来自美国AIAA阻力计算小组,对比计算结果采用CFL3D的结果.详细研究网格密度、湍流模型对DLR-F6翼身组合体构型的总体气动特性和压力分布的影响,计算结果与相应的试验结果较一致.采用SST两方程模型得到网格收敛结果;不同的湍流模型对压差阻力影响较小,对摩擦阻力影响较大;不同的网格密度和湍流模型对压力分布影响较小.

DLR-F6翼身组合体数值计算

使用自行研制的混合网格亚跨超声速流场解算器程序MFlow计算了AIAA第三届阻力会议提供的DLR-F6及其带整流装置FX2B情况下的阻力。重点分析了两者的网格收敛特性、阻力极曲线以及压力分布等,并与阻力会议的各个软件的计算结果进行比较。详细分析了DLR-F6翼身结合处后缘附近网格精度对分离气泡计算的影响。计算结果表明,MFlow程序的计算精度与国外软件相近,能够为阻力计算提供比较精确的结果。

miR-185通过调控E2F6抑制肺鳞癌细胞增殖和侵袭

目的探讨微小RNA-185(micro RNA-185,miR-185)对肺鳞癌细胞增殖和侵袭能力的作用及其可能的作用机制。方法人肺鳞癌细胞系(NCI-H520、NCI-H226)以及正常肺上皮细胞(BEAS-2B)为实验用细胞;q RT-PCR检测miR-185表达量;miR-NC(对照)和miR-185 mimics(miR-185类似物)利用Turbofect进行转染;Western blot检测E2F6的蛋白表达量;双荧光素酶报告基因检测miR-185与E2F6的靶向调控关系;MTT检测细胞的增殖能力;细胞侵袭试剂盒检测细胞的侵袭能力;构建pc DNA.3.1-E2F6重组载体,并转染肺鳞癌细胞过表达E2F6。结果 miR-185表达量在肺鳞癌细胞中显著降低(P<0.01)。miR-185靶向抑制E2F6基因(P<0.05)。转染miR-185 mimics显著上调miR-185的细胞含量(P<0.01)并抑制E2F6蛋白表达(P<0.01),肺鳞癌细胞增殖能力(P<0.05或P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)亦显著受抑。转染pc DNA.3.1-E2F6到miR-185含量升高的细胞,E2F6蛋白表达量显著升高(P<0.01)且细胞增殖(P<0.01)和侵袭能力(P<0.05)上升。结论 miR-185可以通过靶向E2F6抑制肺鳞癌细胞增殖和侵袭。

籼粳交组合培矮64S／日本晴F2、F3及F6代主要农艺性状分析

采用方差分析和相关分析等方法对籼粳交组合培矮64S/日本晴F2、F3及F6代分蘖数、有效分蘖数和株高等7个主要农艺性状进行了研究。结果表明,7个农艺性状在双亲之间均存在显著或极显著差异,亲本在不同年份和不同地点表现出较大差异,株高表现变异系数较大,分别为14.4%和22.8%。各性状在3个世代中除了F2分蘖率、F3齐穗期和F6株高,其余各性状均呈连续变异,分布频率大致接近正态分布,同时存在双向超亲分离现象。各性状不同世代相关系数有一定的变化,但不改变其方向。这些结果可以为水稻数量性状基因座分析提供有价值的信息,也可为水稻遗传改良提供理论依据;本文还对选用测序水稻品种为亲本构建群体进行农艺性状研究的意义进行了讨论。

粉尘螨6类变应原(Derf6)的克隆表达、纯化及免疫学特性鉴定

目的构建粉尘螨6类变应原(Dermatophagoides farinae,Derf6)基因的高效原核表达载体,并进行表达、纯化及生物学功能分析。方法根据Derf6基因已知序列,设计1对引物,通过对纯培养的粉尘螨提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增出Derf6基因片段,PCR产物克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希菌(E.coliTop10),经PCR和酶切鉴定并测序。将上述所得阳性克隆菌株扩大培养,碱裂解法提取质粒,所得重组质粒pMD18-T-Derf6和空质粒pET-24a同时用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,经纯化后连接并转化至E.coliTop10。构建的重组质粒pET24a-Derf6经PCR、酶切和测序鉴定后,再转化至E.coliBL21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Westernblotting)鉴定其表达效果,用Ni+离子亲和层析柱纯化重组质粒pET24a-Derf6表达产生的组氨酸重组蛋白。结果构建了重组质粒pMD18-T-Derf6和pET24a-Derf6。SDS-PAGE结果表明Derf6基因在E.coliBl21(DE3)中获得良好的表达,所得重组蛋白相对分子质量(Mr)为31000,与理论值一致,经亲和层析纯化后,SDS-PAGE结果显示单一条带。该蛋白以尘螨过敏患者血清进行Westernblotting,结果表明具有良好的IgE结合活性。结论克隆、表达并纯化了具有良好尘螨致敏患者IgE结合活性的Derf6。

根霉菌F6的分离复壮研究

从活化液的选择、改变分离操作方法、选择有效菌落三方面进行了根霉菌F6的分离复壮研究。结果表明,用PDA营养液代替生理盐水作根霉F6分离源的活化液、制备孢子悬浮液时不用玻璃珠击打分散、分离培养16h后选择直径为0.8～1.0cm的菌落(菌丝稀疏型)为初筛对象较容易获得复壮菌株。

