红花清肝十三味丸通过激活HNF4α改善肝功能的保肝机制研究

[目的]探讨红花清肝十三味丸(HHQG)通过激活肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)改善肝功能的保肝作用机理。[方法]将45只C57BL/6J小鼠随机分为对照组、CCl_(4)损伤组、HHQG组,每组15只;HHQG组小鼠灌胃剂量为0.6165 g/(kg·BW)的HHQG,每天1次,持续7 d,对照组和CCl_(4)损伤组灌胃等体积的无菌蒸馏水;末次灌胃4 h后,对照组小鼠腹腔注射剂量为5 mL/(kg·BW)的橄榄油,CCl_(4)损伤组和HHQG组小鼠腹腔注射相同剂量的CCl_(4)与橄榄油混合液(CCl_(4)∶橄榄油=1∶4,V/V)进行肝损伤造模;分别在造模后第2、5、7天采集各组小鼠血液及肝脏组织样本;记录各组小鼠在试验期间的体重;测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及总超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用HE染色法及Masson染色法观察肝脏病理组织学变化;应用转录组测序(RNA-seq)技术分析差异基因富集通路;利用免疫组织化学技术检测HNF4α蛋白的表达情况。[结果]与对照组相比,在造模后第1~4天以及第6~7天,CCl_(4)损伤组小鼠体重显著(P<0.05)或极显著(P<0.01或P<0.001)降低;与CCl_(4)损伤组相比,在造模后第4天以及第6~7天,HHQG组小鼠体重显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)增加。与对照组相比,在造模后第2天,CCl_(4)损伤组小鼠血清ALT和AST活力极显著(P<0.001)升高;与CCl_(4)损伤组相比,在造模后第2天,HHQG组小鼠血清ALT和AST活力显著(P<0.05)降低。HE染色及Masson染色观察结果显示,在造模后第2、5、7天,与CCl_(4)损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织损伤程度明显改善。KEGG信号通路富集分析表明,与CCl_(4)损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织中过氧化物酶体增殖物激活受体、脂肪酸降解、脂肪酸代谢等信号通路上调,核糖体、甘油磷脂代谢、甲状腺癌症等信号通路下调。与CCl_(4)损伤组相比,HHQG组小鼠肝脏组织中与肝脏分化相关的基因群(HNF4α、ATF5、Cebpb等)显著上调。免疫组织化学分析显示,与CCl_(4)损伤组相比,在造模后第2、5天,HHQG组小鼠肝脏组织中HNF4α表达量明显增加。[结论]HHQG通过激活HNF4α,抑制肝脏氧化损伤、促进肝脏组织修复以及维持肝脏功能,改善小鼠肝损伤,从而发挥保肝效应。

利用Hnf4α敲除的小鼠肝脏类器官探究发育模型的应用潜力

目的探讨胆管类器官(ICO)分化模型用作肝脏发育模型的应用潜力。方法结合CRISPR/Cas9基因编辑技术和ICO分化模型,使用分别在扩增培养基、分化培养基及敲除肝细胞核因子4α(Hnf4α)后在分化培养基培养的类器官的全转录组测序数据分析ICO的转分化过程,使用公共测序数据集分析胎肝发育过程中的分化,并从基因表达的变化趋势、生物学功能,以Hnf4α为例的regulon调控关系这三个方面对两种分化过程进行比较。结果ICO转分化过程中基因表达的变化趋势与胎肝发育总体一致;转分化过程中表达上调的差异基因主要富集在与肝实质细胞生物学功能密切相关的代谢相关通路;ICO转分化过程中Hnf4α的下游靶基因与胎肝发育部分相似。结论ICO转分化模型可以部分模拟胎肝发育中的分化过程。

