朱砂七化学成分及其体外细胞毒性、抗病毒活性研究

目的研究朱砂七Fallopia multiflora var.ciliinervis(Nakai)Yonekura&H.Ohashi化学成分及其体外细胞毒性、抗病毒活性。方法朱砂七75%乙醇提取物采用硅胶柱层析、半制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用MTT法测定体外细胞毒活性,CCK-8法测定体外抗病毒活性。结果从中分离得到20个化合物,分别鉴定为3-acetyl-4,5-dimethoxy-benzoic acid(1)、没食子酸甲酯(2)、没食子酸(3)、对羟基苯甲醛(4)、原儿茶酸(5)、3,4-二羟基苯甲醛(6)、丁香酸(7)、4-羟基-3-甲氧基苯甲酸(8)、p-hydroxyphenethyl-O-β-D-glucoside(9)、2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-ethyl-O-β-D-glucoside(10)、反式-白藜芦醇(11)、顺式-白藜芦醇(12)、白藜芦醇-3-O-β-D-(2′-O-反式-肉桂酰基)-葡萄糖苷(13)、白藜芦醇-3-O-β-D-(2′-O-顺式-肉桂酰基)-葡萄糖苷(14)、白藜芦醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(15)、N-反式阿魏酰-3-甲氧基酪胺(16)、poke-weed cerebroside(17)、何首乌乙素(18)、9,10,13-三羟基十八烷酸(19)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(20)。化合物11对HCT116、SW620细胞的IC 50值分别为(30.87±2.7)、(56.11±0.49)μmol/L,化合物12对EV-A71病毒的抑制率为50.21%。结论化合物1为新天然产物,化合物9~10为首次从蓼科植物中分离得到,化合物8、12、14、17、19为首次从何首乌属植物中分离得到,化合物2、4~7、11、18为首次从该植物中分离得到。化合物11具有细胞毒性,化合物12具有抗病毒活性。

何首乌对高血脂小鼠的降脂作用及转录组学研究

研究何首乌对高血脂小鼠血清的影响,并探讨何首乌治疗高血脂症小鼠肝脏的转录组变化。60只昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、高血脂模型组和高、中及低浓度何首乌提取液组。除正常对照组外,其他4组采用高脂饲料喂养,诱导建立高血脂模型。8周后高、中及低浓度何首乌提取液组分别采用1.0 g/mL、0.6 g/mL和0.3 g/mL腹腔注射(0.1 mL/10 g)。正常对照组,高血脂模型组腹腔注射等体积生理盐水,每天给药1次,持续60 d。摘眼球取血,ELISA法检测血清TC、TG、LDL-C和HDL-C水平。采用RNAseq测序方法检测小鼠肝组织基因转录水平。生物信息学方法分析各组样本间差异表达基因,并通过实时荧光定量PCR验证部分基因的表达。与模型对照组相比,何首乌提取液高浓度组TC、TG和LDL-C水平显著降低,而HDL-C水平明显升高(P<0.05)。转录组测序共检测到787个显著差异表达的基因,其中上调基因260个,下调基因527个。GO分析表明,差异表达基因富含了532种细胞组分类别,参与了933个分子功能和2869个生物过程。KEGG富集通路分析表明,何首乌降脂过程参与多条脂质代谢通路,如脂肪酸代谢、亚油酸代谢和花生四烯酸代谢等。转录因子分析共发现67个具有显著差异的转录因子。高浓度何首乌提取液对高血脂模型小鼠有明显的降脂作用,其降脂作用可能是通过调控脂质代谢相关基因表达实现的。

何首乌及其常见混淆品的matK基因序列分析及鉴别

目的:比较何首乌与其常见混淆品的matK基因序列,从分子水平对中药材何首乌进行鉴定。方法:改良的CTAB法提取基因组DNA,用一对matK通用引物进行PCR扩增,TA克隆后进行测序和序列分析。结果:除毛脉蓼之外,其他混淆品与正品何首乌间的matK基因序列差异较大,不论是核苷酸替代数还是遗传距离,都远远大于不同居群的何首乌之间;进一步比对分析,发现了可以快速鉴别何首乌及其同属混淆品的鉴别位点;运用matK序列分析成功地对3种市售何首乌药材进行了真伪鉴定。结论:根据matK序列特征,能有效区分何首乌及其常见混淆品,matK序列可以作为何首乌药材鉴定的分子标记。