米根霉F6的微波诱变

本文利用微波诱变技术对产糖化酶米根霉菌F6进行诱变,结果筛选到一株糖化酶高产菌株F6-20d,不仅糖化酶活力提高了3.7倍,而且有很好的遗传稳定性。

双歧杆菌属特征性酶F6PPK测定条件的优化

以两歧双歧杆菌为材料,进行了双歧杆菌属特征性酶F6PPK测定条件的优化。实验首先改良了原初文献(Scardovi法)F6PPK酶活测定中对照反应管的设置,又对双岐杆菌培养时间、细胞破碎方法、底物浓度、比色波长、反应温度等条件进行了优化。实验表明,双岐杆菌培养18 h,收集菌体,以超声波法破碎细胞制备粗酶液,采用4%的底物浓度,将酶液与底物于40℃保温30 min,最终反应物于500 nm比色,所得F6PPK酶活测定结果更可靠。

牛TRAF6基因编码区的克隆及序列分析

为了探讨牛TRAF6基因的结构与功能,采用基因克隆技术分离了牛TRAF6基因的编码区序列,并采用生物信息学方法分析了该基因及其所编码的蛋白质的序列特征、结构和功能。结果表明:分离了TRAF6基因1803 bp的cDNA序列(GenBank登录号为DQ471669),编码区长度为1 629 bp,编码542个氨基酸(GenBank登录号为ABF06558),位于细胞核、细胞质、线粒体、内质网等多种细胞器上,分子量为61.57176 ku,等电点为6.09,含有RING-finger、zf-TRAF和MATH_TRAF6结构域。该蛋白与人、小鼠和大鼠TRAF6蛋白的同源性分别为89%、84%和82%,其结构域的同源性均达到95%以上。根据各物种间TRAF6蛋白的高同源性,结合人和小鼠TRAF6蛋白在TNF/TLRs/TIR超家族介导的信号转导途径中的重要作用,推测牛TRAF6蛋白也可能参与调节多种信号通路,在免疫反应、炎症反应、细胞分化和凋亡等生物学过程中发挥重要功能。

生肌决定因子Myf6基因多态性与畜禽生产性状的关系

论文简介了Myf6基因的结构特征、功能及表达的时效性,综述不同物种Myf6基因的变异特征以及Myf6基因的不同基因型与畜禽生产性状的相关性,以期为提高畜禽的产肉潜力及改善肌肉品质提供辅助标记选择依据。

Lactobacillus fermentum F6的增殖培养基优化及高密度发酵的研究

对分离自少数民族传统乳制品中的Lactobacillus fermentum F6菌种的增殖培养基进行优化,并对其高密度发酵条件进行探索。通过测定不同组成培养基中菌体在600nm波长下的光密度和发酵液在不同发酵条件下的活菌数,得到最适增殖培养基配方及其高密度发酵条件。增殖培养基配方为:蔗糖62.0g/L、酵母粉35.5g/L、大豆蛋白胨12.0g/L、柠檬酸1.35g/L、柠檬酸钠22g/L、MgSO4·7H2O2g/L、MnSO4·5H2O100mg/L、Tween-801g/L。在5L发酵罐中,Lactobacillus fermentum F6经优化发酵条件,其活菌数可达到2.30×1010CFU/mL,加入保护剂经冷冻干燥后活菌数可达到1.45×1011CFU/g,存活率为79.11%。中试培养液中活菌数可达1.02×1010CFU/mL,存活率为58%。以上优化的增殖培养基和高密度发酵条件为Lactobacillus fermentum F6的工业化生产奠定了基础。

过表达E2F6基因抑制BRD7基因启动子活性

BRD7基因是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新bromodomain基因(GenBank登录号AF152604).它在鼻咽癌细胞和组织中表达明显下调,过表达BRD7基因可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期的进程.前期工作已克隆了BRD7基因启动子区,并将其启动子定位于450bp(-404～+46bp)的区域.为了进一步揭示BRD7基因在鼻咽癌细胞和组织中表达下调的分子机制,生物信息学分析表明,BRD7基因启动子-229至-243bp为一个E2F6转录因子结合位点共有序列,电泳迁移率实验结果表明转录因子E2F6特异性地结合于BRD7启动子区.荧光素酶检测和绿色荧光蛋白表达检测都证实,过表达E2F6基因能抑制BRD7基因启动子活性.

肺鳞癌中E2F1、E2F6及TPX2的表达及临床意义

目的探究E2F1、E2F6及Xklp2靶蛋白(TPX2)在肺鳞癌中的表达情况及临床意义。方法选取2019年2月至2020年10月于本院收治进行手术的肺鳞癌患者58例。取肺鳞癌组织作为研究样本,取癌旁正常组织作为对照样本。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测E2F1、E2F6、TPX2的相对表达量,卡方检验分析E2F1、E2F6、TPX2表达与肺鳞癌患者临床病理特征的关系,Pearson法分析肺鳞癌组织中E2F1、E2F6、TPX2相对表达量间的相关性。结果肺鳞癌组织中E2F1、E2F6、TPX2表达水平均明显上调(P<0.05);肺鳞癌组织E2F1的表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、临床分期、吸烟史无关(P>0.05),与淋巴转移、肿瘤分化程度有关(P<0.05);E2F6的表达与患者年龄、性别、吸烟史无关(P>0.05),与肿瘤直径、淋巴转移、临床分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05);TPX2的表达与患者年龄、性别、肿瘤直径、吸烟史无关(P>0.05),与淋巴转移、临床分期、肿瘤分化程度有关(P<0.05);E2F1、E2F6、TPX2表达水平间相互正相关(P<0.05)。结论肺鳞癌组织中E2F1、E2F6、TPX2的表达均明显上调,彼此关系密切,均与淋巴转移、肿瘤分化程度有关,可能共同参与肺鳞癌发生发展过程。