小檗碱对高果糖饲养诱导胰岛素抵抗大鼠肝组织HNF-4α表达的影响

目的:探讨小檗碱对高果糖饲养诱导胰岛素抵抗大鼠肝细胞核因子(hepatocyte nuclearfactor-4α,HNF-4α)表达的影响以及其改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:高果糖饲料喂养SD大鼠6wk,建立胰岛素抵抗模型;大鼠分为4组:正常对照组(普通饮食)、普通饮食+小檗碱处理组、高果糖饮食组及高果糖饮食+小檗碱组;小檗碱按187.5mg/(kg·d)灌服4wk;测定血糖、血清胰岛素、胰岛素抵抗指数及甘油三酯的变化;用RT-PCR法及免疫印迹法观察肝脏HNF-4α基因及蛋白的表达.结果:高果糖饮食组胰岛素、胰岛素抵抗指数HOMA及甘油三酯水平较正常对照组均明显升高(均P<0.01),而高果糖饮食+小檗碱组与高果糖饮食组比较上述指标明显下降(51.62±5.68vs64.91±7.87,P<0.01;12.40±1.76vs16.06±3.32,P<0.01;11.16±1.58vs14.46±2.99,P<0.05),小檗碱可促使肝脏表达下降的HNF-4α恢复.结论:小檗碱可改善胰岛素抵抗,其机制可能与促进HNF-4α的表达有关.

肝细胞核因子4α和3β在人主要器官中的表达

目的:观察肝细胞核因子4α(Hepatocyte Nuclear Factor 4α,HNF-4α)和HNF-3β在人主要组织器官中的表达情况,为进一步探索这两个因子与慢性乙型肝炎患者HBV复制之间的可能关系提供理论基础．方法:采用免疫组织化学染色方法检测HNF- 4α和HNF-3β在14例尸解标本的主要器官(肝、脑、肺、肾、心、脾、肠、胰腺、胃和甲状腺)中的表达情况．结果:HNF-4α和HNF-3β在10个器官的表达情况不同(HNF-4α:F=22．479,P<0．01;HNF- 3β:F=13．021,P<0．01)．HNF-4α在肝、肾、心、脾和肠中呈高水平表达,在肺和甲状腺呈低水平表达;HNF-3β在肝、肾、心和胰腺中呈高水平表达,在脾、肺、肠和甲状腺中呈低水平表达;HNF-4α和HNF-3β在脑、胃、阑尾、胸腺、肾上腺和扁桃体中均不表达:上述HNF-4α和HNF-3β高表达组和低表达组的表达水平差异有统计学意义(P<0．05),而高表达组各器官之间的表达水平差异无统计学意义(P>0．05)．结论:人体各组织中HNF-4α与HNF-3β的表达水平不同,在肝脏的表达水平较高,这提示二者有可能参与了HBV的组织特异性复制．

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。

HNF4α和HNF6 mRNA在小鼠肝发育过程中的表达

目的探讨HNF4α和HNF6在肝发育过程中的作用。方法用RT-PCR和原位杂交检测HNF4αmRNA和HNF6mRNA在胚胎第8、9、13、15、17d(E8、E9、E13、E15、E17)、出生后第1d(P1)以及成年小鼠肝中的表达。结果RT-PCR结果显示,HNF4α在肝中的表达始于E9,并持续到新生,至成年时表达减弱。原位杂交结果显示,在胚胎发育的各个阶段多数肝索细胞呈HNF4α阳性反应,成年时仍有少数HNF4α阳性的肝索细胞,而胆管板及胆管上皮细胞、血管内皮细胞、造血细胞等均为阴性。HNF6mRNA的表达在E9开始出现,E13消失,E15又重新出现,并一直维持到出生。E9、E15多数肝索细胞呈HNF6mRNA阳性反应,E17及P1HNF6mRNA在肝索细胞中的反应减弱,胆管板细胞出现强阳性反应。结论HNF4αmRNA表达与肝芽的形成有关,并参与肝干细胞向肝细胞的增殖、分化的过程,其在正常成年肝中的表达可能与肝细胞正常形态的维持有关。HNF6可能在肝干细胞的形成和肝干细胞向胆管细胞的分化,以及胆管细胞的增殖、分化过程中发挥作用,其在正常成年肝中可能介导维持胆管上皮细胞的正常形态。

