基于6G AIaaS的分布式网络框架及技术方案

AI是6G的核心技术之一,AI与移动通信网络的深入融合一方面使能运营商的生产和运营效率,另一方面通过提供AIaaS并开放给各类行业和普通消费者,满足第三方对AI的功能、性能、隐私和个性化的需求,支撑6G网络实现普惠智能的愿景。针对此愿景,分析了AI辅助网络自动化和面向第三方AI服务两大类场景需求,提出了基于AIaaS的新型网络架构,分析了数据双通道、FLaaS、EF4AI等关键技术,解决数据高效传输、用户隐私保护和AI能力开放等问题,为运营商AIaaS业务提供了有效、可行的实现方法。

基于磁分离-上转换荧光标记的副溶血性弧菌免疫检测新方法研究

将上转换荧光标记与磁分离富集技术相结合,通过免疫识别成功构建了一种检测副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）的新方法.首先通过水/溶剂热法合成NaY0.78F4：Yb0.20,Er0.02上转换荧光纳米颗粒,并对其表面进行氨基功能化修饰,同时一步法合成了氨基化Fe304磁性纳米颗粒.分别将副溶血性弧菌全菌抗体与磁性纳米颗粒连接作为捕获探针,将副溶血性弧菌的鞭毛蛋白A抗体与上转换荧光纳米颗粒连接作为信号探针.通过免疫识别形成捕获探针-目标菌-显示探针的“三明治”结构复合物,利用980 nm激光诱导荧光进行检测.在实验优化条件下,上转换荧光强度与副溶血性弧菌浓度在5×103～5×105 cfu/mL范围内呈良好线性关系,检测限为1×103 cfu/mL.用鲫鱼进行加标回收实验,结果表明,本方法准确性良好.

嗜肺军团菌flaA基因的克隆及原核融合表达

目的构建嗜肺军团菌鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)的融合表达载体,并在原核系统表达,为进一步研究鞭毛亚单位蛋白的致病作用和免疫保护性提供前提条件。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR扩增获得嗜肺军团菌flaA基因,与带有硫氧还蛋白基因(Trx)的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),并经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-flaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Western blot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了嗜肺军团菌1435bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-flaA,SDS-PAGE及Western blot分析显示重组质粒pET-flaA在大肠杆菌中得到了高效融合表达。结论成功构建嗜肺军团菌flaA基因重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。

哈维氏弧菌FlaA基因的克隆、序列分析及真核表达质粒的构建

哈维氏弧菌是水产病害中常见的致病菌.参照基因库上登录的弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因序列设计简并引物,PCR扩增哈维氏弧菌TS-628株的FlaA全基因,并克隆到pMD 18-T载体中测序,经序列分析该基因全长1 140 bp,编码379个氨基酸.与基因库中其他弧菌的同源基因序列比较显示,哈氏弧菌FlaA基因与霍乱弧菌FlaA基因的同源性最高(79.5%),该基因编码的多肽缺乏半胱氨酸,并在N-,C-两端的氨基酸序列较为保守,中间区域的变异较大.对该蛋白的氨基酸组成及空间结构进行了分析和预测,并推测该蛋白质的平均分子量为40.6 kDa.在该基因末端加上一段编码Flag短肽的核苷酸序列后克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),获得带哈氏弧菌鞭毛丝蛋白FlaA基因的真核表达重组质粒pcDNA-FlaA-tag,为其DNA疫苗的进一步研究奠定了基础.

mompS-linker-flaA融合基因原核表达载体的构建及诱导表达

目的在嗜肺军团菌主要外膜蛋白S基因(mompS)和鞭毛亚单位蛋白基因(flaA)基因间加入一段柔性链接头(Linker),以构建mompS-Linker-flaA融合表达载体,并使其在大肠杆菌中表达。方法以嗜肺军团菌1型DNA为模板,PCR分别扩增获得嗜肺军团菌mompS基因和flaA基因,与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建含mompS-Linker-flaA基因的重组质粒pET-LpSLF,经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达Trx-MOMPS-Linker-FlaA融合蛋白,用SDS-PAGE及Westernblotting进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,我们扩增出了嗜肺军团菌906bp的mompS及1440bp的flaA基因,成功构建了重组质粒pET-LpSLF,SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组质粒pET-LpSLF在原核系统中得到了表达。结论嗜肺军团菌mompS-Linker-flaA基因在大肠杆菌中得到了表达,为进一步从分子水平研究其免疫原性、免疫保护性及其在临床诊断上的应用价值提供研究基础。

