脑膜炎球菌表面蛋白fHBP与PorA的融合表达及其免疫原性

目的构建脑膜炎球菌（Neisseria meningitidis,Nm）表面蛋白fHBP重组表达质粒,并与PorA蛋白融合表达,对单抗原fHBP和融合抗原fHBP-PorA的免疫原性进行检测。方法筛选并优化fHBP和PorA基因序列,设计连接片段将PorA连接至fHBPC-端,构建重组表达质粒pET-24b-fHBP和pET-24b-fHBP-PorA,分别转化E.coli BL21（DE3）感受态细胞,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经镍柱亲和层析和凝胶过滤层析后免疫家兔,制备抗血清,采用间接ELISA、流式细胞术和微量血清杀菌力试验（serum bactericidal assay,SBA）评价抗原的免疫原性。结果经双酶切和测序鉴定,两个蛋白的重组表达质粒构建正确。重组蛋白fHBP以可溶形式表达,fHBP-PorA以包涵体形式表达,纯化后纯度均在90%以上。抗血清滴度均在1.0×10~5以上。流式细胞术检测显示,抗血清与Nm可发生特异性结合,且fHBP-Por A抗血清显示出一定的交叉反应。fHBP和fHBP-PorA抗血清对Nm29019的杀菌滴度为1∶128。结论 fHBP具有较好的抗原性和免疫原性,具备B群脑膜炎疫苗开发前景。多抗原融合策略需更多的优化考虑。

B群脑膜炎球菌重组H因子结合蛋白的免疫原性研究

目的:通过检测血清抗体滴度和杀菌抗体检测(SBA)评价重组H因子结合蛋白(factor H binding protein,fHBP)的免疫原性。方法:选择并合成fHBP序列,连接至pET43.1a质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达两个亚家族的重组fHBP蛋白,fHBPA和fHBPB,经过纯化后免疫家兔和小鼠,通过ELISA和SBA试验检测免疫抗血清效价和B群脑膜炎球菌流行菌株的杀菌滴度。结果:fHBP免疫兔血清效价均大于2.0×10^(6),免疫小鼠血清效价高于1.0×10^(6)。69株流行株SBA试验中fHBP免疫兔血清对41株A亚家族和20株B亚家族均有大于1∶128杀菌滴度,亚家族靶菌之间没有交叉保护作用。fHBPA小鼠血清对A亚家族流行株Nm210902、Nm211009、Nm450522平均滴度为1∶1024、1∶608、1∶861,对Nm510703、Nm311304、Nm431002流行株的滴度为1∶234、1∶861、1∶430;fHBPB小鼠血清对B亚家族流行株Nm311302、Nm311113和Nm321114的杀菌滴度分别是1∶2896、1∶1878和1∶430。而fHBPA和fHBPB混合蛋白质免疫鼠血清Nm210902、Nm510703和Nm311302平均滴度分别1∶876、1∶274、1∶1858,对3株靶菌均存在有效杀菌。结论:fHBP免疫抗血清效价均在1.0×10^(6)水平以上,对61株B群流行株的杀菌滴度大于1∶128,对69株B群脑膜炎球菌流行株有94.2%的保护效果。