肝细胞核因子-4α启动子基因多态性与江苏地区非肥胖2型糖尿病患者胰岛素分泌相关

目的:研究肝细胞核因子-4α(hepatocyte nuclear factor-4α,HNF-4α)基因的P2启动子区域的2个单核苷酸多态性(SNP)位点rs1884614和rs2144908与2型糖尿病的相关性。方法:收集2型糖尿病患者328例和非糖尿病患者196例,应用Taq Man SNP Genotyping系统进行rs1884614和rs2144908的基因型多态性分析。并分析它们与患者有关临床代谢指标的关系。结果:两组的基因型分布及等位基因频率差异无统计学意义(P>0.05);但在非肥胖(BMI<25 kg/m^2)患者的OGTT检测中,rs1884614 T/T基因型与较小的血浆胰岛素曲线下面积存在相关性(P<0.05)。结论:HNF-4α基因的P2启动子区的SNP rs1884614可能影响江苏地区非肥胖型2型糖尿病患者的胰岛素分泌。

肝细胞核因子4α与肝细胞癌关系的研究进展

肝细胞核因子4α(HNF4α)是调节肝脏内特异性基因表达的转录因子,在肝细胞发育分化,肝脏脂质、胆固醇代谢及肝脏药物代谢中起重要作用,并且抑制肝脏肿瘤的发生。HNF4α主要通过抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞分化、凋亡,逆转肝细胞上皮-间质转化等过程,影响肝细胞癌(HCC)的发生发展。本文对HNF4α的来源分布、结构特点、生物学功能及其在HCC发生发展中的作用进行了系统综述,旨在探索HNF4α干预HCC的新思路。

HNF4α、GATA-3RORγt表达变化与肝癌发生发展的相关性研究

目的探讨肝细胞核因子4α(HNF4α)、GATA结合蛋白3(GATA-3)、维甲酸孤儿素受体γt(RORγt)与肝癌发生发展的相关性。方法选取我院治疗的肝癌患者57例为研究对象(肝癌组),选取同期非肝癌患者30例作为对照(非肝癌组),采用免疫组化法检测两组肝脏组织HNF4α的表达,采用RT-PCR检测两组血浆GATA-3、RORγt mRNA的表达,分析并比较三个分子表达变化与肝癌发生发展的相关性。结果肝癌组肝脏组织HNF4α高表达率为54.39%,明显低于非肝癌组(P<0.05);肝癌组血浆GATA-3和RORγt mRNA表达量分别为(1.49±0.64)和(72.10±10.13),明显高于非肝癌组(P<0.05);肝脏组织HNF4α、血浆GATA-3、RORγt mRNA表达与患者TNM分期和病理分化程度有关(P<0.05);HNF4α高表达和低表达患者血浆GATA-3、RORγt mRNA表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HNF4α、GATA-3mRNA、RORγt mRNA的表达变化与肝癌的发生发展、TNM分期和病理分化程度相关。

猪HNF-4α基因多态性与肌纤维组织学特性及生长性状的相关性分析

肝细胞核因子-4α(HNF-4α)是肝细胞核因子(hepatocyte nuclearfactor,HNF)家族成员之一,可在肝脏内高表达,该家族基因对肝细胞的分化调控起关键作用,同时参与肝脏糖、脂代谢相关基因特异性表达的调控。HNF-4α基因参与调节生命代谢活动的诸多方面,并且对动物生长发育过程起着重要作用。此研究采用PCR-SSCP的方法分析HNF-4α基因单核苷酸多态性与生长性状的相关性。结果发现SH1多态位点的BB基因型对法系长白猪个体的出生体长的效应值最大。SH2多态位点的AB基因型对法系长白猪个体的初生重的效应值最大。同时,该位点与大民猪肌纤维组织学特性也存在显著相关。AB型个体的肌纤维直径和肌纤维横截面积显著低于AA和BB型(P<0.05)。