嗜肺军团菌flaA基因DNA疫苗的构建及其免疫保护性研究

目的构建flaA基因的DNA疫苗,观察其对嗜肺军团菌感染的免疫保护作用。方法用限制性核酸内切酶从重组质粒pET32a-flaA上切下flaA基因,亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),重组子经限制性酶切分析、PCR鉴定正确后,命名为pcDNA3.1-flaA。将18只BALB/c雌性小鼠随机分为3组,pcDNA3.1-flaA实验组肌肉接种pcDNA3.1-flaA质粒100μg,2w后加强免疫一次,2个对照组分别肌肉注射等体积的生理盐水和100μg空质粒,加强免疫后3w小鼠鼻腔滴注嗜肺军团菌Lp1菌液进行攻击感染,感染4w后,检查小鼠肺组织带菌量,观察肺组织病理形态学改变。结果成功构建了真核表达重组质粒pcDNA3.1-flaA,攻击感染实验表明,pcDNA3.1-flaA免疫组肺组织带菌量显著少于生理盐水对照组和空质粒对照组(P<0.05),且肺组织病理变化症状较pcDNA3.1对照组和生理盐水对照组的肺轻微。结论由flaA基因构建的嗜肺军团菌DNA疫苗能诱导小鼠产生保护性免疫。

框镜鲤维氏气单胞菌CY0806株鞭毛flaA基因的克隆与生物信息学分析

以框镜鲤Cyprinus carpio维氏气单胞菌Aeromonas veronii CY0806株细菌基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得flaA基因,将其克隆并测序,测序结果与气单胞菌属的不同菌株进行相似性分析,并对flaA基因编码蛋白质进行生物信息学分析.结果显示:获得框镜鲤维氏气单胞菌鞭毛flaA基因,长915 bp,编码304个氨基酸,系统进化树分析,其与其他维氏气单胞菌flaA基因处于同一分支,相关生物信息学分析显示,flaA基因编码的蛋白质相对分子质量32 098.66,等电点5.57,半衰期30 h,不稳定系数为32.31,脂肪系数81.05,不存在信号肽和跨膜区,二级结构预测:flaA基因以α螺旋和β折叠为主,同时,以同源建模法预测了flaA基因编码蛋白的三维立体结构.

福建省食品中分离的空肠弯曲菌株鞭毛蛋白基因flaA的PCR-RFLP分型

目的:采用PCR-RFLP基因分型方法对分离自福建省不同地区不同种类食品中的空肠弯曲菌株的鞭毛蛋白基因flaA进行分型,掌握福建省食品中空肠弯曲菌的基因型别,为流行病学追踪调查提供科学依据。方法:采用欧洲弯曲菌实验室网络Campynet推荐的空肠弯曲菌鞭毛蛋白基因flaA的PCR-RFLP分型方法(http://Campynet.vetinst.dk/Fla.htm)。即用PCR技术对弯曲菌的鞭毛蛋白基因flaA上的一个1700 bp片段进行扩增,再用限制性内切酶DdeI对PCR产物进行酶切,通过凝胶电泳并分析酶切图谱。结果:目前福建省食品中分离的空肠弯曲菌基因型别较多样,34株空肠弯曲菌可分为18个型别。不同地区分离的菌株其基因型多不相同,只有4个型别在不同地区的菌株间有重复。结论:空肠弯曲菌鞭毛蛋白基因flaA的PCR-RFLP分型方法分辨率高,可重复性好,不需要特殊设备,且操作简单、快速,适合于实验室开展,且方法标准化后,能将世界各地获得的数据进行比较,从而能更好的了解各个基因型的区域分布和流行趋势。

幽门螺杆菌flaA基因在大肠杆菌中的表达与鉴定

目的 :观察幽门螺杆菌 (H .pylori )flaA基因在大肠杆菌中的表达。方法 :用PCR方法扩增flaA基因 ,然后插入原核表达载体pMAL c2x进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果 :特异PCR和酶切鉴定证实flaA基因克隆入表达载体 ,并以融合蛋白形式MBP FLA高效表达 ,约占细胞总蛋白的 2 8%。该融合蛋白可与H .pylori阳性病人血清和小鼠H .pylori全菌抗体发生特异反应。结论 :成功构建了能高效表达H .pyloriFlaA蛋白的重组质粒 ,为H .pylori多价基因工程疫苗的研制奠定了基础。

益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ^(28)启动子的抑制作用(英文)