基于psbA-trnH分析的何首乌野生居群遗传多样性

对产自不同省区的何首乌〔Fallopia multiflora(Thunb.)Harald.〕17个野生居群85个单株的psbA-trnH序列进行了扩增和分析,在此基础上分析了居群间的遗传多样性,并采用NJ法对85个单株进行了聚类分析。结果表明:供试85个单株的psbA-trnH序列长度为384 bp;其中,变异位点为167 bp,简约信息位点为53 bp,分别占序列总长度的43.5%和13.8%。变异类型主要为碱基缺失和替换;变异位点主要集中在235～281 bp区域,根据位点变异情况可将17个居群大体分为3类。各居群间的遗传距离为0.000～0.172,其中,贵州居群与其他16个居群间的遗传距离为0.167～0.172,而其他16个居群间的遗传距离为0.000～0.017。17个居群间的核苷酸多样性指数(Pi)、遗传分化系数(Nst)和基因流(Nm)分别为0.028 56、0.918 68和0.04;除贵州居群外其他16个居群的Pi、Nst和Nm分别为0.015 68、0.837 19和0.10;贵州居群与其周边省区(四川、云南、广西、湖南和湖北)居群的Pi、Nst和Nm分别为0.047 99、0.937 62和0.03。在NJ系统树上,17个居群可聚为4支,且大部分居群的供试单株聚在同一分支中;仅贵州居群单独聚为一支,与序列分析的划分结果基本一致。由研究结果可见:野生何首乌居群总遗传变异的91.868%来自居群间,8.132%来自居群内,居群间的基因交流较少;除贵州居群外其余16个居群的整体遗传多样性水平偏低,说明何首乌居群整体多样性水平在很大程度上受贵州居群的影响。

基于rDNA ITS序列的何首乌PCR-RFLP分子鉴别

对何首乌及其常见混淆品的核糖体DNA内转录间隔区（rDNAITS）序列进行了测序分析．结果表明：何首乌与其混淆品毛脉蓼、翼蓼及耳叶牛皮消ITSI区的差异率分别为6．91％、18．10％和42．20％，ITS2区的差异率分别为10．00％、19．40％和43．90％；而何首乌种内各居群间ITS1和ITS2区的差异率分别为0．00％～2．13％和0．00％～1．03％．基于何首乌及其混淆品的rDNAITS序列的差异，找出一个位于ITS2间隔区的何首乌特征性M6I酶切位点，用M6I酶对何首乌rDNAITS序列扩增产物酶切后得到含约531bp和109bp的两片段的聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）图谱，而其混淆品的rDNAITS序列扩增产物不能被NsbI酶切，故图谱呈单一条带．利用建立的PCR．RFLP方法可以很好地区分何首乌及其混淆品．

不同地区何首乌无机元素含量的比较

采用ICP法测定了不同地区何首乌植物及其生境土壤中的15种元素(Al、B、Ba、Ca、Cu、Fe、K、Mg、Mn、Na、Ni、P、Sr、Ti、Zn),分析比较了各种元素在不同地区何首乌体内和生境土壤中的分布规律及不同地区何首乌对无机元素的吸收富集能力.结果表明,不同地区何首乌和土壤中无机元素含量存在着显著差异,德庆、井冈山、靖西三地何首乌的Mn含量较高;不同地区何首乌对元素的富集系数无显著性差异,而何首乌对不同无机元素的富集系数则有显著差异,主要表现在对Ca、K、Mg、Sr的吸收富集能力较强.