非酒精性脂肪性肝病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α的表达

目的:探讨高脂饮食所致大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)肝细胞核因子4α(HNF-4α)mRNA的表达及在NAFLD发病机制中的作用。方法:24只Wistar大鼠随机分为模型组和对照组(各12只),通过高脂饮食建立NAFLD大鼠模型,并在造模第8、12周末分批处死大鼠,同期设正常饮食组作为对照组。检测大鼠血清甘油三酯(TG)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙氨酸转氨酶(ALT)及内毒素(ET)等指标,测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS),并计算胰岛素抵抗指数(IRI);采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测肝脏HNF-4αmRNA的表达;取肝标本做HE染色,观察其病理变化。结果:模型组大鼠肝脏HNF-4αmRNA表达量于第8周时开始降低,与同期对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);同时血清TNF-α、IRI及ET与同期对照组相比明显升高(P<0.05),HNF-4α与TNF-α、IRI、ALT、TG及ET均呈负相关(P<0.05)。结论:胰岛素抵抗(IR)可能是NAFLD发生、发展的基础,NAFLD大鼠肝脏HNF-4α可能通过一定机制参与了IR及炎症反应,进而影响了NAFLD的发生、发展。

肝细胞核因子4α与糖尿病

肝细胞核因子4α(HNF-4α)属于核受体超家族成员,是在肝、肠、胰等组织器官中表达的一种细胞特异性转录因子。HNF-4α被认为在涉及肝脏、胰脏β细胞的发育、分化及功能的基因表达中有调节作用,并能维持葡萄糖稳态。它与其他HNF组成HNFs转录调节网络,参与组织分化和能量代谢。HNF-4α突变型可诱发青少年发病的成年型糖尿病(MODY1)。近年来研究表明,HNF-4α基因的单核苷酸多态性(SNPs)可能与2型糖尿病易感性有关。全面系统分析HNF-4α在2型糖尿病发病中的遗传病理学机制,对预防和治疗2型糖尿病具有十分重要的意义。

过表达肝细胞核因子4α脐带间充质干细胞促进小鼠大部肝切后肝再生

目的：探讨人源性脐带间充质干细胞（UC-MSC）以及过表达肝细胞核因子4α（HNF4α）的UC-MSC能否促进小鼠大部肝切后肝再生。方法体外分离、培养、鉴定人UC-MSC，慢病毒转染过表达HNF4α。体外收集细胞培养上清液，将L02与上清液共培养，通过细胞增殖实验试剂盒（CCK8）检测细胞增殖活性。体内实验建立肝大部切除模型（约70%），分别经尾静脉向肝切除小鼠移植0.9%生理盐水（NS）、MSC、MSC-HNF4α。48h后比较3组肝切后肝再生的变化，通过免疫组化来观察肝标本Ki67的表达。结果成功分离鉴定UC-MSC，并且成功建立稳定过表达HNF4α的MSC。体外实验MSC组和MSC-HNF4α组中L02的增殖能力都明显高于NS组（P＜0.01），MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。同样体内实验相对于NS组，经MSC或MSC-HNF4α细胞处理的肝脏，其Ki67的表达明显高于NS组（ P＜0.01），同样MSC组高于MSC-HNF4α组（P＜0.05）。结论 UC-MSC和过表达HNF4α的MSC都分泌一系列因子促进肝再生。

苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制载脂蛋白(a)表达

目的 研究苦瓜蛋白（MD28）对HepG2细胞载脂蛋白（a）[Apo（a）]表达的影响,探索其作用机制。 方法 离心、超滤、透析、阳离子交换色谱、反相高效液相色谱等方法提取苦瓜蛋白；MTT法检测苦瓜蛋白处理HepG2细胞后细胞存活率；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Western blot分别检测Apo（a）、法尼酯X受体（FXR）、肝细胞核因子4α（HNF4α）的mRNA和蛋白表达水平；qRT-PCR检测hsa-miR-23b-3p的表达水平,采用小干扰RNA转染沉默FXR。 结果 与对照组相比,0.1、0.2、0.4、0.8及1.6 g/L苦瓜蛋白处理HepG2细胞24 h,细胞存活率无统计学差异；与对照组相比,苦瓜蛋白呈剂量和时间依赖性抑制Apo（a）表达,以1.6 g/L苦瓜蛋白作用48 h的效果最为显著；苦瓜蛋白上调FXR和hsa-miR-23b-3p表达水平,下调HNF4α表达水平,沉默FXR则逆转苦瓜蛋白的上述作用,沉默hsa-miR-23b-3p能逆转苦瓜蛋白对HNF4α的下调作用,但对FXR的表达无影响。 结论 苦瓜蛋白通过FXR/miR-23b-3p/HNF4α途径抑制HepG2细胞Apo（a）的表达,有望成为临床降低脂蛋白（a）的候选药物。