为了研究益生菌发酵乳无菌提取物对食源性有害微生物(空肠弯曲杆菌)有毒基因表达的抑制作用,以利用空肠弯曲杆菌的有毒基因flaA σ28启动子和无启动子的质粒pRYluxCDABE联结构建的生物冷光转基因模型为试验材料,通过检测生物发光特性的方法,研究了空肠弯曲杆菌有毒基因flaA表达与益生菌(5种双岐杆菌,6种乳酸杆菌)发酵乳无菌提取物之间的关系。结果表明,益生菌发酵乳无菌提取物对空肠弯曲杆菌flaA σ28启动子的活性有显著的抑制作用(P<0.05),并可显著抑制空肠弯曲杆菌有害基因flaA的表达。

幽门螺杆菌flaA基因表达载体的构建和产物免疫性的鉴定

采用高保真PCR从幽门螺杆菌Y0 6株DNA中扩增全长flaA基因片段 ,T A克隆后测定核苷酸序列 ,构建 pET32a的flaA表达载体 ,在E .coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达 ,采用Hp全菌抗体的westernblot和兔抗融合蛋白血清的免疫扩散试验鉴定其免疫性。所克隆的flaA基因核苷酸和氨基酸序列与文献报道的同源性分别为 96 .2 8%～ 97.13%和 99.4 1%～ 10 0 %。pET32a flaA BL2 1DE3系统表达的FlaA融合蛋白量高达细菌总蛋白的 4 0 %～ 5 0 %。FlaA融合蛋白能与Hp全菌抗体及家兔免疫血清发生结合反应。

猪支气管败血波氏杆菌FlaA基因克隆与序列分析

参考相关资料，针对支气管败血波氏杆菌Bordetella bronchiseptica FlaA基因上游序列选择合成1对特异性引物，对贵州分离株（B8株和B27株）进行PCR扩增，将扩增产物连接在pMD18-T载体上，并转化到DI-L5a感受态细胞中，提取重组质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果获得分子长为237bp的特异性DNA片段；核苷酸同源性分析表明，贵州分离株间的同源性高达99．1％，与Bb参考株的同源性为97．8％～99．6％，与Bpp参考株的同源性为95．6％-97．4％；系统进化树分析表明，贵州分离株与Bb参考株亲缘关系较近，而与Bpp参考株亲缘关系远。

flaA基因的缺失对绵羊脑炎单核细胞增生李斯特菌的细胞黏附、侵袭能力及生物被膜形成能力影响的研究

为了探究flaA基因对单核细胞增生李斯特菌LM90SB_2黏附和侵袭MBMEC、RAW264.7能力、生物被膜(BF)形成能力的影响,本研究分别进行了flaA基因缺失株LM90SB_2-ΔflaA与野毒株LM90SB2对细胞黏附和侵袭试验,定性定量分析了他们生物被膜形成能力以及小鼠不同脏器中载菌量差异。结果显示:LM90SB_2-ΔflaA对MBMEC的黏附菌数较野毒株LM90SB_2低,且两者差异性显著(P<0.05),两者对MBMEC的侵袭数差异性不显著(P>0.05),而LM90SB_2-ΔflaA对RAW264.7的黏附和侵袭数均显著低于野毒株LM90SB_2(P<0.05);LM90SB_2-ΔflaA与LM90SB_2的BF形成规律基本相同,但缺失株形成的BF总量显著低于野毒株的(P<0.05),且与野毒株相比,缺失株的BF结构中核酸与多糖的分布均松散、稀疏、散点状分布。本研究结果表明,flaA基因对LM90SB_2的细胞黏附和侵袭能力均有影响,在其BF形成过程中发挥着重要的作用。

空肠弯曲菌flaA基因序列及功能预测分析

[目的]对空肠弯曲菌空肠弯曲菌flaA基因的序列及功能进行预测分析。[方法]分析了多个空肠弯曲菌flaA核酸及氨基酸序列组成和序列差异性;预测分析了flaA基因密码子使用偏好性、蛋白结构和功能域、Fla A与相关功能蛋白的互作情况。[结果]不同菌株的flaA基因序列存在差异性,且差异主要存在于序列的中间区域。不同空肠弯曲菌菌株的同一基因在密码子选择上存在差异。Fla A与多个蛋白存在不同形式的相互作用。[结论]该研究可为空肠弯曲菌flaA基因序列分析和功能研究应用提供基础和依据。