基于trnL-trnF序列分析的何首乌PCR-RFLP分子鉴别

目的:建立何首乌(Fallopia multiflora)DNA分子鉴别技术。方法:对何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF(trnL基因和trnF基因间隔区)序列进行比较分析。结果:何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF差异率为2.1%～22%,何首乌种内各居群间trnL-trnF差异率为0%～1.5%。基于何首乌与其近缘种及其混淆品的trnL-trnF序列的差异,找出一个位于trnL5'-trnL3'间区的何首乌特征性Xba I酶切位点(T↓CTAGA),用Xba I酶对不同采集地的何首乌样品trnL-trnF序列扩增产物酶切后均得到含约804～819 bp和256 bp两个片段的PCR-RFLP图谱,而其混淆品trnL-trnF序列扩增产物因不能被Xba I酶切,图谱呈单一条带。结论:利用建立的PCR-RFLP方法可以很好地区分何首乌及其混淆品植物。

何首乌中Ⅲ型PKS基因的克隆和表达

为利用基因工程技术调控何首乌的次生代谢途径,采用互补DNA末端快速扩增技术以及生物信息学方法,从传统中药材何首乌中克隆到一种Ⅲ型PKS基因FmPKS2(GenBank登录号:GQ984139),其互补DNA全长1498bp,编码392个氨基酸.生物信息学预测其蛋白相对分子质量为43160,等电点为5.85,亲水系数为-0.154,含有几个较强的疏水区域.系统进化树显示,FmPKS2与蓼科植物的查尔酮聚合酶聚类关系最近.该基因在何首乌不同组织中均有表达,其中在块根中表达量最高.

超声波-微波协同提取何首乌多糖的工艺研究

研究了超声波-微波协同提取何首乌[Fallopia multiflora(Thunb.)Harald.]多糖的最佳工艺条件,以何首乌多糖提取率为综合指标,考察料液比、提取次数、超声时间、微波时间4个因素对提取效果的影响,在此基础上,利用中心组合试验设计对提取工艺进行优化,最佳工艺条件为料液比1∶21(g∶m L),超声时间15 min,微波时间3 min,提取1次,在此条件下多糖实际提取率可达19.74%。

何首乌叶原生质体制备与融合研究

[目的]研究何首乌叶片原生质体的制备和融合方法。[方法]用机械法制备何首乌叶片的原生质体,用PEG结合高Ca2+-高p H诱导融合法来诱导其原生质体,研究原生质体的融合现象。[结果]何首乌叶片在25℃和35%的蔗糖溶液中处理30 min能够制备出较多的完整原生质体。用20%PEG融合液处理原生质体20min能够有效地诱导何首乌原生质体的融合,2个细胞的融合效率为11.7%,表明用机械法制备的原生质体也是有活性的。[结论]该技术为何首乌原生质体培育奠定了基础。

长期食用何首乌对小鼠造血系统的影响

目的探讨长期食用何首乌后,小鼠造血系统的变化。方法小鼠随机分为2组,对照组,喂饲正常饲料;何首乌饲料组,喂饲添加何首乌的饲料,10个月后,处死小鼠,应用流式细胞仪分析外周血、脾脏、胸腺及骨髓中各种细胞。结果何首乌饲料组小鼠,脾脏B细胞增多,胸腺CD4+细胞增多,CD8+细胞减少;骨髓造血干细胞显著减少,其中静止期细胞增多,增殖分裂期细胞减少。结论长期适量食用何首乌有助于减缓小鼠造血系统的衰老,维持造血系统稳定。

复方降血脂丸质量标准研究

目的建立复方降血脂丸的质量标准。方法对方中丹参、决明子、何首乌、山楂等进行薄层色谱(TLC)鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法对方中君药决明子所含药效成分大黄酚进行含量测定。结果 TLC法斑点显色清晰,重复性、分离度均较好;大黄酚质量浓度在1.91~122.28μg/mL范围内与峰面积线性关系良好,r=0.999 6(n=7);平均加样回收率为108.01%,RSD为1.16%(n=6)。结论该研究中确立的定性、定量检测方法简便易行,重复性好,结果准确可靠,可用于复方降血脂丸的质量控制。

何首乌种特异DNA探针的筛选

为筛选得到何首乌(Fallopia multiflora)种特异DNA探针,通过何首乌gDNA和其近缘植物毛脉蓼(F.multiflora var.cillinerve)gDNA之间的的抑制消减杂交(Suppression subtraction hybridization,SSH)得到何首乌的差减片段,再将标记的差减片段和多物种gDNA阵列杂交筛选得到了4条何首乌DNA探针,探针通过反向斑点杂交检测,能很好地区分何首乌及其混伪品。获得的探针在中药鉴定基因芯片的制备及何首乌种质和生药鉴定方面具应用前景。