肝癌组织HNF4αmRNA定量检测方法的建立与初步应用

目的建立一种定量检测肝细胞癌(HCC)组织肝细胞核因子4α(HNF4α)m RNA的方法。方法取手术获得的HCC组织16例,提取总RNA,逆转录PCR扩增获得全长HNF4αm RNA对应c DNA产物,经TA克隆后,测序确认。根据获得序列,设计检测HNF4αm RNA引物及MGB荧光探针。以体外转录HNF4αm RNA为标准品,建立一步法逆转录荧光定量PCR检测方法,同时设定β-actin m RNA为内参对照,最终计算得到组织HNF4αm RNA水平。采用免疫组化染色检测HNF4α蛋白表达,比较HNF4αm RNA水平与HNF4α蛋白表达的对应结果。结果 HCC组织HNF4αm RNA定量标准曲线斜率为-3.237,相关系数r值达0.994,β-actin m RNA定量标准曲线斜率为-3.037,相关系数r值为0.996,表明建立的方法可用于检测HNF4αm RNA定量(V-4α值),16例HCC组织HNF4αm RNA与HNF4α蛋白表达结果呈一致性对应关系。结论我们初步成功建立了定量检测HCC组织HNF4αm RNA水平方法,其意义还需要进一步研究。

核受体HNF4α通过调控雄激素受体表达促进去势抵抗性前列腺癌进展

背景与目的:核受体肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)作为重要的转录因子,其在前列腺癌中的作用及调控机制尚不清楚。探讨HNF4α在前列腺癌去势抵抗进展中的作用及调控机制。方法:采用Oncomine数据库分析HNF4α在前列腺癌临床样本中的表达水平,并通过cBioPortal数据库分析HNF4α在不同类型前列腺癌中的表达特征及其对前列腺癌患者总生存率的影响。构建HNF4α慢病毒表达载体并转染到HEK-293细胞中用于慢病毒包装,上调LNCaP细胞中HNF4α表达,通过实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)分析其对雄激素受体(androgen receptor,AR)表达水平的影响。通过萤光素酶报告基因实验分析HNF4α对AR表达调控的影响。结果:HNF4α基因在前列腺癌临床样本中表达上调,而且在去势抵抗性前列腺癌和神经内分泌前列腺癌样本中异常改变比例显著升高,与患者的总生存率呈负相关。HNF4α的外源性表达显著促进AR表达,并可能通过直接结合AR启动子的方式调控AR的基因转录过程。结论:核受体HNF4α在前列腺癌中表达上调并与前列腺癌恶性进展呈正相关,很可能通过直接靶向AR启动子促进其表达,HNF4α有望成为前列腺癌新的治疗靶点。