幽门螺杆菌菌毛蛋白FLaA IgY的制备及体外抑菌实验

目的:制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)菌毛蛋白FlaA卵黄免疫球蛋白(yolk immunoglobulin,IgY),并进行体外抑菌实验,为治疗H.pylori口服药物的研发奠定基础.方法:采用原核表达制备的FlaA蛋白,将重组FlaA菌毛蛋白免疫蛋鸡获取FlaA IgY,采用间接ELISA的方法检测FlaA IgY的效价.通过将其与肠道中常见菌群乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌进行抗体抗原结合反应,检测其是否与肠道中其他菌群存在交叉反应.评价0.1、1、5 mg/mL低、中、高3种不同浓度的FlaA IgY的体外抑菌实验效果.结果:纯化后的FlaA蛋白浓度为2.97 mg/mL.经重组FlaA IgY免疫制备IgY在第3次免疫1 wk后效价可达到1∶12800,特异性检测结果显示,FlaA IgY不与肠道中常见菌发生交叉反应,与H.pylori全菌和重组FlaA反应强烈.体外抑菌结果显示,0.1、1、5 mg/mL的FlaA IgY处理后的H.pylori菌液浓度与对照组菌液浓度相比具有显著差异(0.324±0.033,0.078±0.012,0.014±0.003 vs 0.539±0.023,P<0.01),表明低、中、高3组浓度的FlaA IgY均能一定程度的抑制H.pylori的生长.0.1 mg/mL IgY的抑菌作用主要表现在1-6 h之间,6 h后抑菌作用基本丧失.1 mg/mL FlaA IgY处理组的H.pylori在1-24 h之间生长较为缓慢,5 mg/mL FlaA IgY处理组菌液浓度在1-24 h之间基本无变化.108 CFU/mL H.pylori经3组不同浓度FlaA IgY处理24h后,低IgY浓度组菌液浓度与其余2组菌液浓度相比差异显著(0.078±0.012,0.014±0.003 vs 0.324±0.033,P<0.01),5 mg/mL FlaA IgY在24 h内能彻底抑制H.pylori的生长.结论:制备的FlaA IgY效价较高,特异性强,不与肠道常见菌群发生交叉反应.5 mg/mL的FlaA IgY在体外对H.pylori具有很强的抑制作用.

人胃粘膜幽门螺杆菌的flaA基因的变异

我们对52例胃粘膜活检标本和18株 Hp 临床分离株进行 Hp 特异的16S rRNA 基因和鞭毛素 A 基因 PCR 扩增和 PCR-RFLP 及 PCR-RFLP-SSCP 分析,以检测 Hp 鞭毛素 A 基因的变异性,进而研究其与 Hp 致病性的关系。结果对43例 Hp(+)的 flaA 基因 PCR-RFLP(HindⅢ)大约可分7个型(变异检出率为16.3%),而PCR-RFLP-SSCP 可分37个型(变异检出率为86.0%),两者有非常显著性差异。本研究表明,flaA 基因变异性极大,PCR-RFLP-SSCP 是检测其变异的有效方法。

利用AES法和FLAA法测定底质中的铅

:利用萃取火焰原子吸光法和石墨炉原子吸光法 (标准添加法 )共同对底质中的 Pb进行测定 ,测定结果表明此方法能减少 Pb的基体干扰 。

用PCR检测鸡的弯杆菌

埃及研究人员应用PCR而不需增菌培养检测鸡体内的弯杆菌。这种PCR用大肠杆菌VC167鞭毛蛋白flaA基因的一个靶区。来源于流行鸡场肉鸡的79份泄殖腔拭子提取的DNA在PCR上的450—bP区中得到扩增信号。在该测定中,用从9种肠道和6种非肠道微生物提取的DNA作为阴性对照,不能与探针杂交。将所有泄殖腔样品直接在弯杆菌血液琼脂平板上培养不能产生任何生长。

空肠弯曲菌flaa—PCR—RFLP分子检测技术的初步应用

空肠弯曲菌（Campylobacter jejuni）是导致细菌性肠炎的常见病原菌，作为食源性病原菌，主要是由于食用了被污染的食物、水等而感染，建立快速、准确的分子亚分型方法对于追踪污染来源和监控暴发流行具有重要意义。PCR-RFLP（PCR restriction fragment length polymorphism）是针对单基因的一种亚分型方法，能够在短时间内对大量菌株进行调查研究，不需要特殊设备，普通临床实验室即可开展，已被应用于多种人兽共患病原菌的流行病学监测和溯源性分析。本研究选择空肠弯曲菌鞭毛基因，应用限制性内切酶Dde Ⅰ，建立针对空肠弯曲菌的flaA—PCR-RFLP方法，并对来源于腹泻病人和鸡的280株空肠弯曲菌分离株进行分子亚分型研究分析。