根茎类中药精准煮散饮片探索实例—制何首乌

目的:本文对制何首乌精准煮散饮片用药形式进行探索研究。方法:比较制何首乌饮片及煮散饮片的出膏率;比较3批制何首乌饮片及采用相同饮片制备的煮散饮片质量的均一性,并对其化学指纹图谱进行相似度评价,采用相对峰面积比较共有峰含量和质量均一性。应用ITS2序列作为DNA条形码对何首乌原药进行鉴定。结果:制何首乌精准煮散饮片出膏率为原饮片的2.5倍;3批原饮片煎煮液二苯乙烯苷平均含量为3.56±2.61 g·mg-1,RSD为73.28%,煮散饮片煎煮液二苯乙烯苷平均含量为13.23±0.37 g·mg-1,RSD为2.82%;煮散饮片与原饮片的指纹图谱相似度基本一致,但煮散饮片各共有峰的含量、均一性明显提高。ITS2序列对何首乌药材可实现准确鉴定。结论:制何首乌煮散饮片显著提高煎煮率及质量均一性,可节约资源,提高临床疗效。

毛脉蓼化学成分的研究

目的研究毛脉蓼Fallopia multiflora(Thunb.)Harald.var.cillinerve(Nakai)A.J.Li的化学成分。方法毛脉蓼干燥块根的95%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。结果从中分离得到10个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、没食子酸(3)、琥珀酸(4)、α-D-葡萄糖(5)、annulatin 3'-O-β-D-xyloside(6)、山柰苷(7)、桦褐孔菌二糖(8)、正丁基-β-D-吡喃果糖苷(9)、赤藓醇(10)。结论化合物6~10为首次从何首乌属植物中分离得到,化合物3~10为首次从该植物中分离得到。

何首乌颗粒剂对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆及miRNA-101表达的影响

目的研究何首乌对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及双侧海马区mi RNA-101表达的影响,并探讨其作用机制。方法将120只SD大鼠随机分为4组,每组30只,分别为假手术组、石杉碱甲组、模型组、中药组。除假手术组外,使用化学试剂冈田酸(OA)注射SD大鼠杏仁核部位,形成阿尔茨海默病模型。造模后每组分别予以相应干预(假手术组与模型组均灌等容量生理盐水)。干预21 d结束后,运用Morris水迷宫作为行为学检测方法,评测大鼠学习记忆能力,行为学观察共进行5 d,结束后处死实验大鼠,取双侧海马运用RT-PCR进行mi RNA-101半定量检测。结果经21 d干预后,与模型组相比,中药组与石杉碱甲组的阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力均更强,其差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,中药组与石杉碱甲组大鼠双侧海马区mi RNA-101的相对表达量增加(P<0.01)。结论何首乌能显著改善阿尔茨海默病模型大鼠的学习记忆能力,对阿尔茨海默病有一定的治疗作用;通过提高模型大鼠海马区mi RNA-101的含量来改善症状可能是其作用机制之一。

林下种植黄精、何首乌及天门冬对土壤养分的影响

为了了解林下种植黄精、何首乌及天门冬对林地土壤养分的影响,为以后大规模发展林下中药材种植提供一定的理论指导,研究黄精等3种中药材根际土壤的养分变化。结果表明,黄精能够使根际土壤酸化,对照土壤中有机质含量较低,仅为34.0 g/kg,无法满足植物的生长需求。由于受有机质含量的影响,水解性氮总体上也偏低,有效磷和速效钾基本上能够满足这3种药材的生长。由于针叶难以腐化成有机质,今后应该选择阔叶林地或混交林地作为种植地,也可以通过人工增加土壤有机质含量来改良土壤性质。