TGFβ、HNF4α在原发性肝癌中的表达及临床意义

目的研究TGFβ和HNF4α在肝癌及癌旁组织中的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用和意义。方法采用qRT-PCR和Western blotting方法检测54例原发性肝癌患者肝癌及对应癌旁组织中TGFβ和HNF4αmRNA及蛋白表达水平;免疫组化检测所有肝癌组织中TGFβ和HNF4α蛋白的表达水平,统计学分析两者与肝癌患者临床病理特征的关系。结果 (1)与癌旁组织比,TGFβmRNA在肝癌组织中表达升高[(0.294±0.142)vs(0.231±0.149),P=0.020];HNF4αmRNA在肝癌组织中表达降低[(0.104±0.130 vs(0.151±0.079),P=0.037];(2)Western blotting结果显示:与癌旁组织比,TGFβ蛋白在肝癌组织中高表达[(0.224±0.060)vs(0.051±0.019),P=0.025],HNF4α蛋白在肝癌组织中表达下降[(0.103±0.033)vs(0.315±0.024),P=0.017];(3)免疫组化检测显示,肝癌组织中TGFβ蛋白阳性表达率66.7%,HNF4α蛋白阳性表达率为57.4%。在肝癌组织中TGFβ蛋白表达水平与肿瘤分化(χ~2=4.339,P=0.037)及TNM分期(χ~2=4.488,P=0.034)相关;HNF4α蛋白与肿瘤分化(χ~2=5.032,P=0.025)相关。TGFβ蛋白与HNF4α蛋白呈负相关(r=-0.291,P=0.033)。结论 TGFβ和HNF4α基因相互调控EMT进程,参与原发性肝癌的发生发展。

2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α表达的变化

目的:探讨2型糖尿病大鼠肝脏肝细胞核因子-4α(HNF-4α)表达的变化和意义。方法:24只雄性SD大鼠随机分为正常对照组和糖尿病模型组,每组12只大鼠。链脲佐菌素连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型。采用SP免疫组织化学染色、Western Blotting法、RT-PCR法检测大鼠肝脏HNF-4α的表达情况。结果:与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠肝脏HNF-4α蛋白和m RNA的表达均明显升高(P<0.01)。结论:肝脏HNF-4α表达的升高可能参与了2型糖尿病时肝脏损伤的发生发展。

基于报告基因系统的肝细胞核因子4α活性检测体系的建立

目的建立一个基于荧光素酶报告基因系统的肝细胞核因子4α(HNF4α)活性检测系统,筛选可调控HNF4α活性的小分子化合物。方法采用亲和层析法纯化HNF4α蛋白,行蛋白热迁移实验检测相关DNA片段及小分子化合物与HNF4α蛋白的直接相互作用。分别构建含有3个拷贝和9个拷贝的Ninjurin1(NINJ1)基因启动子区HNF4α反应元件的荧光素酶报告基因质粒pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p,转染肝癌细胞,采用荧光素酶报告基因法检测肝癌细胞内HNF4α转录活性的改变,qPCR检测小分子化合物木犀草素或阿尔维林处理后肝癌细胞中HNF4α及下游基因的表达情况,荧光素酶报告基因法检测小分子化合物处理后细胞内HNF4α转录活性的改变。结果蛋白热迁移实验证实,NINJ1基因启动子区HNF4α的DNA结合片段可与HNF4α蛋白结合。在过表达HNF4α的肝癌细胞中,pGL3-NINJ1-3p和pGL3-NINJ1-9p均可检测到肝癌细胞中HNF4α活性的改变,且pGL3-NINJ1-9p较pGL3-NINJ1-3p的检测灵敏度更高(P<0.01)。木犀草素和阿尔维林与HNF4α蛋白存在直接相互作用,分别下调和上调HNF4α靶基因;pGL3-NINJ1-9p可检测到木犀草素和阿尔维林对HNF4α转录活性的影响。结论利用报告基因载体pGL3-NINJ1-9p成功建立了HNF4α活性的检测系统,为筛选调控HNF4α活性的小分子化合物等提供了基础工具。

饥饿状态下HNF4α对MTP的表达调控

肝细胞核因子4α(HNF4α)是肝脏中一种重要的转录因子,其参与多个代谢途径的调控.微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)是极低密度脂蛋白装配和分泌过程的限速酶.C57BL/6J小鼠中研究发现,饥饿可以诱导肝细胞MTP基因的表达.在HepG2细胞中进一步证实饥饿可以诱导MTP表达,同时HNF4α表达也显著上升.实验证实MTP是HNF4α的靶基因之一,用腺病毒介导的HNF4α过表达和HNF4α的激动剂均显著提高MTP的表达;HNF4α特异性siRNA抑制HNF4α的表达,MTP的mRNA和蛋白水平相应下调.结果证明,在饥饿状态下可以诱导MTP和HNF4α的表达,MTP的表达量上升是受到HNF4α的转录调控.