何首乌种子萌发条件的优化和育苗条件的筛选

以野生何首乌(Fallopia multiflora)种子为试材,采用光照培养箱进行萌发试验,设置了4个温度条件(20~25、20~30、25℃和25~30℃),2种发芽床(纸上和沙上),3个浓度赤霉素溶液(0.125、0.250、0.500 mg·mL^(-1),蒸馏水作对照)浸种;采用育苗盘进行育苗试验,设置了3种育苗基质(塘泥、沙、塘泥加沙混合)和3个播种深度(0、0.5、1.0 cm);以发芽势、发芽率、发芽指数、活力指数、胚根和苗长等指标,考察了各组种子萌发和出苗效果,以期为何首乌种子质量检测和育苗栽种提供参考依据。结果表明:温度考察中,何首乌种子在变温20~25℃条件下获得最高发芽率(75.8%),恒温25℃(TP)培养时发芽势最高(P<0.05);3个浓度赤霉素溶液浸种均能显著提高发芽率,浓度为0.500 mg·mL^(-1)时发芽率最高(87.0%)。育苗基质选择试验中塘泥培养出苗率最高,沙子培养的幼苗胚根最长(P<0.05)。采用塘泥为基质,播种深度0.5 cm时有最高的出苗整齐度(GE),播种深度增加至1.0 cm时出苗率显著降低。

桑芪首乌膏方对老年高血压患者生命质量影响的临床研究

目的观察名老中医陆家龙教授经验方"桑芪首乌膏方"对老年高血压患者生命质量的影响。方法将200例老年高血压患者采用随机、对照原则,分为治疗组100例和对照组100例,对照组予常规口服降压药治疗;治疗组在对照组治疗的基础上加用桑芪首乌膏方,疗程均为28 d;比较2组治疗前后中医症状改善情况、健康状况问卷(SF-36)评分的变化情况。结果治疗组总有效率为89.5%,对照组总有效率为41.3%,提示治疗组的疗效明显优于对照组(P<0.01);2组SF-36部分因子评分治疗后比较,治疗组对改善躯体疼痛、一般健康状况、精力、精神健康等因子优于对照组(P<0.05)。结论桑芪首乌膏方能改善老年高血压患者的全身不适症状,提高患者的生命质量。

首乌制剂相关肝损伤伴或不伴自身抗体阳性患者临床特征比较

目的 基于倾向性评分匹配对比分析首乌制剂相关肝损伤伴自身抗体阳性患者与不伴自身抗体阳性患者的临床特征,探讨合并自身抗体对首乌制剂相关肝损伤患者预后的影响。方法 选取首都医科大学附属北京地坛医院2008年8月—2021年6月首乌制剂相关肝损伤住院患者364例,根据是否检测到自身抗体分为自身抗体阴性组(H0组)和自身抗体阳性组(H1组),其中H0组157例,H1组207例,采用倾向性评分匹配方法进行混杂因素校正,比较两组患者肝损伤达峰值时生化指标、肝损伤严重程度、肝损伤分型及疾病转归情况的差异。正态分布的计量资料两组间比较采用t检验;非正态分布的计量资料两组间比较采用Mann-Whitney U秩和检验。计数资料或等级资料组间比较采用χ^(2)检验或Mann-Whitney U秩和检验。应用Cox回归模型分析肝功能恢复的影响因素。通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并用Log-rank检验进行比较。结果 倾向性评分匹配后,成功匹配98对病例。两组肝损伤达峰值时生化指标比较结果显示,H1组ALP、球蛋白、总胆汁酸水平均高于H0组,Alb水平低于H0组,差异均有统计学意义(P值均<0.05)。两组患者肝损伤分型差异无统计学意义(P>0.05)。肝损伤严重程度方面两组比较差异有统计学意义(Z=1.710,P=0.045)。自身抗体以抗核抗体(ANA)阳性为主,占比49%;不同ANA抗体滴度患者肝损伤严重程度比较,差异有统计学意义(Z=20.252,P=0.001)。疾病转归以半年内肝功能恢复正常进行比较,H0、H1组半年肝功能复常率分别为90.8%和75.5%,H1组肝功能复常率偏低(χ^(2)=8.199,P=0.004)。Cox回归分析显示自身抗体(HR=5.248,95%CI:1.554~17.718,P=0.008)和ALP(HR=1.013,95%CI:1.002~1.025,P=0.026)是肝功能恢复的独立危险因素。Kaplan-Meier生存曲线结果显示,半年后自身抗体阳性组患者肝功能未恢复的风险较自身抗体阴性组更高(χ^(2)=8.802,P=0.003)。结论 自身抗体对首乌制剂相关肝损伤分型无明显影响,与自身抗体阴性的首乌制剂肝损伤患者相比,伴自身抗体阳性的首乌制剂肝损伤患者有更加严重的肝损伤以及更明显的慢性化倾向。